張榮武 （山東省陵縣畜牧局 253500）

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禽大腸桿菌和沙門氏菌混感的診斷與藥敏試驗(yàn)

張榮武 （山東省陵縣畜牧局 253500）

利用采自萊蕪市某發(fā)病雞場(chǎng)的病料，研究其致病原因并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。通過運(yùn)用細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定、生化試驗(yàn)來鑒別分離自發(fā)病雞群的致病菌。對(duì)采自發(fā)病雞群的細(xì)菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)。結(jié)果顯示，分離自發(fā)病雞群的細(xì)菌有2種，分別為大腸桿菌與沙門氏菌。大腸桿菌對(duì)頭孢曲松與頭孢噻肟中度敏感；沙門氏菌對(duì)頭孢曲松、丁胺卡那中度敏感；對(duì)頭孢噻肟、慶大霉素、安普霉素、強(qiáng)力霉素敏感。

大腸桿菌 沙門氏菌 藥敏試驗(yàn)

2011年11月，萊蕪某海藍(lán)褐雞場(chǎng)爆發(fā)疾病，患病雞多為15日齡，死亡率30%?；疾‰u精神沉郁，呆立，垂頭縮頸，兩翅下垂，羽毛松亂，食欲減少，飲欲增加。剖檢發(fā)現(xiàn)肝臟表面有纖維素滲出，肝臟上面有針尖大小壞死灶，氣囊渾濁，腎臟蒼白。經(jīng)藥物多次治療無效，為進(jìn)一步確定該疾病的病原菌筆者進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室分離診斷。通過對(duì)分離菌的鑒定確定了病原。

1 材料及方法

1.1 主要試劑 MH培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂、SS瓊脂、生化試劑管均購自杭州天和微生物試劑有限公司。藥敏紙片購于北京天壇藥業(yè)生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.2 分離及初步鑒定 用無菌接種環(huán)取病死雞的肝臟、心臟病料，劃線接種于麥康凱瓊脂平板，37℃培養(yǎng)18~ 24h，在麥康凱瓊脂平板上挑取紅色菌落接種于伊紅美藍(lán)平板，挑取無色透明菌落接種于SS平板進(jìn)行鑒別培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)18~24h。挑取伊紅美藍(lán)平板疑似大腸桿菌的菌落接種于營養(yǎng)瓊脂平板上面標(biāo)號(hào)SD-1，挑取SS平板上面疑似沙門氏菌的菌落接種于營養(yǎng)瓊脂平板上面標(biāo)號(hào)SD-2。分別挑取純培養(yǎng)，革蘭氏染色，觀察細(xì)菌形狀和染色特性。

1.3 生化反應(yīng)鑒定 將分離疑似沙門氏菌菌株接種于葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、衛(wèi)矛醇、尿素、硫化氫，并進(jìn)行枸櫞酸鹽利用、吲哚試驗(yàn)和V-P試驗(yàn)等生化試驗(yàn)，置于37℃溫箱培養(yǎng)，每日觀察。將符合大腸桿菌形態(tài)特征的細(xì)菌接種于蔗糖、水楊酸、D－木糖、硫化氫、衛(wèi)矛醇、乳糖、麥芽糖、L－阿拉伯糖、甘露醇、間－肌醇、尿素酶、七葉苷水解、葡萄糖、山梨醇、吲哚、M－R、V－P、枸櫞酸鹽利用、明膠液化等 19項(xiàng)生化實(shí)驗(yàn)。

