鄧曉琴，楊茂，劉穎，田智，薛薇，楊永紅

(四川省樂山市中心血站，四川樂山614000)

血站實(shí)驗(yàn)室酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控的實(shí)施與探討

鄧曉琴，楊茂，劉穎，田智，薛薇，楊永紅

(四川省樂山市中心血站，四川樂山614000)

目的探討血站實(shí)驗(yàn)室酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)實(shí)施統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)控的可行性、質(zhì)控方法、質(zhì)控規(guī)則與控制目標(biāo)。方法收集2006～2011年樂山市中心血站實(shí)驗(yàn)室實(shí)施即刻法和Levey-Jennings質(zhì)控圖(L-J法)室內(nèi)質(zhì)控的情況，統(tǒng)計(jì)分析室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果，評(píng)價(jià)現(xiàn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)控方法，討論ELISA室內(nèi)質(zhì)控的控制目標(biāo)。結(jié)果即刻法和L-J法簡(jiǎn)便易行，可為ELISA實(shí)驗(yàn)是否在控提供客觀依據(jù)，有助于提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力;ELISA室內(nèi)質(zhì)控的變異系數(shù)(CV%)，批間小于20%為控制目標(biāo)。結(jié)論即刻法和L-J法等統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控可監(jiān)控ELISA實(shí)驗(yàn)的精密度變化，是一種保證檢測(cè)結(jié)果可靠性的有效技術(shù)手段;統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)控并非ELISA質(zhì)量控制的全部，作用有限，全面質(zhì)量管理有賴于實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系的建立、實(shí)施、監(jiān)控和持續(xù)改進(jìn)。

血站;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);質(zhì)量控制;室內(nèi)質(zhì)控

醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室自1950年代開始采用質(zhì)控圖進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)控起，經(jīng)過不斷完善，定量實(shí)驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)控已成為一種必要的質(zhì)量保證技術(shù)手段。為保證臨床血液用血的質(zhì)量，衛(wèi)生部《血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范》13.4款明確要求血站實(shí)驗(yàn)室建立并實(shí)施與檢測(cè)項(xiàng)目相適應(yīng)的室內(nèi)質(zhì)控程序。定性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)是血站實(shí)驗(yàn)室的主要檢測(cè)項(xiàng)目，至今無完善的室內(nèi)質(zhì)控方法，一些實(shí)驗(yàn)室嘗試將統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用于ELISA室內(nèi)質(zhì)控［1，2］。樂山市中心血站實(shí)驗(yàn)室1998年開始應(yīng)用即刻法和Levey-Jennings質(zhì)控圖(L-J法)［2］等實(shí)施ELISA室內(nèi)質(zhì)控，取得了良好效果，積累了大量數(shù)據(jù)和經(jīng)驗(yàn)。本文就ELISA實(shí)施統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)控的可行性、質(zhì)控方法、規(guī)則、控制目標(biāo)，和一些值得探究的技術(shù)問題，進(jìn)行交流和探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料樂山市中心血站實(shí)驗(yàn)室2006年1月至2011年12月的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP ELISA項(xiàng)目的室內(nèi)質(zhì)控記錄數(shù)據(jù)。

1.2 檢測(cè)方法與儀器加樣儀器為GENESIS RSP/150/瑞士ML STAR/8CH，檢測(cè)儀器為瑞士ML F.A.M.E.24/20，檢測(cè)按各檢測(cè)項(xiàng)目的SOP進(jìn)行，每一檢測(cè)微板定義為1批，每批設(shè)1孔質(zhì)控位并以其S/CO值作為質(zhì)控值。質(zhì)控品購(gòu)自衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心和康徹斯坦生物，檢測(cè)結(jié)果呈弱陽(yáng)性(S/CO值為2～5)，正式使用前的確認(rèn)內(nèi)容包括質(zhì)控品檢測(cè)S/CO值，批內(nèi)和批間結(jié)果的重復(fù)性等。更換試劑廠家與批號(hào)，或更換質(zhì)控品廠家、批號(hào)與濃度時(shí)，前20次質(zhì)控采用即刻法，第21次后采用L-J質(zhì)控圖法，質(zhì)控規(guī)則選用Westgard多規(guī)則［2］，包括22S、13S、R4S、41S、7X和7↑↓，符合1個(gè)以上規(guī)則即判為“失控”，以12S為警告規(guī)則。

