張現(xiàn)玲 梁陳沖 于會(huì)民 陳寶江 李軍國(guó) 李學(xué)軍 楊祿良 湯海鷗，

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，北京100081；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，河北保定071000;3.北京挑戰(zhàn)生物技術(shù)有限公司，北京100081）

植酸酶是一種新型綠色環(huán)保飼料添加劑，隨著發(fā)酵工程技術(shù)的發(fā)展以及人們環(huán)保意識(shí)的提高，植酸酶在生產(chǎn)中的應(yīng)用也越來(lái)越廣泛。研究表明，在低磷日糧中添加植酸酶能提高植酸及鹽的水解率，改善日糧中植物性磷的利用率，并減少糞氮、磷的排泄[1-2]，而且植酸酶還能提高鈣、蛋白質(zhì)、氨基酸以及微量元素的消化率[3-4]。植酸酶作為一種酶制劑，對(duì)溫度非常敏感，酶通常在干燥的狀態(tài)下較穩(wěn)定，能保留較高的酶活，但在飼料加工的制粒工藝中有一個(gè)短暫的高溫過(guò)程，在此過(guò)程中植酸酶活性損失在所難免，因而限制了植酸酶在顆粒料中的應(yīng)用。耐高溫植酸酶通過(guò)特殊表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)，使酶蛋白分子得到高度的糖基化修飾，耐熱性提高的同時(shí)在儲(chǔ)存、使用過(guò)程中具有良好的穩(wěn)定性。

本研究在低磷日糧中添加耐熱植酸酶及普通植酸酶，探討其對(duì)肉仔雞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率及脛骨灰分含量的影響，對(duì)耐熱植酸酶產(chǎn)品的實(shí)際應(yīng)用效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

普通植酸酶產(chǎn)品，活性含量為5 000 U/g，從市場(chǎng)上購(gòu)買；耐熱植酸酶產(chǎn)品，活性含量為3 000 U/g，由北京挑戰(zhàn)生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

選用4 800只1日齡AA肉仔雞隨機(jī)分為6個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)160只肉仔雞，性別比例一致，各處理組之間起始體重差異均不顯著（P＞0.05），1日齡平均體重39.71 g。試驗(yàn)分兩期進(jìn)行，1～3周和4～6周。

1.3 試驗(yàn)日糧和處理設(shè)計(jì)

參照NRC（1994）肉仔雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)和AA肉仔雞的推薦標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)管理手冊(cè)配制基礎(chǔ)日糧，由北京華都肉雞公司飼料廠加工制粒，其原料組成和營(yíng)養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)共包括6種日糧，分別飼喂6個(gè)處理，見表2。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)由專人負(fù)責(zé)指導(dǎo)和飼養(yǎng)管理，按照試驗(yàn)要求嚴(yán)格進(jìn)行；其飼養(yǎng)管理參照AA肉仔雞的飼養(yǎng)管理手冊(cè)進(jìn)行，按照常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫接種；自由采食和飲水。

1.5 樣品采集與測(cè)定方法

分別在21日齡和42日齡時(shí)，每處理挑取12只雞進(jìn)行屠宰，分離左側(cè)脛骨，冷凍保存以備測(cè)定其脛骨灰分、鈣和磷含量。

采用內(nèi)源指示劑法測(cè)定各養(yǎng)分的消化率。分別在19～21日齡和40～42日齡連續(xù)3 d，均勻采糞樣各約200 g混合，以重復(fù)為單位充分混勻，樣品置于-20℃冰箱冷凍保存。試驗(yàn)結(jié)束后，糞樣全部解凍，65℃烘干，空氣中回潮24 h，最后同日糧樣品一樣粉碎至40目。按四分法取樣，分別測(cè)定糞樣和日糧樣品中的養(yǎng)分和鹽酸不溶灰分(AIA)的含量。粗蛋白、粗灰分、鈣和磷的測(cè)定方法均參照《飼料分析及飼料檢測(cè)技術(shù)》[5]。

粗蛋白含量采用凱氏定氮法測(cè)定；粗脂肪含量采用索氏抽提法測(cè)定；鈣含量采用高錳酸鉀滴定法測(cè)定；總磷含量采用釩鉬黃比色法測(cè)定；酸不溶解灰分含量的測(cè)定采用4N鹽酸消煮法。

