王 剛，宿貴鵬

(遵義醫(yī)學(xué)院藥物化學(xué)教研室，貴州 遵義 563099)

秦皮乙素是中藥秦皮的主要有效成分，化學(xué)名稱(chēng):6，7一二羥基香豆素，俗稱(chēng)七葉亭或七葉內(nèi)酯。為白色或淡黃色針狀結(jié)晶［1］。據(jù)研究證明，秦皮乙素具有多種藥理活性:①治療腸道疾病，如潰瘍性結(jié)腸炎、放射性直腸炎、小腸性腹瀉、大腸性腹瀉、腹痛等;②治療結(jié)膜炎［2，3］;③治療骨關(guān)節(jié)炎;④抗菌作用［4，5］;⑤抗氧化作用。因此，秦皮乙素具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景，目前關(guān)于秦皮乙素的研究，原料來(lái)源于天然植物，但含量低，僅為1.03%［6］。為進(jìn)一步研究它的生物活性，我們?cè)O(shè)計(jì)了秦皮乙素的合成方法，并成功合成得到該化合物。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑、原料 VARIAN 1000紅外分光光度計(jì)(KBr壓片);CL－2Z型恒溫加熱磁力攪拌器(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);HZT－B100電子天平(福州化學(xué)儀器有限公司);RE－522旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);KEL－X－4顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(上海微圖儀器科技發(fā)展有限公司);Agilent6890－5973N氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)安捷倫公司)。

対苯醌，蘋(píng)果酸，乙酸酐，濃硫酸，乙酰乙酸乙酯，高氯酸，丙二酸二乙酯，無(wú)水乙醇，甲醇，氯仿，乙酸乙酯，甲酸，氫氧化鈉均為分析純;薄層硅膠(青島海洋化工集團(tuán));蒸餾水，氮?dú)?，活性炭為市?chǎng)購(gòu)置的工業(yè)產(chǎn)品。

1.2 合成方法

1.2.1 合成路線 以對(duì)苯醌、乙酸酐、濃硫酸為原料，合成中間體1，2，4－苯三酚三乙酸酯，然后1，2，4－苯三酚三乙酸酯與蘋(píng)果酸、濃硫酸縮合和環(huán)合，合成得到秦皮乙素。其反應(yīng)式(見(jiàn)圖1)。

圖1 合成秦皮乙素的反應(yīng)式

1.2.2 中間體1，2，4－ 苯三酚三乙酸酯的合成將乙酸酐(65 mL，0.68 mol)和濃硫酸(1.5 mL)加入到250 mL三口瓶中，30 min內(nèi)邊攪拌邊分批少量加入對(duì)苯醌(25.0g，0.23 mol)，控制加入速度，并使反應(yīng)溫度保持在45℃，加畢在同一溫度下反應(yīng)約3 h，待反應(yīng)完成后，再將溶液靜置冷卻一會(huì)兒，析出大量無(wú)色沉淀。然后加入冰水，攪拌，抽濾，洗滌得到沉淀，即1，2，4－苯三酚三乙酸酯粗品，粗品用甲醇重結(jié)晶，經(jīng)真空干燥2 h，得1，2，4一苯三酚三乙酸酯81.83g，收率87%，熔點(diǎn)測(cè)定為:95～96℃。

1.2.3 秦皮乙素的合成 向50 mL三口燒瓶中依次加入 1，2，4—苯三酚三乙酸酯 7.3g，蘋(píng)果酸4.8g，濃硫酸 11.5 mL，混合后升溫到 110℃時(shí)，反應(yīng)2.5 h，自然冷卻，倒入底部鋪有碎冰的冰水中，析出固體，抽濾，用乙酸乙酯以1∶1的比例萃取2次，揮干溶劑，反復(fù)重結(jié)晶多次，得到淡黃色晶體，經(jīng)真空干燥2 h，得秦皮乙素1.33g，收率26%，測(cè)定熔點(diǎn)為:26～267℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 中間體1，2，4－苯三酚三乙酸酯產(chǎn)物結(jié)構(gòu)與圖譜分析(見(jiàn)圖2)

