楊麗 張永梅 喬姝 胡同平 張利霞 李得春 彭忠忠 楊玉梅

蓯蓉沖劑是由肉蓯蓉、海馬、淫羊藿、黃芪、干姜、菟絲子等組成的純中藥制劑，是一老中醫(yī)臨床用于健脾益氣、補(bǔ)腎壯陽(yáng)、強(qiáng)身壯體的經(jīng)驗(yàn)處方[1]。為探討蓯蓉沖劑對(duì)免疫功能的作用，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)使用環(huán)磷酰胺后白細(xì)胞減少的機(jī)理，研究蓯蓉沖劑對(duì)于白細(xì)胞減少癥模型小鼠機(jī)體免疫力的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象 健康昆明種小鼠：體重18～22 g，雌雄各半，購(gòu)自內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK（蒙）2002-0001。

1.1.2 藥品和試劑 蓯蓉沖劑 （包頭市藥物研究所，批號(hào)050616），注射環(huán)磷酰胺（200 mg/支，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)：10102921）。

1.1.3 儀器 sysmex KX-21全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)（日本東亞醫(yī)用電子株式會(huì)社）、酶標(biāo)儀（芬蘭雷勃公司）。

1.2 方法

1.2.1 模型制備 將150只小鼠采用隨機(jī)化原則分成5組，每組30只：即空白對(duì)照組、模型組、蓯蓉沖劑大劑量組（2.8 g/kg）、蓯蓉沖劑中劑量組 （1.4 g/kg）和蓯蓉沖劑小劑量組 （0.7 g/kg）。除空白對(duì)照組外，其余小鼠都進(jìn)行腹腔注射環(huán)磷酰胺50 g/kg，1次/d，共7 d，建立化療白細(xì)胞減少癥模型（標(biāo)準(zhǔn)：白細(xì)胞下降至2.0×109～4.0×109/L）[2]。

1.2.2 藥物干預(yù) 建模成功后即日起持續(xù)灌胃給藥，1次/d，0.2 ml/10 g，連續(xù)灌胃15 d。空白對(duì)照組和模型組給等容量體積生理鹽水。

1.2.3 檢測(cè)IL-6水平及WBC計(jì)數(shù) 分別于造模前和造模后5、10、15 d 取靜脈血，WBC計(jì)數(shù)使用sysmex KX-21全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)，細(xì)胞因子IL-6按試劑盒（上海鑫樂(lè)試劑有限公司）操作說(shuō)明采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 蓯蓉沖劑對(duì)白細(xì)胞減低癥模型小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響 建模前各組小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)明顯差異（P>0.05）。正常對(duì)照組與模型組比較，白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯降低，與建模后5 d比較有極顯著差異（P<0.01）， 與建模后10、15 d比較有顯著差異（P<0.05），表明制備白細(xì)胞減低癥模型成功。與模型組比較，蓯蓉沖劑給藥后5、10 d各劑量組外周血白細(xì)胞數(shù)量比模型對(duì)照組有所增高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），使用蓯蓉沖劑15 d大劑量組與模型組白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），中、小劑量組與模型組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 蓯蓉沖劑對(duì)小鼠IL-6的影響 與空白對(duì)照組比較，模型組中IL-6水平降低（P<0.01）；蓯蓉沖劑 3個(gè)劑量組與模型組比較，建模后5、 10、15 d IL-6水平明顯增高（P<0.01），且表現(xiàn)出劑量間的依賴關(guān)系。見(jiàn)表2。

3 討論

白細(xì)胞減少癥按中醫(yī)辨證屬于“虛勞、血虛癥” 范圍，與心、肝、脾、腎陽(yáng)氣精血不足相關(guān)。蓯蓉沖劑正是采用肉蓯蓉、海馬、淫羊藿、黃芪等純中藥制劑為主選藥合成，是臨床上用于健脾益氣、補(bǔ)腎壯陽(yáng)、強(qiáng)身壯體的經(jīng)驗(yàn)處方。

IL-6是一種主要由免疫活性細(xì)胞分泌的多功能因子，在活化的B細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白中起重要作用，不僅具有免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤作用[3]，且能促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化，誘導(dǎo)肝細(xì)胞急性期蛋白的合成。因此選擇IL-6免疫活性因子作為本次實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)于注射環(huán)磷酰胺的小鼠制造白細(xì)胞減少癥模型后，對(duì)其給予不同劑量的蓯蓉沖劑于給藥后5、10、15 d分別檢測(cè)IL-6水平及WBC計(jì)數(shù)，結(jié)果顯示造模成功后IL-6水平及WBC計(jì)數(shù)與空白對(duì)照組比較明顯降低（P<0.05），蓯蓉沖劑治療后IL-6水平及WBC計(jì)數(shù)顯著升高（P<0.05），說(shuō)明蓯蓉沖劑誘導(dǎo)小鼠細(xì)胞因子IL-6的釋放，同時(shí)使用蓯蓉沖劑治療后第5、10、15天的IL-6水平及WBC計(jì)數(shù)依次增高，且使用后15 d大劑量組與模型組白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較有極顯著差異（P<0.01），說(shuō)明蓯蓉沖劑對(duì)白細(xì)胞減少癥有較好的治療效果，且隨使用劑量的增加WBC計(jì)數(shù)增高。有研究表明，蓯蓉沖劑中肉蓯蓉能興奮垂體，有類似腎上腺皮質(zhì)激素樣的作用，能調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，同時(shí)可加強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力，其多糖可調(diào)節(jié)小鼠淋巴細(xì)胞免疫功能[4-6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果正印證了這一點(diǎn)。同時(shí)蓯蓉沖劑中主要成分肉蓯蓉對(duì)半乳糖致衰老模型小鼠具有抗衰老作用，提高模型小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，可明顯增強(qiáng)模型小鼠的免疫功能[7-8]。因此認(rèn)為蓯蓉沖劑作用機(jī)制可能與提高免疫力有關(guān)。

表1 蓯蓉沖劑對(duì)白細(xì)胞減低癥模型小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響（±s） ×109/L

表1 蓯蓉沖劑對(duì)白細(xì)胞減低癥模型小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響（±s） ×109/L

*與正常組比較，P<0.05；**與正常組比較，P<0.01；#與模型組比較，P<0.05，##與模型組比較，P<0.01

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表2 蓯蓉沖劑對(duì)白細(xì)胞減低癥模型小鼠IL-6的影響（±s） pg/ml

表2 蓯蓉沖劑對(duì)白細(xì)胞減低癥模型小鼠IL-6的影響（±s） pg/ml

*與正常組比較，P<0.05；#與模型組比較，P<0.05；△與模型組比較，P<0.01

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綜上表明，蓯蓉沖劑對(duì)白細(xì)胞減少癥模型小鼠免疫力低下有較好的治療效果，其機(jī)制可能與提高免疫力有關(guān)。蓯蓉沖劑具有補(bǔ)腎壯陽(yáng)、提高免疫功能的作用，但對(duì)白細(xì)胞減少癥免疫功能的影響目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。本次將蓯蓉沖劑與白細(xì)胞減少癥模型小鼠免疫功能聯(lián)系起來(lái)，對(duì)提高民族藥物的臨床使用價(jià)值具有重要意義。

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