王忠超，李 敏，張 彬，任立群，額 都，張秋麗，秀 蘭，劉一飛，劉藍(lán)濤

（1.長(zhǎng)春醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校病理學(xué)教研室，吉林 長(zhǎng)春130031；2.吉林大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)藥理與毒理學(xué)教研室，吉林 長(zhǎng)春130051；3.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院心胸外科，內(nèi)蒙古 通遼028007；4.內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙西醫(yī)結(jié)合藥物研究所，內(nèi)蒙古 通遼028007）

蒙藥乳腺－Ⅰ號(hào)對(duì)乳腺增生大鼠抗氧化能力、乳腺組織雌激素受體和孕激素受體表達(dá)的影響

王忠超1，李 敏2，張 彬3，4，任立群2，額 都3，4，張秋麗3，4，秀 蘭3，4，劉一飛3，劉藍(lán)濤3

（1.長(zhǎng)春醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校病理學(xué)教研室，吉林 長(zhǎng)春130031；2.吉林大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)藥理與毒理學(xué)教研室，吉林 長(zhǎng)春130051；3.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院心胸外科，內(nèi)蒙古 通遼028007；4.內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙西醫(yī)結(jié)合藥物研究所，內(nèi)蒙古 通遼028007）

目的：觀察蒙藥乳腺－Ⅰ（M－Ⅰ）號(hào)對(duì)乳腺增生大鼠體內(nèi)抗氧化能力及乳腺組織雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）表達(dá)的影響，為藥物的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：48只雌性未孕Wistar大鼠，隨機(jī)選出8只作為正常對(duì)照組，其余動(dòng)物每天肌肉注射苯甲酸雌二醇（0.5 mg·kg－1）1次，連續(xù)25 d，隨后每天肌肉注射黃體酮（4 mg·kg－1）1次，連續(xù)5 d，復(fù)制大鼠乳腺增生模型，同時(shí)正常對(duì)照組大鼠肌肉注射生理鹽水。模型復(fù)制成功后，隨機(jī)分為5組，模型對(duì)照組大鼠給予生理鹽水灌胃；陽(yáng)性藥對(duì)照組大鼠給予三苯氧胺1.8 mg·kg－1灌胃；M－Ⅰ號(hào)低劑量組、中劑量組和高劑量組大鼠分別給予 M－Ⅰ號(hào)0.5、1.0和3.0 g·kg－1灌胃。給藥結(jié)束后，檢測(cè)各組大鼠乳頭高度，觀察大鼠乳腺組織病理學(xué)特征，檢測(cè)大鼠血清及乳腺組織中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH－Px）水平，Western blotting法檢測(cè)各組大鼠乳腺組織ER和PR的表達(dá)水平。結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠乳頭高度仍顯著增高（P＜0.01），光鏡下觀察乳腺組織病理改變明顯，血清SOD和GSH－Px水平均顯著降低（P＜0.05），MDA水平顯著升高（P＜0.05），乳腺組織ER、PR的蛋白表達(dá)量顯著增加（P＜0.01）。與模型對(duì)照組比較，M－Ⅰ號(hào)各劑量組大鼠乳頭高度明顯偏小（P＜0.05或P＜0.01）；乳腺組織病理學(xué)改變明顯減輕，M－Ⅰ號(hào)高劑量組大鼠乳腺組織結(jié)構(gòu)接近正常對(duì)照組；血清及乳腺組織中SOD和GSH－Px水平較模型對(duì)照組均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），MDA水平顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），乳腺組織中ER和PR的蛋白表達(dá)水平亦顯著降低（P＜0.01）。結(jié)論：M－Ⅰ號(hào)對(duì)乳腺增生大鼠有較好的治療作用，其治療機(jī)制可能與增強(qiáng)乳腺增生大鼠體內(nèi)抗氧化能力、降低乳腺組織中ER和PR表達(dá)水平有關(guān)。

