杜雙奎，趙曉野，李志西*

(西北農林科技大學食品科學與工程學院，陜西 楊凌 712100)

枳椇醋解酒護肝、減肥降脂作用研究

杜雙奎，趙曉野，李志西*

(西北農林科技大學食品科學與工程學院，陜西 楊凌 712100)

為研究枳椇果柄釀制的枳椇果醋解酒護肝、減肥降脂的功能特性。以20只小鼠隨機分成2組，模型組和枳椇醋組。模型組、枳椇醋組每天先分別灌胃0.1mL的生理鹽水、0.1mL枳椇醋，30min后再各灌胃0.15mL的52%配制酒，30d連續(xù)酒精灌胃后取小鼠肝臟制成10%的勻漿，測定小鼠肝臟中的還原型谷胱甘肽(GSH)含量、丙二醛(MDA)含量和乙醇脫氫酶(ADH)活力，并對肝臟病變情況觀察；另以50只小鼠隨機分為5組，即正常組、肥胖模型組、枳椇醋減肥實驗組、高血脂模型組、枳椇醋降血脂實驗組，每組10只。小鼠喂養(yǎng)30d后，測定體質量、脂肪含量、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量。結果表明：枳椇醋能夠提高小鼠肝臟中GSH含量和ADH活力，降低MDA含量，可顯著緩解連續(xù)灌酒引起的肝臟脂肪變性和肝細胞腫大等癥狀，具有解酒護肝作用。枳椇醋對小鼠的體質量增長和脂肪組織的生成有一定的抑制作用，具有減肥功效；食用枳椇醋可預防動脈硬化，降低血清中的血脂含量，具有降血脂作用。

枳椇醋；急性酒精中毒；護肝；減肥；降血脂

枳椇(Hovenia dulcisThunb.)為鼠李科(Rhamnaceae)拐棗屬(HoveniaThunb.)植物，又名拐棗、萬壽果、金鉤子。在我國除東北以外各省區(qū)均有分布，目前多以野生、半野生為主，其中尤以陜、川、渝量多質佳[1-3]。枳椇葉含有豐富的皂苷、黃酮、生物堿等活性成分，在抑制應激性胃潰瘍、利尿、降壓、防癌[4]等方面有一定作用；枳椇子在解酒[5-7]、保肝[7-9]、降壓[10-11]、抗致突變、抗腫瘤[12-13]、抗脂質過氧化[14]等方面具有重要藥理作用；枳椇果柄含有豐富的糖類、氨基酸、維生素等營養(yǎng)物質[3-4]，但由于其個體小、殘渣多、適口性差，長期以來僅小部分被食用，尚未被開發(fā)其應用價值。果醋是一種新興保健醋。枳椇醋是以新鮮枳椇果肉為原料釀造而成的一種口感醇厚、具有獨特的香味新型果醋，在預防小鼠急性酒精中毒方面有顯著效果[15]。本研究在前期研究基礎上，以枳椇醋為實驗材料，以ICR小鼠為載體，探討枳椇醋的解酒護肝功能、減肥功能和降血脂功能，以期為枳椇果柄的利用提供指導。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

ICR小鼠，(20±2)g，購于第四軍醫(yī)大學動物中心，實驗動物許可證號：SCXK(軍)2009-007。

1.2 材料與試劑

枳椇醋：剝離枳椇子的枳椇果柄，采用液態(tài)深層發(fā)酵法釀制枳椇醋，酸度為3.0g/100mL(以乙酸計)。

小鼠灌胃用酒：酒度52%，用無水乙醇與純凈水按體積比52:48調配而成；小鼠基礎飼料：第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供，符合GB14924.3—2001《實驗動物小鼠大鼠配合飼料》；高脂肪營養(yǎng)飼料：每100g 基礎飼料中添加奶粉10g、豬油10g、雞蛋1枚、濃魚肝油10滴，混和均勻，制成高脂肪營養(yǎng)飼料；高血脂營養(yǎng)飼料：將蛋黃粉10g、豬油5g、膽鹽0.5g與基礎飼料85g混合均勻，制成高血脂營養(yǎng)飼料。