1.4 分離菌藥物敏感性試驗(yàn) 用接種環(huán)于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上挑取分離純化的大腸桿菌菌落4~5個(gè)，接種于3~5mlLB液體培養(yǎng)基中。37℃培養(yǎng)12h，用生理鹽水稀釋至與0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管濁度相同的濃度。在15min內(nèi)，用貼無菌棉簽蘸取菌液，并在管壁上擠去多余的菌液后均勻涂布于M-H瓊脂平板上，待干。用鑷子蘸取95%乙醇并通過火焰，待燒干后再蘸取乙醇重復(fù)上述操作，共3次。待冷卻后，用此無菌鑷子夾取不同藥敏紙片，按一定間隔在平板的不同區(qū)域，即兩紙片間距不小于24mm，紙片距平板邊緣不小于15mm，37℃溫箱培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。沙門氏菌藥敏試驗(yàn)同大腸桿菌。用大腸桿菌ATCC25922作為質(zhì)控菌。試驗(yàn)選取藥敏片：阿莫西林、氨芐西林、頭孢曲松、頭孢噻肟、丁胺卡那、慶大霉素、安普霉素、強(qiáng)力霉素、環(huán)丙沙星、氟苯尼考、磷霉素、恩諾沙星、紅霉素。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 分離鑒定試驗(yàn)結(jié)果 分離菌在麥康凱培養(yǎng)基上存在2種菌落，一種菌落為鮮桃紅色，菌落中心呈深桃紅色，圓形，扁平，邊緣整齊，表面光滑濕潤。另一種菌落為圓形、微凸、光滑濕潤、無色半透明中間呈黑色、邊緣整齊、中等大小的菌落。標(biāo)號(hào)為的菌落在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)為紫黑色，圓形，稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤，常有金屬光澤。標(biāo)號(hào)為SD-2的菌落在SS培養(yǎng)基上形成無色透明，圓形、微凸、光滑濕潤、邊緣整齊菌落。SD-1革蘭氏染色鏡檢發(fā)現(xiàn)細(xì)菌呈陰性桿菌，SD-2革蘭氏染色陰性短小桿菌。初步判定SD-1為大腸桿菌，SD-2為沙門氏菌。

2.2 分離菌SD-1菌鑒定結(jié)果 如表1所示根據(jù)《伯杰氏手冊(cè)》上面關(guān)于大腸桿菌鑒定，可以確定SD-1該株細(xì)菌為大腸桿菌。

表1 SD-1生化特性

2.3 分離菌SD-2菌鑒定結(jié)果 如表2所示根據(jù)《伯杰氏手冊(cè)》上面關(guān)于沙門氏菌鑒定，可以確定SD-2該株細(xì)菌為沙門氏菌。

表2 SD-2生化特性

2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 由表3可知該次試驗(yàn)分離的大腸桿菌對(duì)于阿莫西林、氨芐西林、慶大霉素、安普霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、磷霉素、氟苯尼考高度耐藥，對(duì)于強(qiáng)力霉素、紅霉素、丁胺卡那耐藥，對(duì)于頭孢曲松、頭孢噻肟中度敏感。沙門氏菌高度耐受的藥物有阿莫西林、環(huán)丙沙星、氟苯尼考、磷霉素、恩諾沙星、紅霉素。沙門氏菌對(duì)于氨芐西林耐藥，對(duì)于頭孢曲松、丁胺卡那中度敏感，對(duì)于頭孢噻肟、慶大霉素、安普霉素、強(qiáng)力霉素敏感。

表3 藥敏試驗(yàn)抑菌圈直徑 (mm)

注：“R”代表耐藥，“I”代表中介，“S”代表敏感

3 結(jié)論

通過實(shí)驗(yàn)室診斷可以確診該雞場(chǎng)是由于大腸桿菌與沙門氏菌混合感染所導(dǎo)致的疾病。藥敏試驗(yàn)顯示大腸桿菌與沙門氏菌均對(duì)于頭孢噻肟、頭孢曲松敏感，所以臨床治療可選用頭孢曲松或頭孢噻肟用于該病的治療。

近幾年通過藥物預(yù)防和治療沙門氏菌所引起的雞白痢、雞傷寒、雞副傷寒等疾病已經(jīng)得到了有效的控制，但是2011年下半年以來沙門氏菌致病現(xiàn)象有增加的趨勢(shì)。通過藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)沙門氏菌耐藥性有強(qiáng)的趨勢(shì)，這種現(xiàn)象的發(fā)生與臨床上抗生素濫用有一定的關(guān)系。

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（2012–04–19）

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