1.3 分析方法按檢測(cè)項(xiàng)目、檢測(cè)試劑、質(zhì)控品、檢測(cè)時(shí)間段等，分別統(tǒng)計(jì)和分析HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)。質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)包括質(zhì)控檢測(cè)批數(shù)、質(zhì)控品檢測(cè)值、質(zhì)控品檢測(cè)值的精密度(以變異系數(shù)CV%計(jì))、“失控”率及失控類型等。分別統(tǒng)計(jì)和分析不同廠家生產(chǎn)的同種試劑，同廠家不同批號(hào)試劑的質(zhì)控結(jié)果。質(zhì)控品檢測(cè)值以吸光度值與cut off值的倍數(shù)即S/CO值計(jì)算。檢測(cè)結(jié)果差異的顯著性檢驗(yàn)采用配對(duì)資料的t檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的質(zhì)控結(jié)果類似，各項(xiàng)目質(zhì)控值的變異系數(shù)均較恒定，各批次質(zhì)控值的批間CV%大多在20%以內(nèi)，平均CV%均小于20%，結(jié)果見表1。不同廠家試劑對(duì)相同質(zhì)控品的檢測(cè)值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，同廠家不同批號(hào)試劑對(duì)相同質(zhì)控品的質(zhì)控結(jié)果差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，部分批號(hào)差異顯著(P＜0.05)。有1個(gè)批次某國(guó)產(chǎn)HBsAg試劑在使用前確認(rèn)時(shí)發(fā)現(xiàn)對(duì)相同質(zhì)控品的質(zhì)控值和陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)值均顯著低于前一批號(hào)(P＜0.05)，給予了退貨處理。2010年10月后生產(chǎn)的國(guó)產(chǎn)試劑由一步法改為兩步法后，對(duì)同種同濃度質(zhì)控品的檢測(cè)值明顯增大，質(zhì)控品選擇了更低濃度，提示試劑方法學(xué)改變后檢測(cè)靈敏度有提高。資料統(tǒng)計(jì)中還發(fā)現(xiàn)，同批試劑對(duì)同廠家標(biāo)示濃度相同但批號(hào)不同的質(zhì)控品的檢測(cè)值差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，可能因?yàn)镹CU/ml是相對(duì)而非絕對(duì)濃度單位，質(zhì)控品生產(chǎn)廠家隨市售檢測(cè)試劑的改變而對(duì)質(zhì)控品的相對(duì)濃度單位作了調(diào)整。

各項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控，符合前述規(guī)則的年“失控”率均小于5%，“失控”情形最多的是x +3s(包括即刻法SI大于n3s)，失控原因大都因孵育時(shí)間延長(zhǎng)所致，其他符合規(guī)則的“失控”依次是7X、22S、41S、R4S、7↑↓和-3s，實(shí)驗(yàn)室通常只對(duì)符合-3s規(guī)則(L-J法)和SI下限值小于x -3s(即刻法)的“失控”整批重檢，其他“失控”多因?qū)φ掌窓z測(cè)結(jié)果正常“實(shí)驗(yàn)有效”未予特別處理，見表1。

表1 2006年1月至2011年12月室內(nèi)質(zhì)控情況

3 討論

3.1 ELISA質(zhì)控的控制目標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)有可以溯源和比對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)室技術(shù)文件對(duì)其允許誤差等有明確的控制要求，但ELISA實(shí)驗(yàn)尚無統(tǒng)一的控制目標(biāo)，即便權(quán)威的美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法案CLIA'88對(duì)臨床免疫學(xué)定性檢測(cè)的質(zhì)控也僅要求“至少設(shè)置一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)陰性對(duì)照，對(duì)照品檢測(cè)結(jié)果符合預(yù)期”。因ELISA實(shí)驗(yàn)缺少可溯源的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，質(zhì)控品和控制要求均由實(shí)驗(yàn)室自行規(guī)定，控制目標(biāo)有較大的隨意性。變異系數(shù)CV%的大小與L-J質(zhì)控圖控制限有關(guān)，CV%太大不易發(fā)現(xiàn)“失控”，CV%太小則易出現(xiàn)過多假“失控”，本文資料顯示，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件和檢測(cè)參數(shù)時(shí)，ELISA實(shí)驗(yàn)的批間變異在20%以內(nèi)，可作為ELISA實(shí)驗(yàn)CV%控制的最低目標(biāo)［5］。