乙醇脫氫酶(ADH)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、還原型谷胱甘肽(GSH) 試劑盒、總膽固醇(TC)試劑盒、甘油三酯(TG)試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒 南京建成生物工程有限公司。

1.3 儀器與設備

ILab600STD全自動生化分析儀、UV-2550雙光束紫外分光光度計 日本島津公司；舒美KQ218超聲波儀 江蘇省昆山市超聲儀器有限公司；TD5A臺式離心機 湖南凱達科學儀器有限公司；Leisa石蠟切片機 德國徠卡公司；Motic BA400光學顯微鏡 德國麥克奧迪公司。

1.4 方法

1.4.1 枳椇醋對連續(xù)灌酒小鼠肝功能影響的實驗設計

20只ICR小鼠隨機分成2組，即模型組、枳椇醋組，每組10只。模型組、枳椇醋組每天先分別灌胃0.1mL的生理鹽水、0.1mL枳椇醋，30min后再各灌胃0.15mL的52%配制酒，連續(xù)灌胃30d，處死前禁食12h。

1.4.2 枳椇醋對小鼠減肥降脂影響的實驗設計

50只ICR小鼠，適應性喂養(yǎng)1周，隨機分為5組，即正常組、肥胖模型組、枳椇醋減肥實驗組、高血脂模型組、枳椇醋降血脂實驗組，每組10只。正常組飼喂基礎飼料、肥胖模型組和枳椇醋減肥實驗組均飼喂高脂肪營養(yǎng)飼料，高血脂模型組和枳椇醋降血脂實驗組均飼喂高血脂營養(yǎng)飼料，連續(xù)自由采食30d。同時對正常組和模型對照組灌胃給予0.2mL/(只·d)蒸餾水，其余各組分別用灌胃給予0.2mL/(只·d) 枳椇醋(酸度3.0g/100mL)，每天1次，連續(xù)灌胃30d。

1.4.3 生化指標測定及病理觀察

1.4.3.1 肝功能指標分析

連續(xù)灌酒實驗組小鼠處死后取肝臟分成兩半，一半制成10%的勻漿，離心取上清液，按照南京建成生物工程研究所說明書中推薦的規(guī)范方法操作測定小鼠肝臟中ADH、MDA、GSH的含量；肝臟另一半立即浸泡在新配制的10%福爾馬林固定液中固定24h，將固定好的組織進行流水沖洗、梯度酒精脫水、石蠟包埋、HE染色，采用Motic BA400光學顯微鏡及Motic Advance 3.0成像系統(tǒng)進行肝臟組織病理變化觀察。

1.4.3.2 減肥降脂指標分析

小鼠喂養(yǎng)30d后，測定體質量，禁食12h，摘眼球取血，血液在37℃水浴30min后，3000r/min離心15min，取上清液得血清，按試劑盒規(guī)范操作測定TC、TG、HDL-C含量，計算動脈硬化指數。

式中：C1為TC含量；C2為HDL-C含量。

將取血后的小鼠處死，摘取生殖器周圍的脂肪，稱質量，計算脂肪系數。

式中：m0為脂肪質量；m1為小鼠體質量。

1.5 統(tǒng)計方法

利用SPSS軟件對試驗數據作t檢驗以比較模型組與對照組、處理組與模型組之間的差異性。

2 結果與分析

2.1 枳椇醋對小鼠肝組織中ADH活力的影響

ADH活力變化會影響到血中乙醇含量，該酶活性降低可使乙醇的體內代謝降低，進而加重乙醇對腦、肝臟等器官的毒害作用。由表1可見，連續(xù)灌胃52%配制酒30d后，與模型組相比，枳椇醋組小鼠肝臟中ADH活力明顯升高(P＜0.01)，表明枳椇醋能明顯加快乙醇分解為乙醛的速度，有利于肝臟中酒精的分解代謝，具有解酒作用，降低酒精對肝細胞的損害作用。

表1 小鼠肝臟中ADH活力、MDA含量以及GSH含量(±s, n=10)Table 1 ADH activity and the contents of MDA and GSH in the liver of mice (±s, n=10)

