楊春蕾，李麗娟，周文忠，趙志杰，潘英芳，車向榮，郭 亮

(1.天津農(nóng)學(xué)院動物科學(xué)系，天津 300384;2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，北京 100094;3.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山西太谷 030801)

恩諾沙星(Enrofloxacin，ENR)是第一個動物專用的氟喹諾酮類抗菌藥物，對大腸桿菌、沙門氏菌、嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌等細菌均有效，具有抗菌譜廣、體內(nèi)分布廣、殺菌活性強、與其他抗菌藥物無交叉耐藥性等特點，在畜禽的細菌和支原體疾病的預(yù)防和治療方面均有良好的效果［1－2］。

納米乳劑(nanoemulsions)是指粒徑＜100 nm的乳粒，是由油相、水相、表面活性劑和助表面活性劑按照適當(dāng)?shù)谋壤瞥傻囊环N半透明或者透明、低粘度、各向同性的液體。將恩諾沙星制備成脂質(zhì)納米乳這種給藥系統(tǒng)的優(yōu)勢在于，不僅可以提高其生物利用度，同時還有靶向、緩釋等控釋能力［4－6］。體外研究發(fā)現(xiàn)，恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度與普通藥物相似，說明此種制劑組成沒有改變恩諾沙星的殺菌能力。昆明小鼠體內(nèi)研究表明，恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑能相對增加藥物的消除半衰期(T1/2)、平均滯留時間(MRT)和藥時曲線下面積(AUC)［5］。但有關(guān)恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑在斷奶仔豬上的應(yīng)用研究國內(nèi)尚未見報道。本實驗以恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑為試驗材料，旨在研究不同濃度恩諾沙星脂質(zhì)納米乳對斷奶仔豬血清生化指標的影響，為恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑的研發(fā)和臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料 恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑由十六烷基碳脂肪酸組成，其中恩諾沙星粉劑含量5.0 mg/mL，實測平均粒徑為(111.0±7.2)nm，分散指數(shù)為0.26 ±0.17，電動勢為(－ 31.57 ±3.76)mv，由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)周文忠教授實驗室提供。

1.2 試驗設(shè)計及試驗動物 隨機選擇健康斷奶仔豬5組，其中分為4個試驗處理組，1個空白對照組，仔豬平均體重10.05 kg，長白與大約克夏雜交三元品種，分別按 0、5.0、2.5、1.25、0.6 mg/kg 劑量對仔豬進行口服給藥，在給藥后2、6、8與96 h前腔靜脈采血。

1.3 飼養(yǎng)管理 經(jīng)7 d的適應(yīng)性飼養(yǎng)后，5個處理組仔豬生長良好，無其他異?，F(xiàn)象。試驗正試期開始空腹稱重并做記錄，每天定時飼喂四次(7:00、11:00、16:00、21:00)，仔豬自由采食、飲水，保持舍內(nèi)清潔。

1.4 測定指標

1.4.1 臨床癥狀觀察 每日觀察各處理組仔豬的精神狀態(tài)、飲食等狀況。

1.4.2 生化指標檢測 仔豬于試驗開始和結(jié)束時空腹稱重，試驗結(jié)束時仔豬前腔靜脈采血5 mL，3000 r/min離心15 min分離血清，采用自動生化分析儀測定谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、尿素(Urea)、淀粉酶(AMY)和肌酐(Crea)含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS17.0軟件進行處理，并做單因素方差分析，采用鄧肯氏法進行多重比較，P＜0.05為差異顯著，數(shù)據(jù)用平均值±標準差表示。

2 試驗結(jié)果

2.1 臨床癥狀觀察 對照組和試驗組仔豬，精神狀態(tài)、飲食欲和對外界的反應(yīng)能力未見異常。

2.2 不同劑量恩諾沙星脂質(zhì)納米乳對斷奶仔豬生化指標的影響 不同劑量恩諾沙星納米脂質(zhì)乳劑給藥后，分別在2、6、8和96 h檢測，結(jié)果見表1。表1中的統(tǒng)計數(shù)據(jù)為2、6、8和96 h內(nèi)各項指標的平均值。

表1 不同劑量恩諾沙星脂質(zhì)納米乳對斷奶仔豬生化指標的影響(n=5)

