羅 亞

（湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 湘潭 411101）

三膠顆粒由丹參、陳皮、龜甲膠、枸杞子、女貞子、鹿角膠、黃芪、黃精、阿膠、當(dāng)歸、山楂11位中藥加工制成，具有補腎，益氣，養(yǎng)血。適用于脾虛不足引起頭暈、目眩、疲倦乏力、腰腿酸軟等癥；也可用于缺鐵性貧血的輔助治療。方中陳皮、枸杞子、黃芪、黃精、山楂采用水提工藝，丹參、當(dāng)歸、女貞子采用醇提工藝，原標(biāo)準(zhǔn)已通過檢測橙皮苷和含氮量來控制產(chǎn)品質(zhì)量，為了進(jìn)一步有效控制三膠顆粒的質(zhì)量，保證臨床療效，作者參照《中國藥典》[1]2005年版一部丹參項下，采用HPLC法對三膠顆粒中丹參的主要成份丹酚酸B進(jìn)行含量測定研究，本方法簡便，快捷、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，能有效控制三膠顆粒的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

島津LC-10A型高效液相色譜儀（SPD-10AVP檢測器LC-10AVP泵）；C18色譜柱（Hypersil 200×4.6mm，5μm，大連依利特公司）；甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸水，其它試劑均為分析純；丹酚酸B對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為111562-200403），三膠顆粒由湖南飛鴿藥業(yè)有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Hypersil BDS C18色譜柱（4.6×200 mm，5μm），流動相甲醇-乙腈-甲酸-水（27∶10∶1∶62），流速1.0mL/min，柱溫為室溫，檢測波長286nm，進(jìn)樣量5μL。在上述色譜條件下，丹酚酸B峰和樣品中其它組的峰可達(dá)基線分離，且與其它相鄰峰分離度＞1.5，按丹酚酸B峰計算，理論板數(shù)在2000以上，陰性對照無干擾，對照品、供試品、陰性樣品、丹酚酸B色譜圖見圖1。

圖1 三膠顆粒HPLC圖

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取丹酚酸B對照品適量，加75%甲醇制成每1mL含0.04mg的溶液，即得。

2.3 線性關(guān)系考察

精密吸取濃度為0.2082mg/ml的丹酚酸B對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置10mL量瓶中，加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，吸取上述對照品系列溶液5μL，進(jìn)樣，測定峰面積積分值，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為：Y＝977976X+13030，r＝0.9998，結(jié)果表明丹酚酸B在0.05205～0.5205μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.4 供試品溶液的制備

取裝量差異項下的內(nèi)容物，研細(xì)，取細(xì)粉約1.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流60分鐘，放冷，密塞，再稱定重量，用75%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5 陰性溶液的制備

取除丹參外的其余處方量藥物，按制備工藝方法制備缺丹參的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺丹酚酸B的陰性溶液。

2.6 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液5μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定丹酚酸B峰面積，RSD1.3%。

2.7 穩(wěn)定性試驗

分別精密吸取對照品和同一供試品溶液5μL，于0、2、4、6、10小時進(jìn)樣，對照品RSD1.4%，供試品RSD1.7%，

2.8 重復(fù)性試驗

取同一批號樣品6份，按上述含量測定項下的條件，依法測定，計算，結(jié)果RSD1.0%。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量為1.492mg/g的樣品（批號：091011）約0.6g，共6份，置50mL容量瓶中，分別精密加入丹酚酸B對照品溶液（1.03mg/mL）1.0ml，即1.03mg，按上述含量測定項下的方法測定含量，計算回收率，結(jié)果表明，本方法加樣回收率好。結(jié)果見表1。

表1 丹酚酸B加樣回收率

2.10 樣品測定

取3批樣品（091011，091012，091013），按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，按2.1色譜條件進(jìn)行含量測定，計算含量，結(jié)果3批三膠顆粒中丹酚酸B的含量分別為每袋14.92，15.01，14.83mg，RSD分別為0.47%，0.94%，1.0%。

3 討 論

3.1 供試品溶液的制備

參照《中國藥典》2005年版一部藥材丹參中丹酚酸B含量測定的提取方法，以75%甲醇為溶劑，加熱回流進(jìn)行提取，并對提取時間進(jìn)行了考察，結(jié)果表明樣品經(jīng)75%甲醇加熱回流60min，丹酚酸B含量不再增加，說明丹酚酸B已提取完全。

3.2 樣品中丹酚酸B含量限度的確定

制劑中每劑處方含丹參90g，共制成100袋，每袋含丹參藥材0.9g，按《中國藥典》2005版一部丹參項下規(guī)定的丹酚酸B最低含量限度3.0%計，樣品的最低理論限度值為每袋27mg；三批樣品所用藥材含量為4.48%，樣品中丹酚酸B的轉(zhuǎn)移率約為40%，以此轉(zhuǎn)移率折算最低理論限度值，數(shù)值為每袋10.8mg，根據(jù)上述計算，同時根據(jù)測定結(jié)果，確定本品含丹參以丹酚酸B計，每袋不得少于10.0mg。

[1]國家藥典委員會.中國藥典.一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:52.