表1 小鼠肝臟中ADH活力、MDA含量以及GSH含量(±s, n=10)Table 1 ADH activity and the contents of MDA and GSH in the liver of mice (±s, n=10)

注：a. 與模型組比較，有顯著性差異(P＜0.05)；b. 與模型組比較，有極顯著性差異(P＜0.01) 。

組別 ADH活力/ MDA含量/ GSH含量/(U/mg pro) (nmol/mg pro) (g/L)模型組 19.33±2.93 30.14±2.52 11.06±1.51枳椇醋組 85.71±2.40b 27.06±0.60a 25.40±1.40b

2.2 枳椇醋對小鼠肝組織中MDA和GSH含量的影響

由表1可見，枳椇醋組小鼠肝臟中的MDA含量顯著低于模型組(P＜0.05)，枳椇醋組小鼠肝臟中GSH含量極顯著高于模型組(P＜0.01)。表明枳椇醋能顯著降低酒精性肝損傷小鼠肝組織中MDA含量，提高肝組織中GSH含量，對酒精性肝損傷具有較好的保護作用。

2.3 枳椇醋對小鼠肝臟形態(tài)學影響

圖1 小鼠肝臟組織切片(×400)Fig.1 HE staining of mouse liver tissues (×400)

圖1為連續(xù)30d灌胃52%配制酒的小鼠肝臟組織圖片。枳椇醋組的小鼠肝臟與正常組小鼠肝臟細胞大小均一，可見清楚的肝細胞索和肝竇隙結構，而模型組小鼠肝索紊亂，肝細胞腫大，胞漿渾濁，胞漿可見大小不等的脂肪滴，肝竇隙狹窄，甚至消失。表明枳椇醋對長期飲用酒精而造成的肝臟中脂肪肝的形成有抑制作用。

2.4 枳椇醋對減肥模型組小鼠體質量、生殖器周圍脂肪總質量、脂肪系數的影響

3組小鼠體質量開始沒有顯著差異(P＞0.05)，隨著飼喂時間的延長體質量有明顯增加(表2)；從第6天開始，肥胖模型組小鼠體質量增長速度高于正常組小鼠，營養(yǎng)飼料增肥作用顯著(P＜0.01)，肥胖模型建立成功；枳椇醋減肥實驗組小鼠體質量增長速度低于肥胖模型組。

肥胖模型組小鼠生殖器周圍脂肪總質量、脂肪系數顯著高于正常組(P＜0.01)。枳椇醋減肥實驗組小鼠生殖器周圍脂肪總質量和脂肪系數顯著小于肥胖模型組(P＜0.05)，表明枳椇醋具有抑制過剩脂肪的增長作用。

2.5 枳椇醋對降脂模型小鼠血清TC、TG、HDL-C含量和動脈硬化指數的影響

表2 枳椇醋對小鼠體質量、生殖器周圍脂肪總質量、脂肪系數的影響(±s,n=10)Table 2 Effect of Hovenia dulcis Thunb. fruit vinegar on body weight, the weight of total fat tissues around the gonads , fat coefficient of mice (±s,n=10)

表2 枳椇醋對小鼠體質量、生殖器周圍脂肪總質量、脂肪系數的影響(±s,n=10)Table 2 Effect of Hovenia dulcis Thunb. fruit vinegar on body weight, the weight of total fat tissues around the gonads , fat coefficient of mice (±s,n=10)

注：a.與正常組比較，有顯著性差異(P＜0.05)；b.與正常組比較，有極顯著性差異(P＜0.01)；c.與肥胖模型組比較，有顯著性差異(P＜0.05)；d.與模型組比較，有極顯著性差異(P＜0.01)。

生殖器周圍脂肪總 脂肪系0d 6d 12d 18d 24d 30d 質量/g 數/%正常組 22.36±2.50 25.86±2.51 30.93±2.58 34.77±2.54 36.41±2.77 38.40±2.81 0.89±0.22 2.43±0.41肥胖模型組 22.99±2.41 31.05±2.67b 36.73±2.75b 41.07±2.49b 42.13±2.44b 44.23±3.36b 1.78±0.29b 4.13±0.46b枳椇醋減肥實驗組 23.11±2.01 31.04±3.32 36.27±3.25 39.72±3.55 41.04±4.15 42.96±3.85 1.39±0.24c 3.49±0.45c組別 體質量