大鼠，Wistar；蒙藥乳腺－Ⅰ號(hào)；雌激素；乳腺增生；雌激素受體

在雌激素周期性的過(guò)度刺激下，乳腺組織過(guò)度增生而復(fù)舊不全，久之便形成乳腺增生癥（hyperplasia of mammary glands，HMG），其本質(zhì)是非感染性慢性炎癥及非腫瘤性腫物的病變。西醫(yī)多應(yīng)用手術(shù)切除增生腫塊治療乳腺增生癥，由于手術(shù)治療易于復(fù)發(fā)且為有創(chuàng)治療，患者多不易接受［1］。藥物治療有溴乙淀、他莫昔芬等，雖可緩解患者部分癥狀，但副作用及并發(fā)癥頗多，故應(yīng)用受到一定限制［2］。蒙醫(yī)藥對(duì)乳腺增生的治療有獨(dú)到之處。蒙醫(yī)認(rèn)為：乳腺增生癥屬蒙醫(yī) “婦血癥”范疇，是由于月經(jīng)期或產(chǎn)后情志不暢，飲食不節(jié)，過(guò)食肥甘厚味，起居不當(dāng)或亂用藥物等原因所致。蒙藥乳腺－Ⅰ（M－Ⅰ）號(hào)是內(nèi)蒙古自治區(qū)的傳統(tǒng)秘方，一直作為院內(nèi)制劑應(yīng)用于臨床。在前期研究［3－4］中，本室通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)M－Ⅰ號(hào)進(jìn)行了初步藥效觀察，M－I號(hào)處理后的大鼠乳腺組織經(jīng)熒光差異雙向凝膠電泳（DIGE）和質(zhì)譜鑒定顯示：M－Ⅰ號(hào)能通過(guò)調(diào)節(jié)乳腺組織中的多種蛋白質(zhì)，對(duì)注射雌激素聯(lián)合孕激素的方法復(fù)制的乳腺增生大鼠有治療作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)復(fù)制大鼠乳腺增生模型，采用生物化學(xué)、Western blotting法等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，對(duì)M－Ⅰ號(hào)的治療作用進(jìn)行更深入的研究，并對(duì)雙向電泳結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，為闡明M－Ⅰ號(hào)治療機(jī)制、推進(jìn)蒙藥的開(kāi)發(fā)與利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及主要試劑 48只雌性未孕 Wistar大鼠（體質(zhì)量180～220 g）購(gòu)自吉林大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK－（吉）2007－0003。苯甲酸雌二醇注射液（批號(hào)090902）和黃體酮注射液（批號(hào)090402）購(gòu)自上海通用藥業(yè)股份有限公司；枸櫞酸他莫昔芬（批號(hào)090101）購(gòu)自蘇州第一制藥有限公司；兔抗大鼠雌激素受體（estrogen receptor，ER）多克隆抗體、兔抗大鼠孕激素受體（progesterone receptor，PR）多克隆抗體、辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG均購(gòu)自北京中杉金橋生物工程公司；SOD測(cè)試盒（批 號(hào)20100512）、MDA 測(cè) 試 盒（批 號(hào)20100430）和GSH－Px測(cè)試盒（批號(hào)20100324）購(gòu)自南京建成生物研究所。

M－Ⅰ號(hào)處方組成：豆蔻45 g，丁香9 g，梔子7.5 g，手掌參7.5 g，沙棘7.5 g，赤瓟子7.5 g，珍珠桿6 g，訶子6 g，山柰5.25 g，紅花4.5 g，木香4.5 g，刺柏葉4.5 g，五靈脂4.5 g，茵陳3 g，川楝子1.5 g等30味藥，由內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院蒙藥制劑室提供（哲衛(wèi)藥準(zhǔn)字：9604－79）。原料藥材經(jīng)過(guò)煎煮、提取、濃縮、泛丸、干燥和滅菌等步驟制成丸劑。大鼠給藥劑量根據(jù)臨床藥物劑量換算而得。

