蘇智斌 王淑美 陳曦 陳靜 梁生旺

廣棗四香丸中醇提部位工藝研究

蘇智斌 王淑美 陳曦 陳靜 梁生旺

目的 優(yōu)選廣棗四香中醇提部位人參，廣棗最佳提取工藝。方法 通過正交實(shí)驗(yàn)考察乙醇濃度，加醇體積，提取時(shí)間，提取次數(shù)4個(gè)因素，采用HPLC測(cè)定人參皂苷Rg1，Re，Rb1總含量以及紫外分光光度法測(cè)定總黃酮，總皂苷。結(jié)果 最佳工藝為6倍量70%乙醇提取2次，每次45 min。結(jié)論 該提取工藝經(jīng)濟(jì)、可行、可控。

正交試驗(yàn);廣棗四香;提取工藝

廣棗四香滴丸是由廣棗，人參等藥材組成，是臨床經(jīng)驗(yàn)方，具有理氣止痛，活血化瘀功能，用與氣滯血瘀型的冠心病，心絞痛等［1］?，F(xiàn)代研究表明廣棗中總黃酮具有明顯的治療心血管疾病的作用，酚酸類成分如沒食子酸也有明顯的抗氧化、清除自由基、抑制血小板聚集作用和抗缺氧活性［2］。人參總皂苷對(duì)心血管系統(tǒng)的多種疾病如缺血性心臟病、心律失常、心力衰竭等方面均有臨床意義［3，4］，固本實(shí)驗(yàn)采用乙醇為提取溶劑，采用紫外分光光度法測(cè)量總皂苷，總黃酮［5］，以及 HPLC 測(cè)定人參皂苷 Rg1，Re，Rb1含量之和［6］，通過正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化廣棗四香滴丸醇提部分提取工藝。

1 材料與方法

1.1 一般材料

紫外-可見分光光度計(jì)(日本島津)，Waters2996高效液相色譜儀，迪馬色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)。

人參皂苷 Rg1，(110703-200322)，人參皂苷 Rb1(110704-200420)，人參皂苷Re(110754-200320)，蘆丁對(duì)照品(批號(hào)100080-200306)均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。廣棗購(gòu)自安徽亳州中藥材市場(chǎng)，經(jīng)廣東藥學(xué)院中藥鑒定教研室劉基柱副教授鑒定為漆樹科植物南酸棗的干燥成熟果實(shí)廣棗Choerospondias axillaris(Roxb);人參(批號(hào)100320)購(gòu)自廣州致信藥業(yè)有限公司。液相用試劑均為色譜純，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 廣棗、人參提取條件的考察 取廣棗100 g、人參66 g，加乙醇回流提取，并采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，對(duì)乙醇濃度、乙醇用量、提取時(shí)間、提取次數(shù)進(jìn)行條件優(yōu)選，考察指標(biāo)為總皂苷含量，總黃酮含量，人參皂苷Rg1，Re，Rb1含量之和為指標(biāo)，用L9(34)正交表安排試驗(yàn)。因素水平表見表1。試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表1 因素水平

表2 醇提正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

1.2.2 供試品制備 取人參(粉碎)66 g，廣棗100 g(粉碎)放入圓底燒瓶中，按正交實(shí)驗(yàn)的最佳提取條件，提取液過濾，合并濾液，減壓蒸餾，回收乙醇適量，剩下溶液過濾后，加水定容至500 ml容量瓶中(相當(dāng)于生藥0.332 g/ml)，放置冰箱備用。

1.2.3 總皂苷含量測(cè)定 精密稱取在105℃減壓干燥至恒重的人參皂苷Re對(duì)照品10.35 mg，加95%乙醇溶解，轉(zhuǎn)10 ml容量瓶中，用95%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(1.035 mg/ml)，精密吸取該液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml，分別置于10 ml試管中，在分別加入高氯酸5 ml，放置15 min顯色，以相應(yīng)試劑做空白，于543 nm處測(cè)定吸光度。以濃度(C)與吸收度 進(jìn)行線性回歸。得回歸方程：A=6.3184C-0.1543，R2=0.9997(n=5)，可見在 21 ～104 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性系良好。

供試品含量測(cè)定：分別精密量取上述9個(gè)廣棗正交醇提液1 ml至10 ml容量瓶中，按上述顯色方法顯色后，在543 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

