陳建福，陳健旋，施偉梅

（1.漳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 食品與生物工程系，福建 漳州 363000；2.贛南醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，江西 贛州 341000）

鹽酸肼屈嗪是煙酸類衍生物，別名肼苯噠嗪、肼酞嗪，是一類具有降壓和抗心律失常作用的藥物，臨床上主要用作擴張動脈血管藥，可用于腎性高血壓及舒張壓較高的病人［1］.目前測定鹽酸肼屈嗪的方法主要有液相色譜法［2-3］、等離子體共振法［4］、光譜法［5-6］、茚三酮法［7］等，已有文獻(xiàn)［8］報道化學(xué)發(fā)光法測定鹽酸肼屈嗪，是基于磷酸化高錳酸鉀氧化鹽酸肼屈嗪后而產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光體系.在實驗中發(fā)現(xiàn)，在堿性介質(zhì)中，鹽酸肼屈嗪對魯米諾-鐵氰化鉀發(fā)光體系也存在增敏作用，據(jù)此結(jié)合流動技術(shù)建立了測定鹽酸肼屈嗪的流動注射化學(xué)發(fā)光分析法［9］.并用于鹽酸肼屈嗪片劑中鹽酸肼屈嗪含量的測定，這為鹽酸肼屈嗪的測定提供了一個簡便、易行、靈敏度和精密度高且分析線性范圍寬的新方法.

1 實驗部分

1.1 主要原料和試劑

鹽酸肼屈嗪（上海江萊生物科技有限公司）標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取1.966 4g的鹽酸肼屈嗪標(biāo)準(zhǔn)品，用蒸餾水溶解后定容于100mL的棕色容量瓶中，得0.1mol／L標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用時用蒸餾水逐級稀釋至所需濃度.

魯米諾（美國Sigma公司）標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取1.771 6g的魯米諾，用0.01mol／L的碳酸鈉溶液溶解，并用0.01mol／L的碳酸鈉溶液定容于100mL棕色容量瓶，配制成0.1mol／L標(biāo)準(zhǔn)溶液，避光保存.

鐵氰化鉀（汕頭西隴化工有限公司）溶液、NaOH溶液等按常規(guī)配制，使用時用逐級稀釋至所需濃度；

實驗中所用藥品均為分析純，蒸餾水為二次蒸餾水.

1.2 實驗儀器

IFFM-D流動注射化學(xué)發(fā)光分析儀，IFFS-A型多功能化學(xué)發(fā)光檢測器（西安瑞邁電子科技有限公司）.

1.3 實驗方法

流動注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)流路如圖1.鐵氰化鉀和魯米諾分別從鐵氰化鉀和魯米諾溶液流路流入并混勻.蒸餾水從蒸餾水或分析試液流路中流入，作為空白對照試驗，記錄其發(fā)光信號強度（I0）.待空白信號穩(wěn)定后，用一定濃度的鹽酸肼屈嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液替代蒸餾水從蒸餾水或分析試液流路中流入，記錄發(fā)光信號強度為（Is）.用 ΔI／I0（ΔI＝Is-I0）表示兩者的相對發(fā)光強度，并進(jìn)行定量測定.

圖1 流動注射化學(xué)分析儀流路圖Fig.1 Schematic diagram of flow-injection chemiluminescence analysis

2 結(jié)果與討論

2.1 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)動力學(xué)曲線

在室溫下，采用靜態(tài)注射化學(xué)發(fā)光分析法研究了該化學(xué)發(fā)光體系的靜態(tài)動力學(xué)曲線，考察了鹽酸肼屈嗪加入前后魯米諾-鐵氰化鉀體系的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的動力學(xué)曲線，如圖2所示.將鹽酸肼屈嗪（或蒸餾水，作空白對照）注入到魯米諾和鐵氰化鉀的混合液后，4s后即產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，發(fā)光強度到達(dá)峰值時所需時間為5s，發(fā)光強度由峰值衰減至零時只需13s，由此可見此反應(yīng)為快速化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，且鹽酸肼屈嗪的加入，對魯米諾-鐵氰化鉀化學(xué)發(fā)光體系有增敏作用，結(jié)合流動注射技術(shù)可對鹽酸肼屈嗪進(jìn)行測定.