3.2 ELISA質(zhì)控方法與規(guī)則血站實(shí)驗(yàn)室需最大限度防止陽(yáng)性結(jié)果“漏檢”，即靈敏度要求高于特異性要求。ELISA質(zhì)控可用即刻法和L-J法，但質(zhì)控規(guī)則應(yīng)與定量實(shí)驗(yàn)有別，并非所有符合Westgard規(guī)則的“失控”都有意義，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注質(zhì)控值低于-3s的情形，其余“失控”應(yīng)結(jié)合試劑盒內(nèi)控制品檢測(cè)結(jié)果和實(shí)驗(yàn)的“有效性”綜合考慮。目前市售ELISA質(zhì)控品濃度多為相對(duì)定量單位，質(zhì)控品濃度選擇時(shí)宜將其吸光度值選在弱陽(yáng)性范圍，S/CO值以2～5為宜，S/CO值太大時(shí)易降低質(zhì)控意義，太小會(huì)增加質(zhì)控難度。另外，不同試劑cut off值有較大區(qū)別，不能簡(jiǎn)單地把質(zhì)控品檢測(cè)S/CO值的高低等同于靈敏度來評(píng)價(jià)試劑。

3.3 ELISA質(zhì)控ELISA為多反應(yīng)、多試劑和多步驟的檢測(cè)方法，操作難度較大。權(quán)威工具書對(duì)ELISA質(zhì)控僅要求使用試劑盒內(nèi)提供的控制品［4］，控制品檢測(cè)OD值符合要求即表明試劑有效，結(jié)果正確。統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控可監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的精密度變化，“在控”結(jié)果可使實(shí)驗(yàn)者對(duì)標(biāo)本結(jié)果更有信心，量化的室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，有利于管理者了解實(shí)驗(yàn)條件的控制和實(shí)驗(yàn)的批間變異情況，有助于試劑的選擇與客觀評(píng)價(jià)，L-J法和即刻法等質(zhì)控方法簡(jiǎn)便易行，實(shí)用有效，值得推廣應(yīng)用。

［1］張永俊.ELISA法室內(nèi)質(zhì)控模式的建立［J］.公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008，19(5):69-70.

［2］王玲玲，汪全民，董玲鳳.探討即刻法在ELISA室內(nèi)質(zhì)控應(yīng)用中的局限性［J］.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2008，26(6):703-704.

［2］鄭懷競(jìng)，李金明，邢文革，等.免疫學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)評(píng)及室內(nèi)質(zhì)控［M］.北京:北京醫(yī)科大學(xué)，中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1997:38-63.

［4］陶義訓(xùn).酶聯(lián)免疫技術(shù)［M］//李影林.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)全書.北京:人民衛(wèi)生出版社，1996:2141-2150.

［5］李金明.臨床酶聯(lián)免疫測(cè)定技術(shù)［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2006:169-173.

The Implementation and Exploration of ELISA Internal Quality Control in Blood Bank Labo-ratory

DENG Xiao-qin，YANG Mao，LIU Ying，TIAN Zhi，XUE Wei，YANG Yong-hong(Leshan Blood Bank，Leshan 614000，China)

ObjectiveTo explore the feasibility，quality control method，regulations and objectives of statistical quality control in ELISA experiment.MethodsThe IQC situations of Grubbs and Levey-Jennings applied by blood testing laboratory in Leshan Blood Bank from 2006 to 2011 were reviewed，the IQC results were statistically analyzed，the existing statistical quality control methods were evaluated and the requirements of ELISA IQC were discussed.ResultsGrubbs and Levey-Jennings are simple and easy to implement，can provide objective basis for judging whether ELISA is in control and improve detectability of the laboratory.When IQC is applied in ELISA，inter-assay CV%is less than 20%.ConclusionStatistical quality control methods such as Grubbs and Levey-Jennings can monitor the precision change of ELISA and they are effective and reliable techniques to ensure test results.Statistical IQC which has some limitations can not control the whole quality of ELISA.The all-sided quality control depends on the establishment，implementation，monitoring and improvement of laboratory quality system.

Blood Bank;ELISA;Quality control;Internal quality coutrol

R19;R197.323;R446.63

A

1672-6170(2012)05-0090-03

2012-03-26;

2012-06-26)