1.2 動(dòng)物分組及給藥 48只大鼠隨機(jī)選出8只作為正常對(duì)照組，其余動(dòng)物用于復(fù)制大鼠乳腺增生模型，模型的復(fù)制方法參照文獻(xiàn)［5］，每天肌肉注射苯甲酸雌二醇（0.5 mg·kg－1）1次，連續(xù)25 d，隨后每天肌肉注射黃體酮（4 mg·kg－1）1次，連續(xù)5 d，同時(shí)正常對(duì)照組大鼠肌肉注射生理鹽水。模型復(fù)制成功后，40只大鼠隨機(jī)分為5組（每組8只）并給予相應(yīng)處理：模型對(duì)照組，給予生理鹽水灌胃；陽(yáng)性藥對(duì)照組，給予三苯氧胺1.8 mg·kg－1灌胃；M－Ⅰ號(hào)低、中和高劑量組，分別給予M－Ⅰ號(hào)0.5、1.0和3.0 g·kg－1灌胃，期間正常對(duì)照組大鼠給予生理鹽水灌胃，每天觀察大鼠狀態(tài)，每周測(cè)量大鼠第2對(duì)乳頭高度1次。給藥4周后，動(dòng)物禁食12 h，收集動(dòng)物血清分裝于200μL EP管中，－80℃冰箱凍存；取大鼠左側(cè)乳腺組織用4%多聚甲醛固定，右側(cè)乳腺組織立即置于液氮中速凍，而后轉(zhuǎn)移至－80℃冰箱凍存。

1.3 大鼠乳腺組織病理學(xué)檢查 大鼠乳腺組織于4%多聚甲醛中固定，脫水，石蠟包埋，切片，蘇木素－伊紅染色，鏡下觀察分析。各組大鼠增生情況進(jìn)行如下分級(jí)：輕度增生，小葉內(nèi)纖維組織增多，腺泡擴(kuò)張，數(shù)量增多，但腺泡及導(dǎo)管上皮無(wú)增生；重度增生，不僅腺泡數(shù)目增多，且腺泡擴(kuò)張及分泌現(xiàn)象嚴(yán)重，導(dǎo)管上皮出現(xiàn)多層或乳頭狀改變；將正常、輕度和重度依次記為1、2和3分，計(jì)算各組平均積分。

1.4 大鼠血清中抗氧化指標(biāo)的檢測(cè) 各組大鼠腹主動(dòng)脈取血，3000 r·min－1離心10 min，取血清分別按超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH－Px）和丙二醛（MDA）試劑盒說(shuō)明書(shū)［6］步驟操作，比色法測(cè)定吸光度（A）值，按公式計(jì)算出血清中各檢測(cè)指標(biāo)含量。

1.5 Western blotting法檢測(cè)大鼠乳腺組織ER和PR表達(dá)量 大鼠乳腺組織在冰預(yù)冷的裂解液中研磨，待組織充分裂解后，加入2×十二烷基磺酸鈉（SDS）凝膠上樣緩沖液，將樣品置于沸水浴中加熱5 min。室溫10000 g離心10 min，將上清液移入另一管中。Bradford法測(cè)定總蛋白濃度。每組取50μg總蛋白樣品進(jìn)行12%SDS－PAGE電泳。電轉(zhuǎn)移在冷的轉(zhuǎn)移緩沖液中進(jìn)行。轉(zhuǎn)移結(jié)束后，將硝纖膜用麗春紅染色標(biāo)記相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的參照位置。硝酸纖維膜用5%脫脂奶粉PBST溶液封閉2 h。再用一抗（anti－ERαpolyclonal Ab，1∶300；anti－PR polyclonal）孵育2 h，接著二抗孵育40 min。孵育結(jié)束后用0.1 mol·L－1PBST振蕩洗滌硝酸纖維膜4次，每次10 min。將膜與感光膠片安裝好后于暗室內(nèi)曝光，觀察ER和PR蛋白條帶表達(dá)情況。用Tanon GIS凝膠圖像處理系統(tǒng)分析A值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，大鼠乳頭高度、血清SOD、MDA和GSH－Px水平及乳腺組織ER、PR蛋白表達(dá)量以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠乳頭高度 大鼠乳腺增生模型復(fù)制成功后，模型大鼠乳頭高度與正常對(duì)照組大鼠乳頭高度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，此時(shí)M－Ⅰ號(hào)各劑量組大鼠乳頭高度與模型組大鼠乳頭高度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.01）。給藥4周后模型對(duì)照組大鼠乳頭高度比正常對(duì)照組的大鼠乳頭高度顯著增加（P＜0.01），M－Ⅰ號(hào)高、中和低劑量組大鼠乳頭高度與模型對(duì)照組比較有不同程度降低（P＜0.05或P＜0.01），并且隨給藥劑量的增大，大鼠乳頭高度漸接近于正常對(duì)照組。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠乳頭高度的比較Tab.1 Comparisons of nipple heights of rats between various groups （n＝8，±s，l／mm）