圖2 魯米諾-鐵氰化鉀-鹽酸肼屈嗪化學(xué)發(fā)光動力學(xué)曲線Fig.2 Kinetic curves of Luminol-K3Fe（CN）6-Hydralazine Hydrochloride

2.2 反應(yīng)條件的選擇

2.2.1 魯米諾濃度的影響

在該化學(xué)發(fā)光體系中，魯米諾是化學(xué)發(fā)光試劑，其濃度是體系化學(xué)發(fā)光強度的重要影響因素，實驗考察了魯米諾濃度在1.0×10-7mol／L～1.0×10-4mol／L范圍內(nèi)對化學(xué)發(fā)光強度的影響.實驗發(fā)現(xiàn)，化學(xué)發(fā)光增敏相對發(fā)光強度ΔI／I0，隨著魯米諾濃度的增大而增大，當(dāng)魯米諾溶液濃度在2.0×10-6mol／L時，反應(yīng)有較高的發(fā)光強度和較低背景信號，此時ΔI／I0具有最大值.故選擇魯米諾的最佳濃度為2.0×10-6mol／L.

2.2.2 鐵氰化鉀濃度的影響

鐵氰化鉀是化學(xué)發(fā)光體系中的氧化劑，其濃度對體系的化學(xué)發(fā)光強度有重要的影響.實驗考察了鐵氰化鉀濃度在1.0×10-5mol／L～1.0×10-2mol／L范圍內(nèi)對相對發(fā)光強度的影響.實驗發(fā)現(xiàn)，隨鐵氰化鉀濃度的增大，化學(xué)發(fā)光增敏相對發(fā)光強度ΔI／I0先增大后減小，當(dāng)鐵氰化鉀濃度為8.0×10-4mol／L時，達(dá)到最大值，故選擇鐵氰化鉀的最佳濃度為8.0×10-4mol／L.

2.2.3 反應(yīng)介質(zhì)pH值的影響

魯米諾-鐵氰化鉀體系化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在堿性環(huán)境中有較好的發(fā)光信號，且體系的pH值對發(fā)光反應(yīng)有重要的影響，堿性過低，信號較差，不利于低濃度的檢測，堿性太強，則背景信號過高，信噪比反而下降.考察了pH值在8～14范圍內(nèi)對化學(xué)發(fā)光增敏相對發(fā)光強度ΔI／I0的影響.實驗發(fā)現(xiàn)，隨著pH值的增大，化學(xué)發(fā)光增敏相對發(fā)光強度ΔI／I0先增大后減小，當(dāng)pH值在12時，相對發(fā)光強度有最大值.故選擇pH值為12.

2.3 校準(zhǔn)曲線、精密度和檢出限

在選定的最佳條件下，按照實驗方法對不同濃度的鹽酸肼屈嗪溶液相對發(fā)光強度進(jìn)行測定，繪制工作曲線.結(jié)果表明，樣品濃度在2.0×10-8mol／L～1.0×10-6mol／L范圍內(nèi)體系的相對發(fā)光強度與其濃度呈良好的線性關(guān)系.為了提高測定的精密度和準(zhǔn)確度，校準(zhǔn)曲線按鹽酸肼屈嗪溶液濃度的數(shù)量級分段繪制.校準(zhǔn)曲線的基本參數(shù)列于表1.對濃度為6.0×10-7mol／L的鹽酸肼屈嗪溶液進(jìn)行平行測定11次，得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.6%，根據(jù)國際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會（IUPAC）建議，計算方法檢出限為4×10-9mol／L.

2.4 干擾實驗

為了評價所建立分析方法的選擇性，實驗測試了鹽酸肼屈嗪溶液中可能存在的無機離子及有機物對本實驗方法的干擾，以6.0×10-7mol／L的鹽酸肼屈嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液做干擾實驗，實驗結(jié)果表明：當(dāng)相對誤差小于±5%時，1 000倍的淀粉、蔗糖、Na＋、K＋、Cl-，500倍的 F-、CN-、NO-3、環(huán)糊精、100倍的葡萄糖、Ca2＋、Mg2＋、Br-、SCN-，10倍的乳糖、檸檬酸均不干擾測定.

表1 校準(zhǔn)曲線回歸方程Table 1 Regression equations of the calibration curves

2.5 樣品分析

取鹽酸肼屈嗪片劑20片（山東濰坊制藥廠有限公司），準(zhǔn)確稱量求得每片的平均質(zhì)量，研磨，分別取藥品粉末量0.025g、0.05g、0.075g各三份，溶解于水，用干燥濾紙迅速濾去雜質(zhì)，定容，稀釋到測試范圍內(nèi)，同時作加標(biāo)回收率，其結(jié)果見表2.從實驗結(jié)果可知，加標(biāo)回收測得的回收率在99.1%～100.8%之間，結(jié)果滿意.

