鄧 真，顧 鋼，張紹升

(1.福建農(nóng)林大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，福建 福州 350002;2.福建省煙草科學(xué)研究所，福建 福州 350001)

我國有關(guān)煙草灰霉病的報道較少，過去僅在湖南、河南、云南等地的煙草上偶發(fā)[1，2]，福建省未發(fā)現(xiàn)此病[3]。近年來國內(nèi)報道在煙草漂浮育苗時發(fā)現(xiàn)灰葡萄孢侵染煙苗，引起葉腐和莖腐[4，5]。2009－2011年對福建省的主要煙區(qū)進(jìn)行煙草病害調(diào)查，發(fā)現(xiàn)煙草灰霉病在各煙區(qū)普遍發(fā)生，個別地區(qū)發(fā)病嚴(yán)重，對煙草產(chǎn)量及品質(zhì)造成一定影響。為此，本試驗對煙草灰霉病的發(fā)生特點、病害癥狀和病原菌鑒定進(jìn)行了研究，明確福建灰霉病害的發(fā)生規(guī)律，以期為灰霉病害的防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病害調(diào)查

2009－2011年對福建省的煙草種植區(qū)進(jìn)行了煙草灰霉病發(fā)生情況調(diào)查和標(biāo)本采集。

1.2 癥狀觀察

通過肉眼觀察病害田間癥狀和不同階段的癥狀特點，對病害癥狀和鑒別特征進(jìn)行系統(tǒng)描述。挑取病組織上的病原物和病組織切片制成臨時玻片，在顯微鏡下進(jìn)行病原觀察鑒定，對病害進(jìn)行確診。

1.3 病原菌分離和種類鑒定

采用組織分離法于馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(potato sucrose agar，PSA)平板上進(jìn)行病原菌分離培養(yǎng)，于PSA斜面純化保存。

病原鑒定主要依據(jù)病原菌的培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征。觀察培養(yǎng)性狀時，將純化的菌株接種到PSA平板上連續(xù)培養(yǎng)15 d，定期觀察病原菌的菌落特點、產(chǎn)孢時期及菌核的產(chǎn)生情況。病原菌形態(tài)特征利用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察鑒定。

1.4 病原菌致病性測定

以5－6片真葉的煙草為材料，利用孢子懸浮液傷口接種和菌餅貼葉接種。孢子懸浮液傷口接種:供試菌株在PSA上培養(yǎng)10 d后，用無菌水沖洗培養(yǎng)基表面的孢子，稀釋成孢子懸浮液(1×106個·mL－1)，用涂布法將孢子懸浮液均勻涂抹在不同葉位的葉片及煙莖表面，以涂抹滅菌水為對照，每個處理3個重復(fù)，定期噴水保濕，置于(25±1)℃的恒溫箱中培養(yǎng)，觀察;菌餅貼葉接種:將在PSA上培養(yǎng)4 d的菌落，用打孔器制成直徑為5 mm的菌餅，貼于葉片上，每個葉片4個點，以只接PSA培養(yǎng)基為對照，每個處理3個重復(fù)，定期噴水保濕，置于(25±1)℃的恒溫箱中培養(yǎng)，觀察。

接種發(fā)病后，重新分離病原物進(jìn)行鑒定，通過柯赫氏法則確定病原菌的致病性。

2 結(jié)果與分析

2.1 病害發(fā)生特點

每年4－6月是煙草團(tuán)棵期至現(xiàn)蕾期，也是灰霉病的發(fā)生期。降雨和高濕環(huán)境是煙草灰霉病發(fā)生的重要條件。受日灼、凍害或機(jī)械傷和蟲傷的葉片組織，能誘導(dǎo)并加速病害的發(fā)生。煙草灰霉病的發(fā)生特點有:(1)成株期的葉片發(fā)病率極高，尤其是代謝較弱的老葉，植株下部葉，特別是靠近地面的葉片易發(fā)病，而莖部發(fā)病少;(2)病斑主要集中在葉片的中前部，葉緣或靠近葉緣的部分。

2.2 病害癥狀

煙草灰霉病主要發(fā)生在葉片，也可發(fā)生在莖或葉柄。病害多數(shù)從植株基部葉片發(fā)生(圖1A－1C)，病原菌從葉片上部組織、葉緣或葉尖侵染(圖1D－1F)。葉片內(nèi)侵染時病斑呈圓形或近圓形，初期病斑呈灰褐色或淡褐色，潮濕條件下病斑迅速擴(kuò)大，形成輪紋，表面產(chǎn)生灰色霉層(圖1G、1H)。后期病斑破裂或形成穿孔，穿孔為圓形或不規(guī)則形(圖1I、1J)。干燥條件下病斑擴(kuò)展受抑制，褐色，表面霉層少或無霉層(圖1K)。病菌在葉尖侵染時，病斑向內(nèi)擴(kuò)展形成V形病斑。從葉緣發(fā)病時病斑向內(nèi)擴(kuò)展形成半圓形。