續(xù)表

表1實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，仔豬分別按0.6、1.25、2.5 和 5.0 mg/kg 劑量對仔豬給藥后:(1)各劑量組的 ALT、AST、ALP、AMY 和 Crea在2、6、8和96 h與對照組差異不顯著(P＞0.05)。(2)各劑量組的Urea在2 h與對照組未見統(tǒng)計學(xué)差異;但5.0 mg/kg劑量組在6 h與對照組和0.6 mg/kg劑量組差異顯著(P＜0.05)，在8 h和96 h的數(shù)值與對照組和其他劑量組差異顯著(P＜0.05)。以上數(shù)據(jù)表明，恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑以口服給藥方式，在生長仔豬平均體重10.05 kg時，以0.6、1.25、2.5 和 5.0 mg/kg 的劑量下在 2、6、8和96 h對仔豬肝功能和胰腺功能影響未見統(tǒng)計學(xué)差異，但在5.0 mg/kg的劑量下，仔豬血清Urea水平與其他劑量組差異顯著，說明隨著劑量的增加對仔豬血清Urea水平的影響逐漸增大。結(jié)果提示，5.0 mg/kg劑量下恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑可能會對仔豬腎臟功能有一定的影響。

3 討論

恩諾沙星水溶性差的特點使其藥劑配方設(shè)計困難，導(dǎo)致了生物利用度的多樣性［5］。此外，恩諾沙星在大部分哺乳動物體內(nèi)的新陳代謝快和消除半衰期短，需連續(xù)多次給藥才能達到治療目的，給臨床應(yīng)用帶來很大不便，而且容易造成動物的應(yīng)激［7］。本試驗中采用恩諾沙星納米脂質(zhì)乳劑，具有延緩藥物釋放、延長峰值血藥濃度時間、減少臨床給藥次數(shù)和增加治療效果等優(yōu)點。本制劑在抗菌活性試驗中，利用金黃色葡萄球菌測定其MIC為0.25 μg/mL，與普通恩諾沙星藥物的值接近，說明其保持了原來藥物的抗菌活性［5］。

哺乳動物的血清生理生化指標與機體代謝、營養(yǎng)狀況和疾病有密切的關(guān)系。當(dāng)機體受到外界因子的影響而發(fā)生生理或病理變化時，會在血液指標中反應(yīng)出來［8］。血清中ALT、AST和ALP活性的變化是判斷肝功能正常與否的主要指標，Urea和Crea活性的變化是判斷腎臟功能正常與否的主要指標［9－10］。AMY是α－淀粉酶中的內(nèi)淀粉酶，是用于臨床診斷中的酶類之一［11］。正常情況下，細胞膜的屏障作用下細胞內(nèi)的酶不易逸出［13］，機體血清中常用的肝腎功能指標和胰腺指標處于正常值范圍內(nèi)。只有當(dāng)機體肝、腎和胰腺受外來敏感物質(zhì)刺激發(fā)生變化時，會使得細胞膜遭受破壞，使細胞內(nèi)的酶釋放入血液的速度大大提升，這些指標會隨之升高或者降低。本試驗結(jié)果表明仔豬口服恩諾沙星脂質(zhì)納米乳后，低劑量組在不同時間對仔豬的肝臟功能、腎功能和胰腺的影響未見統(tǒng)計學(xué)差異，但隨著劑量的增加，仔豬血清Urea水平與其他劑量組差異顯著，說明高劑量可能對仔豬腎臟會產(chǎn)生一定的影響。

恩諾沙星味道苦，不適合口服給藥，因此限制了其給藥方式，同時也使得其在單胃動物體內(nèi)口服生物利用度高的優(yōu)點不能有效發(fā)揮［14］。本試驗中，利用熱均質(zhì)法和超聲波破碎法裝載十六烷基碳脂肪酸制得的恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑，是一種新型的緩釋制劑，試驗采用口服的方式進行給藥，以期達到延緩藥物釋放時間、延長峰值血藥濃度時間、減少臨床給藥次數(shù)及改善藥物適口性的目的，從而克服和彌補傳統(tǒng)恩諾沙星制劑的不足，同時為恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑的研發(fā)和臨床應(yīng)用提供參考。

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