表3 枳椇醋對降脂模型小鼠血清TC、TG、HDL-C含量和動脈硬 化 指 數 的 影 響 (±s, n=10)Table 3 Effect of Hovenia dulcis Thunb. fruit vinegar on serum lipid indices and arteriosclerosis index of mice (±s, n=10)

表3 枳椇醋對降脂模型小鼠血清TC、TG、HDL-C含量和動脈硬 化 指 數 的 影 響 (±s, n=10)Table 3 Effect of Hovenia dulcis Thunb. fruit vinegar on serum lipid indices and arteriosclerosis index of mice (±s, n=10)

注：a.與正常組比較，有顯著性差異(P＜0.05)；b.與正常組比較，有極顯著性差異(P＜0.01)；c.與高脂模型組比較，有顯著性差異(P＜0.05)；d.與高脂模型組比較，有極顯著性差異(P＜0.01)。

組別 TC含量/ TG含量/ HDL-C含量/ 動脈硬化(mmol/L) (mmol/L) (mmol/L) 指數/%正常組 3.42±0.25 0.87±0.22 1.56±0.16 1.21±0.28高血脂模 5.32±0.23b 1.06±0.23a 2.28±0.16b1.33±0.30a型組枳椇醋降血 4.93±0.30c 1.01±0.10 2.67±0.37 0.89±0.32d脂實驗組

由表3可見，高血脂模型組小鼠血清TC、TG、HDL-C含量以及動脈硬化指數顯著高于正常組(P＜0.01，P＜0.05)，建模成功。枳椇醋降血脂實驗組小鼠血清中TC含量顯著低于高血脂模型組(P＜0.05)，枳椇醋對長期進食高血脂飼料小鼠血清中TC的增加具有明顯的抑制作用。枳椇醋降血脂實驗組小鼠血清中TG含量、HDL-C含量與高血脂模型組沒有顯著差異(P＞0.05)。枳椇醋降血脂實驗組小鼠動脈硬化指數顯著低于高血脂模型組(P＜0.01)，表明枳椇醋具有顯著的降血脂作用。

3 結 論

枳椇醋能明顯提高小鼠肝臟中ADH的活力，加快乙醇分解為乙醛的速度，阻止小鼠肝臟內MDA含量的升高，抑制肝臟內的氧化反應，降低GSH的消耗，起到解酒護肝作用。連續(xù)灌酒30d的小鼠肝臟的HE染色病理切片觀察表明枳椇醋能顯著緩解連續(xù)灌酒引起的肝臟脂肪變性和肝細胞腫大等癥狀，可有效緩解酒精對小鼠肝臟的損傷作用。

枳椇醋具有抑制小鼠體質量增長、過剩脂肪堆積作用，可明顯抑制小鼠血清中TC、TG、HDL-C含量及動脈硬化指數的增長，控制血脂升高，具有減肥降血脂作用。

[1] 于斌如, 湯銀紅. 枳椇子的研究進展[J]. 時珍國醫(yī)國藥, 2004, 15(9):600-610.

[2] 申向榮, 張德志. 枳椇屬植物的研究進展[J]. 時珍國醫(yī)國藥, 2007,18(6): 1351-1355.

[3] 江慶中, 符樹根. 枳椇綜合利用研究[J]. 江西林業(yè)科技, 2004(6): 3-6.

[4] 符樹根, 江慶中. 枳椇果特性與飲料開發(fā)研究[J]. 中國林副特產, 2007(6): 21-23.

[5] 謝立, 陳振德, 孫新華, 等. 枳椇子解酒活性提取部位的研究[J]. 中國藥房, 2007, 18(33): 2570-2572.

[6] 任發(fā)政, 羅云波, 蔣菁莉. 枳椇子影響乙醇代謝機理研究[J]. 食品科學, 2002, 23(12): 58-60.