表1 各組大鼠乳頭高度的比較Tab.1 Comparisons of nipple heights of rats between various groups （n＝8，±s，l／mm）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs normal control group；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs model control group.

Group Nipple height 0 d 4 weeks 8 weeks Normal control 0.68±0.050.74±0.060.76±0.08 Model control 0.66±0.181.60±0.21＊＊ 1.72±0.13＊＊Positive control 0.64±0.171.58±0.13＊＊ 1.38±0.17 M－Ⅰlow dosage 0.66±0.221.56±0.28＊＊ 1.50±0.18＊＊△M－Ⅰ middle dosage 0.68±0.211.62±0.31＊＊ 1.42±0.21＊＊△M－Ⅰhigh dosage 0.66±0.161.58±0.24＊＊ 1.22±0.12＊△△

2.2 各組大鼠血清SOD、MDA和GSH－Px水平

給藥4周后，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠血清SOD及 GSH－Px水平均顯著降低（P＜0.05），MDA水平顯著升高（P＜0.01），M－Ⅰ號(hào)低劑量組和陽(yáng)性藥對(duì)照組大鼠血清SOD水平顯著降低（P＜0.05）；M－Ⅰ 號(hào)高劑量組大鼠血清SOD、MDA水平接近于正常對(duì)照組；與正常對(duì)照組大鼠比較，M－Ⅰ號(hào)低劑量組MDA水平顯著增高（P＜0.05），陽(yáng)性藥對(duì)照組大鼠血清GSH－Px顯著增高（P＜0.05）。與模型對(duì)照組大鼠比較，M－Ⅰ號(hào)高劑量組大鼠血清SOD水平顯著增高（P＜0.05），M－Ⅰ號(hào)高、中劑量組MDA水平顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）M－Ⅰ號(hào)高、中劑量組和陽(yáng)性藥組大鼠血清GSH－Px均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清SOD、MDA和GSH－Px水平的比較Tab.2 Comparisons of serum SOD，MDA and GSH－Px levels of rats between various groups （n＝8±s）

表2 各組大鼠血清SOD、MDA和GSH－Px水平的比較Tab.2 Comparisons of serum SOD，MDA and GSH－Px levels of rats between various groups （n＝8±s）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs normal control group；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs model control group.

Group SOD［λB／（U·mg－1）］MDA［cB／（μmol·L－1）］GSH－Px［λB／（104 U·L－1）］Normal control 114.75±3.591.10±0.444.64±0.37 Model control 106.73±4.18＊ 2.30±0.62＊＊ 4.12±0.41＊Positive control 103.09±3.76△ 1.41±0.55△ 5.01±0.39＊△△M－Ⅰlow dosage 105.01±7.09△ 1.77±0.54＊ 4.47±0.42 M－Ⅰmiddle dosage 112.01±3.09△ 1.52±0.54△ 4.60±0.56△M－Ⅰhigh dosage 114.18±4.47△ 1.08±0.11△△ 4.88±0.47△