某養(yǎng)分消化率（%）=[1-（b×c）/（a×d）]×100。

式中：a——飼料中某養(yǎng)分含量；

b——糞樣中某養(yǎng)分含量；

c——飼料中酸不溶灰分含量；

d——糞樣中酸不溶灰分含量。

表2 各處理組日糧設(shè)計(jì)

1.6 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件ANOVA模塊進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同植酸酶處理對(duì)肉仔雞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響（見表3）

從表3中可以看出，在19～21日齡階段，粗蛋白表觀消化率，處理組1和處理組2較對(duì)照組有降低趨勢(shì)（P＞0.05），處理組2高于處理組1，差異不顯著（P＞0.05）；處理組3、4和5與對(duì)照組相比基本沒(méi)有變化，與處理組1相比有提高趨勢(shì)（P＞0.05）。4個(gè)植酸酶添加組中以處理組2的粗蛋白表觀消化率最低。在40～42日齡階段，表現(xiàn)出相似變化規(guī)律。

整個(gè)試驗(yàn)周期，鈣的表觀消化率，與處理組1相比較，處理組2、3、4和5表現(xiàn)出提高趨勢(shì)，各處理組之間均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

磷的表觀消化率，在19～21日齡階段，處理組1較對(duì)照組下降，差異不顯著（P＞0.05）；處理組2、3、4和5均顯著高于處理組1和對(duì)照組（P＜0.05）；其中處理組3、4和5較處理組2均有提高趨勢(shì)，以處理組5最高，均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。在40～42日糧階段，變化規(guī)律基本相似。

表3 不同植酸酶處理對(duì)肉仔雞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響（%）

2.2 不同植酸酶處理對(duì)肉仔雞脛骨灰分、鈣和磷含量的影響（見表4）

由表4可知，在21日齡，脛骨灰分含量，處理組1顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），4個(gè)植酸酶添加組與對(duì)照組相比均無(wú)顯著性差異（P＞0.05），但顯著高于處理組1（P＜0.05），4個(gè)植酸酶添加組之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表4 不同植酸酶對(duì)肉仔雞脛骨灰分、鈣和磷含量的影響（%）

脛骨磷含量，處理組1顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），處理組2與對(duì)照組相比基本沒(méi)有差異；處理組2、3、4和5均顯著高于處理組1（P＜0.05），處理組3、4、5顯著高于處理組2與對(duì)照組（P＜0.05）。

在42日齡，脛骨灰分含量，與對(duì)照組相比較，處理組1顯著降低（P＜0.05），處理組2呈降低趨勢(shì)（P＞0.05），處理組3、4和5呈提高趨勢(shì)（P＞0.05）；與處理組1相比較，處理組2呈提高趨勢(shì)（P＞0.05），處理組3、4和5顯著提高（P＜0.05），4個(gè)植酸酶添加組之間均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

脛骨磷含量，與對(duì)照組相比較，處理組1顯著降低（P＜0.05），處理組2基本沒(méi)有差異，處理組3、4、5得到提高，其中處理組5顯著提高（P＜0.05），且顯著高于處理組2（P＜0.05）；4個(gè)植酸酶添加組均顯著高于處理組1（P＜0.05）。

在21日齡和42日齡，脛骨鈣含量，與對(duì)照組相比較，處理組1呈降低趨勢(shì)（P＞0.05），4個(gè)植酸酶添加組與其相比均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