2.3 病原鑒定

(1)培養(yǎng)性狀。在PSA上菌落呈放射狀，中等氣生菌絲(圖2A)，4－5 d后菌落四周產(chǎn)生大量分生孢子梗，呈深灰褐色。后期置于室內(nèi)，7－10 d后產(chǎn)生少量大型菌核，菌核表生，15－27?！っ螅?，黑色，平凸，內(nèi)卷，表面光滑(圖2B、2C)。聚生菌核表面具疣狀凸起，覆蓋一層白色的菌絲層，3.5－6.5×2.0－5.0 mm;單生菌核呈圓形、橢圓形或不規(guī)則形，1.0 －4.0 ×1.0 －2.3 mm。

(2)形態(tài)特征。分生孢子梗單生或叢生，直立，1－2次分枝(圖2D)，分枝處有縊縮，長1020－2200 μm、直徑11.32 －16.45 μm，有分隔，基部分隔較短，略膨大(圖2E、2F)。產(chǎn)孢細(xì)胞膨大，圓形，可以生成新的產(chǎn)孢細(xì)胞繼續(xù)產(chǎn)孢(圖2G)。分生孢子呈橢圓形或卵圓形(圖2H)，11.49 －17.57 ×6.37 －8.91 μm，L/B值為 1.60 －2.06。

根據(jù)培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征，參考文獻(xiàn)[6]、[7]，將病原菌鑒定為灰葡萄孢(Botrytis cinerea)。

2.4 致病性測定

將菌餅和孢子懸浮液接種到煙苗上，由病組織上分離獲得相同的病原菌。發(fā)病初期，葉部產(chǎn)生水浸狀病斑，保濕培養(yǎng)后，病斑擴(kuò)展快速，變成不規(guī)則形(圖3A－3C)。隨著葉片病斑的擴(kuò)大，病原菌沿著葉脈侵染莖部，導(dǎo)致整株煙苗枯萎(圖3D)，被侵染的莖部縱切，髓部已完全干枯變黃，甚至中空。條件適宜時，病斑會產(chǎn)生灰色或灰白色的霉層。

圖1 煙草灰霉病的田間癥狀Fig.1 The symptoms of tabacoo gray mold in the field

圖2 灰葡萄孢的形態(tài)特征和培養(yǎng)性狀Fig.2 Mophological and cultivation characters of B.cinerea

圖3 灰葡萄孢的致病性Fig.3 The pathogenicity of B.cinerea

3 小結(jié)

本研究對福建省煙草灰霉病的病害發(fā)生特點和病害癥狀進(jìn)行觀察描述。通過病原培養(yǎng)性狀及形態(tài)學(xué)鑒定和致病性測定，將煙草灰霉病的病原鑒定為灰葡萄孢。本課題組從2009－2011年在福建煙草種植區(qū)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，煙草灰霉病普遍發(fā)生，侵染煙葉葉片造成煙葉組織壞死、腐爛，對煙葉產(chǎn)量和品質(zhì)構(gòu)成一定影響。在福建省煙草灰霉病是一種常發(fā)性病害，局部地區(qū)和特定氣候條件下危害嚴(yán)重，應(yīng)當(dāng)引起足夠的重視。

[1]陳瑞泰，朱賢朝，王智發(fā)，等.全國16個主產(chǎn)煙省(區(qū))煙草侵染性病害調(diào)研報告[J].中國煙草科學(xué)，1997，1(4):1－7.

[2]張世光，陳興全.云南省煙草真菌、細(xì)菌、線蟲病害調(diào)查研究[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，1999，14(4):354－356.

[3]林滋鑾，盧洪興，陳炳全，等.福建省煙草侵染性病害種類分布與為害[J].福建農(nóng)業(yè)科技，1995(5):14－15.

[4]宮飛燕，楊程，蔣自立，等.煙草灰霉病在煙草漂浮育苗中的表現(xiàn)及8種殺菌劑對病菌的室內(nèi)毒力測定[J].中國煙草學(xué)報，2008，14(3):32 －35.

[5]陳志敏，過賦文，張曉陽，等.煙草莖腐病的病原鑒定及生物學(xué)特性[J].煙草科技，2011(4):78－84.

[6]張中義.中國真菌志(第26卷)葡萄孢屬柱隔孢屬[M].北京:科學(xué)出版社，2006.

[7]朱賢朝，王彥亭，王智發(fā).中國煙草病害[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2001.