表2 鹽酸肼屈嗪和回收率測定結(jié)果Table 2 Determination results ofhydralazine hydrochloride and recovery experiments

2.6 機理分析

在堿性介質(zhì)中，鐵氰化鉀氧化魯米諾產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光，主要是該氧化還原反應(yīng)產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的3-氨基鄰苯二甲酸，當(dāng)從激發(fā)態(tài)躍遷到基態(tài)時，釋放的能量以光子的形式存在，因而產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象［10］.而當(dāng)在加入少量的鹽酸肼屈嗪時，相對化學(xué)發(fā)光強度具有明顯的增敏作用，這是因為鹽酸肼屈嗪分子中含有還原性強的胺基（—NH2）、亞胺基（＝NH）等基團(tuán)，在堿性條件下，能被鐵氰化鉀氧化，生成能量較高的不穩(wěn)定中間產(chǎn)物自由基，生成的自由基在堿性介質(zhì)中氧化魯米諾產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光［11］.該反應(yīng)機理如下：

中間產(chǎn)物自由基＊；

3 結(jié) 論

在堿性條件下，鹽酸肼屈嗪對魯米諾-鐵氰化鉀化學(xué)反應(yīng)發(fā)光體系具有增敏作用，據(jù)此，對影響化學(xué)發(fā)光的各種因素進(jìn)行了研究，建立了魯米諾-鐵氰化鉀體系流動注射化學(xué)發(fā)光測定鹽酸肼屈嗪的新方法，并用于鹽酸肼屈嗪片劑中鹽酸肼屈嗪含量的測定，這為鹽酸肼屈嗪的測定提供了一個簡便、易行、靈敏度和精密度高且分析線性范圍寬的新方法.

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）［S］.2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：625-626.（State Pharmacopoeia Commission.Codex of People’s Republic of China ［S］.2010version.Beijing：China medical science press，2010：625-626.）

［2］ Liu Y Y，Li H，Luo H J，et al.LC-MS-MS Method for Quantification of Hydralazine in BALB／C Mouse Plasma and Brain：Application to Pharmacokinetic Study［J］.Chromatographia，2011，73（11）：1183-1188.

［3］ 邱穎恒，周敏賢，李玉蘭.反相高效液相色譜法測定鹽酸肼屈嗪片的含量［J］.中國藥師，2008，11（11）：1305-1307.（Qiu Yingheng，Zhou Minxian，Li Yulan.Determination of Hydralazine Hydrochloride Tablets by HPLC［J］.China Pharmacist，2008，11（11）：1305-1307.）

［4］ Wang Y，Zhan L，Huang C Z.One-pot Preparation of Dextran-capped Gold Nanoparticles at Room Temperature Dihydralazine Sulfate in Uric Samples［J］.Analytical Methods，2010，2（12）：1982-1988.

［5］ Shoukry A F，Issa Y M，Ibrahim H，et al.Atomic Emission Spectrometric Determination of Antazoline，Hydralazine and Amiloride Hydrochlorides，and Quinine Sulfate Based on Formation of Ion Associates with Manganese Thiocyanate［J］.Analyst，1995，120（4）：1211-1213.

［6］ Danielson N D，Bartolo R G. Determination of Hydralazine in Tablets by Fluorescence［J］.Analytical Letters，1983，16（5）：343-354.

［7］ 付海波，詹蕾，王健.硼酸催化茚三酮與鹽酸肼屈嗪的反應(yīng)及分析應(yīng)用［J］.西南師范大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2012，37（5）：43-48.（Fu Haibo，ZHAN Lei， WANG Jian.Boric Acid Catalyzed Ninhydrin-hydralazine Hydrochloride Reaction and Its Application to Analysis of Hydralazine Hydrochloride［J］.Journal of Southwest China Normal University：Natural Science Edition，2012，37（5）：43-48.

［8］ Pulgarn J A，Lpez P F，Nuo P H.Time-resolved Chemiluminescent Analysis of Hydralazine in Pharmaceuticals ［J］. Analytical and bioanalytical chemistry，2006，384（2）：423-430.

［9］ 陳建福.反相流動注射化學(xué)發(fā)光法測定鹽酸林可霉素［J］.嘉應(yīng)學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)版，2012，30（2）：39-41.（Chen Jianfu.Reverse Flow Injection ChemiluminescenceDetermination of Lincomycin Hydrochloride［J］.Journal of Jiaying University：Natural Science，2012，30（2）：39-41.

［10］ 陳文娟，陳建福，陳健旋.魯米諾—高碘酸鉀化學(xué)發(fā)光法測定鹽酸二甲雙胍［J］.濟(jì)寧學(xué)院學(xué)報，2012，33（3）：84-87.（Chen Wenjuan， Chen Jianfu， Chen Jianxuan.Determination of Metformin Hydrochloride by Chemiluminescence Method based on Luminol-potassium Periodate System［J］.Journal of Jining University，2012，33（3）：84-87.）

［11］ Lu C，Song G Q，Lin J M.Reactive Oxygen Species and Their Chemiluminescence Detection methods［J］.Trends in Analytical Chemistry，2006，25（10）：985-995.