3 討論

3.1 耐熱植酸酶處理對(duì)肉仔雞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

植酸酶能使日糧中的養(yǎng)分從與植酸的結(jié)合狀態(tài)中釋放出來(lái)，添加植酸酶可明顯提高蛋白質(zhì)和氨基酸在小腸中的消化率(張克英等，2001)[6]。陳文等(2006)報(bào)道，日糧中添加植酸酶可以改善蛋白質(zhì)的生物學(xué)利用率[7]。徐奇友等(2000)試驗(yàn)表明，植酸酶水解植酸磷提高了磷的利用率，滿足了肉仔雞對(duì)磷的營(yíng)養(yǎng)需要[8]。謝新東等(2002)研究報(bào)道，添加植酸酶能顯著提高飼料中P的表觀利用率，并隨植酸酶添加量增加而提高，當(dāng)添加量為500 U/kg時(shí)，飼料中P的表觀利用率達(dá)59.3%，比低磷組提高36.95%，比無(wú)機(jī)磷組提高19.32%[9]。Johnston等(2004)的研究結(jié)果表明，用植酸酶替代部分無(wú)機(jī)磷后，鈣、磷、粗蛋白質(zhì)、氨基酸及淀粉的回腸表觀消化率提高[10]。王麗娟等（2002）研究了玉米-豆粕型日糧中添加植酸酶對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用的影響，結(jié)果表明，植酸酶可顯著提高日糧粗灰分、粗蛋白、鈣、總磷和銅的表觀利用率[11]。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)降低基礎(chǔ)日糧中磷添加水平時(shí)，降低了磷的表觀消化率；在此基礎(chǔ)上添加500～2 000 U/kg普通植酸酶或250～500 U/kg耐熱植酸酶，顯著提高了磷的表觀消化率（P＜0.05），其中以250～500 U/kg耐熱植酸酶與處理組3效果理想，說(shuō)明同等制粒溫度下，耐熱植酸酶的應(yīng)用效果優(yōu)于普通植酸酶。

3.2 耐熱植酸酶處理對(duì)肉仔雞脛骨灰分、鈣和磷含量的影響

鈣、磷是家禽體內(nèi)重要的礦物元素，鈣在參與骨骼形成、維持體內(nèi)酸堿平衡和正常心率等方面具有重要的作用，磷也能參與骨骼的形成，此外對(duì)維持體內(nèi)酸堿平衡、碳水化合物和脂肪代謝方面也有一定的影響。研究表明，骨骼中的灰分與鈣、磷之間存在著一定的相關(guān)性。骨灰分含量被廣泛用來(lái)作為評(píng)估磷需要量的標(biāo)準(zhǔn)，因?yàn)閷?duì)于磷缺乏日糧，該指標(biāo)比生長(zhǎng)率更為敏感[12]。咼于明等(1995)對(duì)5周齡艾維茵肉仔雞的研究發(fā)現(xiàn)，隨日糧鈣、磷營(yíng)養(yǎng)水平的降低，肉仔雞脛骨灰分及鈣、磷含量極顯著下降[13]。李文立等(2004)報(bào)道，脛骨灰分與脛骨鈣、磷之間呈強(qiáng)直線正相關(guān)，脛骨鈣、磷之間呈強(qiáng)直線相關(guān)[14]。王慶云等(2008)研究不同無(wú)機(jī)磷水平日糧中添加植酸酶對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能及骨骼的影響，12.3 g/kg和8.2 g/kg磷酸氫鈣組肉雞脛骨灰分及脛骨中鈣、磷含量均高于對(duì)照組[15]。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)降低基礎(chǔ)日糧中磷添加水平時(shí)，顯著降低了脛骨灰分和磷的含量（P＜0.05），同時(shí)鈣含量呈降低趨勢(shì)（P＞0.05）；在此基礎(chǔ)上添加500～2 000 U/kg普通植酸酶或250～500 U/kg耐熱植酸酶，脛骨灰分和鈣磷的含量恢復(fù)或超出對(duì)照組水平，與前人報(bào)道結(jié)果一致，說(shuō)明日糧中添加植酸酶提高了脛骨中灰分及鈣、磷含量。

4 結(jié)論

當(dāng)降低基礎(chǔ)日糧中磷添加水平時(shí)，降低了磷的表觀消化率與脛骨灰分和磷的含量；在此基礎(chǔ)上添加植酸酶，可以提高磷的表觀消化率，脛骨灰分和鈣磷的含量恢復(fù)或超出對(duì)照組水平，其中以250～500 U/kg耐熱植酸酶與2 000 U/kg普通植酸酶效果理想，降低磷添加水平或添加不同來(lái)源植酸酶對(duì)粗蛋白質(zhì)和鈣的表觀消化率基本沒(méi)有影響，充分表明耐熱植酸酶不僅沒(méi)有影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率，而且較普通植酸酶有更好的應(yīng)用效果。

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