1.2.4 總黃酮含量測(cè)定 精密稱取在105℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品19.20 mg，加95%乙醇溶解，轉(zhuǎn)入25 ml容量瓶中，用95%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(0.768 mg/ml)，精密吸取該液 1、2、3、4、5 ml，分別置于 25 ml容量瓶中，加蒸餾水至 6 ml，加5%NaNO2試液1.0 ml，放置6 min，加 l0%硝酸鋁1.0 ml搖勻，放置6 min;加10%NaOH試液10 ml加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)試劑做空白。于508 nm處測(cè)定吸收度。以濃度(C)與吸收度進(jìn)行線性回歸。得回歸方程：A=12.503(C)-0.0507;R2=0.9996(n=5)，可見在31～153 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性系良好。

供試品含量測(cè)定：分別精密量取上述9個(gè)廣棗正交醇提液1 ml，定容至25 ml，按上述顯色方法顯色后，在508 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

1.2.5 人參皂苷含量測(cè)定 色譜條件：迪馬(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，乙睛(A%)-0.5%磷酸水(B%)：0 ～35 min 81～71(B%)，35～70 min 71(B%)，70～100 min 71～60(B%)。進(jìn)樣量 10 μl，檢測(cè)波長(zhǎng) 203 nm。

供試品含量測(cè)定：分別精密量取上述9個(gè)廣棗正交醇提液10 ml，加飽和正丁醇萃取，取正丁醇層最終定容到25 ml，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記過見表2。

2 結(jié)果

結(jié)果以各有效成分或指標(biāo)性成分的含量越高越好，以含量最高的為結(jié)果以各有效成分或指標(biāo)性成分的含量越高越好，以含量最高的為100分，根據(jù)y1’=y1×100/y1 max換算后，各指標(biāo)得分均乘以權(quán)重系數(shù)相加后得綜合評(píng)分。

由方差分析可知，影響各指標(biāo)含量高低的最主要因素是A，其次C、B，D因素的影響較小，綜合考慮提取成本，故最佳工藝條件為A2B1C1D1，即加6倍量70%乙醇提取2次，每次45 min。

3 討論

3.1 本實(shí)驗(yàn)采用多指標(biāo)綜合法對(duì)廣棗四香丸中醇提部位提取工藝進(jìn)行研究。由于文獻(xiàn)報(bào)道廣棗四香丸醇提部位中廣棗，人參的有效成分為總黃酮，總皂苷等，不同的提取工藝有可能增加某一類成分的含量同時(shí)減少另一類成分的含量，因此只用某一類物質(zhì)的含量這種單一指標(biāo)方法去評(píng)價(jià)廣棗四香丸醇提部位提取工藝是不全面的。所以本實(shí)驗(yàn)通過考察醇提部位總皂苷，總黃酮，以及對(duì)人參皂苷Rg1，Re，Rb1進(jìn)行含量測(cè)定，全面、綜合評(píng)價(jià)提取工藝，為尋找科學(xué)有效的提取工藝提供依據(jù)。

3.2 建立了70%乙醇提取的方法，有效成分總黃酮和總皂苷以及人參皂苷Rg1，Re，Rb1的提取轉(zhuǎn)移率較高，說明藥材的有效成分得到充分的提取，經(jīng)過三批藥材驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，總黃酮，總皂苷，人參皂苷Rg1，Re，Rb1均符合標(biāo)準(zhǔn)。本提取方法簡(jiǎn)單，有效，經(jīng)濟(jì)，環(huán)保，適合大規(guī)模生產(chǎn)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2005版(一部).化學(xué)工業(yè)出版社，2005：29，52.

［2］鄧科君，張藝，王平，等.反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定藏藥廣棗中沒食子酸和原兒茶酸的含量.色譜，2006，24(6)：652.

［3］王強(qiáng)，莫雪梅，楊小英.人參皂甙治療心血管疾病的現(xiàn)代研究進(jìn)展.心血管病學(xué)進(jìn)展，2006，27(3)：325.

［4］祝連彩，王伯初，譚君.銀杏葉提取物與人參皂苷對(duì)血管活性物質(zhì)的影響.重慶大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2007，30(4)：136.

［5］易躍能，楊華，趙勇，等.滲漉法提取廣棗中黃酮類成分的工藝研究.中國(guó)中藥雜志，2010，35(14)：1806.

［6］王京霞，陳琳，喬晴等.參血膠囊中人參皂苷Rg1，Re，Rb1含量的測(cè)定.浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，35(1)：82-85.

廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：2006Z3-E5121)

510006 廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院

梁生旺 E-mail：swliang371@163.com