2.3 Western blotting法檢測(cè)乳腺組織中ER和PR表達(dá)水平 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠ER、PR的表達(dá)水平顯著增加（P＜0.01）；陽(yáng)性藥組、M－Ⅰ號(hào)低、中和高劑量組大鼠乳腺組織中ER、PR蛋白表達(dá)水平顯著降低，與模型對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表3和圖1。

表3 Western blotting法檢測(cè)各組大鼠乳腺組織中ER和PR表達(dá)水平Tab.3 Comparisons of ER，PR expression levels of rats between various groups detected by Western blotting（n＝8，±s）

表3 Western blotting法檢測(cè)各組大鼠乳腺組織中ER和PR表達(dá)水平Tab.3 Comparisons of ER，PR expression levels of rats between various groups detected by Western blotting（n＝8，±s）

＊P＜0.01 vs normal control group；△P＜0.01 vs model control group.

Group ER PR Normal control 1.000±0.000 1.000±0.000 Model control 2.720±0.070＊ 1.517±0.021＊Positive control 1.543±0.040△ 0.503±0.153△M－Ⅰlow dosage 1.503±0.031△ 0.390±0.100△M－Ⅰ middle dosage 1.540±0.080△ 0.367±0.058△M－Ⅰhigh dosage 2.153±0.111△ 0.840±0.010△

圖1 Western blotting法檢測(cè)各組大鼠乳腺組織中ER和PR的表達(dá)水平Fig.1 The expression levels of ER and PR in breast tissues of rats in various groups detected by Western blotting

2.4 各組大鼠乳腺組織病理學(xué)特征 光鏡下可見(jiàn)正常對(duì)照組大鼠乳腺小葉數(shù)量較少，均呈散在分布，無(wú)腺泡增多和腺泡擴(kuò)張、腺泡腔較小，腺腔內(nèi)無(wú)分泌物或僅有少許分泌物。模型對(duì)照組大鼠均出現(xiàn)典型的乳腺增生，表現(xiàn)為乳腺小葉數(shù)量增多，腺泡及導(dǎo)管大量增生，腺泡高度擴(kuò)張并且分泌旺盛，導(dǎo)管上皮呈多層和（或）乳頭狀改變。陽(yáng)性藥對(duì)照組大鼠乳腺小葉數(shù)和乳腺小葉腺泡數(shù)較模型對(duì)照組明顯減少，腺泡上皮多呈立方上皮，少數(shù)為扁平狀，腔內(nèi)無(wú)分泌物或有少許分泌物。M－Ⅰ號(hào)各劑量組乳腺小葉數(shù)及小葉腺泡數(shù)均少于模型對(duì)照組，乳腺腺泡數(shù)目及腔內(nèi)分泌物較少，導(dǎo)管管腔變小，體積縮小，M－Ⅰ號(hào)高劑量組個(gè)別大鼠乳腺導(dǎo)管及腺泡結(jié)構(gòu)接近正常大鼠。見(jiàn)表4和圖2（封二）。

表4 各組大鼠乳腺組織病理學(xué)評(píng)分Tab.4 Pathological grading scores of breast tissue of rats in various groups （n＝8，±s）

表4 各組大鼠乳腺組織病理學(xué)評(píng)分Tab.4 Pathological grading scores of breast tissue of rats in various groups （n＝8，±s）

＊P＜0.01 vs normal control group；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs model control group.

Group Scores Normal control 1.00±0.00 Model control 2.87±0.33＊Positive control 1.50±0.70△△M－Ⅰlow dosage 1.76±0.51△M－Ⅰ middle dosage 1.38±0.48△△M－Ⅰhigh dosage 1.28±0.69△△