[7] 嵇揚, 陸紅, 楊平. 枳椇酒與枳椇子水提取液解酒毒作用比較研究.時珍國醫(yī)國藥, 2001, 12(6): 19-20.

[8] 丁靜. 枳椇子預防大鼠酒精性脂肪肝的實驗研究[J]. 浙江中西醫(yī)結合雜志, 2007, 17(3): 156-158.

[9] HASE K, OHSUGI M, XIONG Q, et al . Hepatoprotective effect ofHovenia dulcisThunb. on experimental liver injuries induced by carbon tetrachloride orD-galactosamine/ lipopolysaccharide[J]. Biological &Pharmaceutical Bulletin, 1997, 20(4): 381-385.

[10] 嵇揚, 陳善, 張癸榮, 等. 枳椇水提取液對四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖和肝糖原含量的影響[J]. 中藥材, 2002, 25(3):190-191.

[11] 嵇揚, 姜春來, 張癸榮. 枳椇子對血壓影響的實驗研究[J]. 中醫(yī)藥學刊, 2003, 21(8): 1258-1259.

[12] SUTTISRI R, LEE I S, KINGHORN A D. Plant-derived triterpenoid sweetness inhibitors[J]. Journal of Ethnopharmacology, 1995, 47(4): 9-26.

[13] 嵇揚, 王文俊, 孫芳. 枳椇子水提液對小鼠綜合體能的影響[J]. 中醫(yī)藥學報, 2003, 31(3): 22-23.

[14] 王艷林, 韓玉, 錢金萍. 枳椇子抗脂質過氧化作用的實驗研究[J]. 中草藥, 1994, 25(6): 306-307.

[15] 趙曉野, 李志西, 李紅蕊, 等. 枳椇醋對小鼠急性酒精中毒預防作用的研究[J]. 中國釀造, 2009(1):74-76.

Hepatoprotective, Weight-Reducing and Hypolipidemic Effects ofHovenia dulcisThunb. Fruit Vinegar

DU Shuang-kui，ZHAO Xiao-ye，LI Zhi-xi*
(College of Food Science and Engineering, Northwest A & F University, Yangling 712100, China)

In order to explore the anti-alcoholic, hepatoprotective, weight-reducing and hypolipidemic effects ofHovenia dulcisThunb. fruit vinegar, 20 mice were divided randomly into 2 groups: model and treatment groups, which were given 0.15 mL of 52% aqueous alcohol solution 30 min after daily intragastric administration of normal saline and the fruit vinegar at the dose of 0.1 mL, respectively. After 30 days of administration, the mice were killed and their livers were collected and prepared into 10%homogenate for the determination of the contents of GSH and MDA and ADH activity and pathological observation. In addition,another 50 mice were divided randomly into 5 groups of 10 mice each: normal control group, obesity model control group,weight-reducing group treated withHovenia dulcisThunb. fruit vinegar, and hyperlipemia model control group and blood lipidreducing group treated withHovenia dulcisThunb. fruit vinegar. The body weight, fat coefficient and serum total cholesterol (TC),triglyceride (TG) and high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) of the mice were determined after 30 days of administration.Hovenia dulcisThunb. fruit vinegar could increase GSH content, improve ADH activity and decrease MDA content in the liver of mice. Meanwhile,Hovenia dulcisThunb. fruit vinegar could markedly reduce the denaturation of mouse blood lipid, and attenuate the hepatomegaly caused by chronic alcoholism. Moreover,Hovenia dulcisThunb. fruit vinegar could inhibit the increase of body weight and fat content to realize the weight-reducing function. Furthermore, the fruit vinegar could also prevent arteriosclerosis through reducing blood lipid.

Hovenia dulcisThunb. fruit vinegar；chronic alcoholism；hepatoprotective effect；weight-reducing effect；blood lipid-reducing effect

R151

A

1002-6630(2012)01-0235-04

2011-02-25

杜雙奎(1972—)，男，副教授，博士，研究方向為食品加工與發(fā)酵。E-mail：dushuangkui@126.com

*通信作者：李志西(1958—)，男，教授，博士，研究方向為谷物功能食品及發(fā)酵技術創(chuàng)新。E-mail：lzx580721@yahoo.com.cn