3 討 論

乳腺增生癥屬中醫(yī) “乳癖”范疇［5］。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為：乳腺增生癥的病因主要是體內(nèi)雌、孕激素失衡，目前并無(wú)特效的治療方法。M－Ⅰ號(hào)是治療乳腺增生癥的傳統(tǒng)秘方，一直在內(nèi)蒙古自治區(qū)作為院內(nèi)制劑應(yīng)用，經(jīng)400例臨床病例［6］證實(shí)，療效安全可靠，有效率達(dá)98%，是治療乳腺增生癥的良方。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：經(jīng)M－Ⅰ號(hào)治療后大鼠乳頭高度明顯降低，乳腺組織病理改變明顯減輕，并有一定的劑量依賴性。而且M－Ⅰ號(hào)高、中劑量組大鼠乳腺組織病理評(píng)分均低于陽(yáng)性藥對(duì)照組，尤其是高劑量組已接近正常對(duì)照組，提示M－Ⅰ號(hào)有明顯的治療效果。

SOD、MDA和GSH－Px是反應(yīng)體內(nèi)抗氧化能力的重要指標(biāo)。研究［7］表明：雌激素能通過(guò)與過(guò)氧化損傷緊密相連的作用機(jī)制在乳腺癌和乳腺增生的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠血清MDA含量升高，SOD和GSH－Px活力下降，表明乳腺增生大鼠體內(nèi)自由基生成增多，脂質(zhì)過(guò)氧化作用增強(qiáng)，機(jī)體清除自由基的能力下降；與模型對(duì)照組比較，M－Ⅰ號(hào)高、中劑量組的SOD、GSH－Px活性明顯增高，而MDA含量顯著下降，提示M－Ⅰ號(hào)可能通過(guò)抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)以調(diào)節(jié)自由基代謝，從而起到治療乳腺增生的作用。雌激素只有與其受體結(jié)合才能發(fā)揮作用，乳腺增生的發(fā)生與雌激素水平升高或乳腺組織局部ER含量增加均有密切關(guān)系，而雌激素受體過(guò)多表達(dá)在乳腺增生癥發(fā)病中可能有更重要的意義，這可以進(jìn)一步解釋臨床上乳房發(fā)生局部腫塊的原因。多項(xiàng)研究［8－10］表明：ER、PR的過(guò)量表達(dá)會(huì)加劇乳腺增生或乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。在前期研究［3］中，本室曾采用 M－Ⅰ號(hào)處理后的大鼠乳腺組織進(jìn)行熒光差異雙向電泳（DIGE），收集分析熒光差異顯示雙向凝膠電泳圖譜，通 過(guò) MALDI－TOF／TOF 質(zhì) 譜 分 析， 得 到PMF圖譜，然后利用PMF和蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，對(duì)差異表達(dá)的蛋自質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行鑒定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：M－Ⅰ號(hào)能通過(guò)調(diào)節(jié)乳腺組織中的多種蛋白質(zhì)，對(duì)注射雌激素聯(lián)合孕激素方法復(fù)制的乳腺增生大鼠起到治療作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Western blotting方法進(jìn)一步驗(yàn)證M－Ⅰ號(hào)對(duì)乳腺增生大鼠乳腺組織ER表達(dá)影響的結(jié)果顯示：對(duì)ER表達(dá)量的2種檢測(cè)方法所得結(jié)果具有相同變化趨勢(shì)，即乳腺增生大鼠乳腺組織中ER的表達(dá)量較正常對(duì)照組大鼠有顯著升高，M－Ⅰ號(hào)各劑量組ER的表達(dá)量較模型對(duì)照組顯著降低，雖略高于正常對(duì)照組，但與陽(yáng)性藥對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

PR受雌激素調(diào)節(jié)，在正常乳腺細(xì)胞中的合成需要雌激素與ER的共同作用［11］。當(dāng)雌激素水平升高時(shí)會(huì)上調(diào)PR的表達(dá)。研究［12］表明：孕激素通過(guò)PR介導(dǎo)的作用對(duì)乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展以及惡性表型的維持起重要作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：模型大鼠乳腺組織PR的表達(dá)較正常對(duì)照組有顯著升高，M－Ⅰ號(hào)低、高劑量組以及陽(yáng)性藥對(duì)照組較模型對(duì)照組顯著降低。

綜上所述，蒙藥乳腺－Ⅰ號(hào)不僅可以明顯降低乳腺增生大鼠的乳頭高度，改善乳腺增生大鼠乳腺組織結(jié)構(gòu)，還可以通過(guò)增強(qiáng)大鼠體內(nèi)抗氧化能力，調(diào)節(jié)乳腺組織中ER和PR的表達(dá)，發(fā)揮治療乳腺增生癥作用，并具有劑量依賴性。

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Effects of Mongolian Remedy RuXian－Ⅰon anti－oxygenic ability and expressions of estrogen receptor and progesterone receptor in breast tissues of rats with hyperplasia of mammary glands

WANG Zhong－chao1，LI Ming2，ZHANG Bin3，4，REN Li－qun2，E Du3，4，ZHANG Qiu－li3，4，XIU lan3，4，LIU Yi－fei3，LIU Lan－tao3
（1.Department of Pathology，Changchun Medical College，Changchun 130031，China；2.Department of Experimental Pharmacology and Toxicology，School of Pharmacy，Jilin University，Changchun 130021，China；3.Department of Cardio－Thoracic Surgery，Affiliated Hospital，Inner Mongolia University for Nationalities，Tongliao 028007，China；4.Institute of Mongolia and Western Medicinal Treatment，Inner Mongolia University for Nationalities，Tongliao 028007，China）

Objective To observe the effects of Mongolian Remedy RuXian－I（M－Ⅰ）on anti－oxygenic ability and the expressions of estrogen receptor（ER）and progesterone receptor（PR）in breast tissues of rats with hyperplasia of mammary glands，and to provide experimental basis for application of M－Ⅰ.Methods 8 rats randomly chosen from forty－eight virgin female Wistar rats were regarded as normal control group.The others were injected intramuscularly with estradiol benzoate（0.5 mg·kg－1）once a day for 25 d and progesterone（4 mg·kg－1）once a day for 5 d.The rats in normal control group were injected with normal saline.Then the disease model was sucesfully copied and the model rats were randomly divided into model control group，positive control group，M－Ⅰlow dosage group，M－Ⅰ middle dosage group，and M－Ⅰ high dosage group.The rats in different groups were respectively treated with normal saline，tamoxifen，M－Ⅰ0.5，1.0 and 3.0 g·kg－1for 30 d.Then the changes of nipple heights，the pathological changes in breast tissues，the levels of SOD，MDA，GSH－Px in serum and breast tissues and the expressions of ER，PR were measured.Results Compared with normal control group，the nipple height and the levels of serum MDA，and the expressions of ER and PR in model control group were obviously increased（P＜0.05 or P＜0.01）；the serum levels of SOD，GSH－Px were obviously decreased（P＜0.01）.Compared with model control group，the nipple heights were lower（P ＜0.05 or P ＜0.01），and the histopathological changes were reduced in M－Ⅰ different dosages groups；the structure of breast tissue in M－Ⅰhigh dosage group was close to that in normal control group；the serum levels of MDA and the expressions of ER and PR in breast tissue in M－Ⅰhigh dosage group were obviously decreased（P＜0.05 or P＜0.01），but the levels of SOD，GSH－Px in serum and breast tissues were obviously increased（P＜0.05 or P＜0.01）.Conclusion M－Ⅰcan treat the rats with hyperplasia of mammary glands well，and its mechanism may be related to inhancing the antioxidant ability and inhibiting the expression levels of ER and PR in breast tissues.

rat，Wistar；Mongolian Remedy Ru Xian－Ⅰ；estrogen；hyperplasia of mammary glands；estrogen receptor

R655.82

A

1671－587Ⅹ（2012）06－1052－06

2012－07－24

國(guó)家自然科學(xué)基金資助課題（30873454）

王忠超（1979－），女，吉林省長(zhǎng)春市人，講師，醫(yī)學(xué)博士，主要從事乳腺疾病的病理學(xué)與病理生理學(xué)研究。

張 彬（Tel：0475－8267820，E－mail：bzh9911＠163.com）；任立群（Tel：0431－85619702，E－mail：renlq＠jlu.edu.cn）