2.1.1 IR(KBr)/cm－1分析:環(huán)上 C=C 面外彎曲振動(dòng) 572，628;芳環(huán)的 C一 H面外彎曲振動(dòng)837，918;C一O伸縮振動(dòng)1167，1210;芳環(huán)C=C伸縮振動(dòng)1499;C=O伸縮振動(dòng)1760;C一H伸縮譜帶2949。

圖2 中間產(chǎn)物1，2，4，—苯三酚三乙酸酯紅外光譜圖

2.1.2 GC－MS分析 氣相條件:DB－5色譜柱，柱前壓 50 kPa，分流比 10∶1，進(jìn)樣量 1 μl，柱初始溫度50℃，保留5 min，然后以10℃·min－1的升溫速度升溫到 200℃，保留15 min，最后以10℃·min－1的升溫速度升溫到260℃，保留15 min。

質(zhì)譜條件:EI離子源，電子能量70 ev，離子源溫度200℃界面溫度250℃，倍增電壓1 700 V，氦氣流速:2mL·min－1。

分析結(jié)果:通過(guò) HPMSD化學(xué)工作站檢索Nist05標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)和WileyNist05質(zhì)譜圖庫(kù)，并結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)譜圖解析，鑒定出該化合物結(jié)構(gòu)為1，2，4—苯三酚三乙酸酯，MS(m/z):252(M － H，100%)，相似度為95%。

2.2 秦皮乙素產(chǎn)物結(jié)構(gòu)與圖譜分析

2.2.1 TCL鑒別 取本品0.01 g，精密稱(chēng)定，置10 mL量瓶中，用甲醇5 mL超聲溶解，搖勻，定容，作為供試品溶液。另取秦皮乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各8 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿一甲醇一水(30∶10∶3)振搖分層后，取下層液加入0.5 mL甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)(見(jiàn)圖3～6)。

2.2.2 IR(KBr)/cm－1分析:分子間氫鍵 O 一 H伸縮譜帶3 331，3 202;芳基 C一 H伸縮振動(dòng) 3 062;內(nèi)酯Vc=o 1 668;倍頻或復(fù)合頻譜帶 1 620;環(huán)上C=C面內(nèi)伸縮振動(dòng)1 566;O一H面外彎曲振動(dòng)140 1;C一O伸縮振動(dòng)1 284;苯環(huán)上C一H面外彎曲振動(dòng)818～878。與秦皮乙素標(biāo)準(zhǔn)品紅外光譜圖相比較，數(shù)據(jù)一致。

3 討論

3.1 制備中間體1，2，4一苯三酚三乙酸酯時(shí)，加入對(duì)苯醌，反應(yīng)溫度不宜超過(guò)50℃，否則溫度升高反應(yīng)液易氧化變黑，影響產(chǎn)物純度，采用油浴控溫較好。

3.2 由于1，2，4一苯三酚三乙酸酯水解后極易被氧化影響目標(biāo)產(chǎn)物的合成，秦皮乙素合成的反應(yīng)過(guò)程中需先將空氣排除再通入氮?dú)猓?/p>

3.3 通過(guò)TLC、IR、GC－MS等分析手段鑒定所得的產(chǎn)物符合目標(biāo)產(chǎn)物秦皮乙素。

［1］楊曉軍.微波輻射合成秦皮乙素的研究［J］.應(yīng)用化工，2011，10(4):35 －38.

［2］周聽(tīng)，顧希鈞.秦皮滴眼液的穩(wěn)定性考察［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2004，38(10):58 －59.

［3］陸萍，李明飛.秦皮滴眼液治療慢性結(jié)膜炎的臨床觀察［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2002，9:29 －31.

［4］劉世清，賀翎，彭昊，等.秦皮對(duì)兔實(shí)驗(yàn)性骨關(guān)節(jié)炎的基質(zhì)金屬蛋白酶－1和一氧化氮及前列腺素的作用［J］.中國(guó)臨床康復(fù)，2005，9(6):50 －54.

［5］楊天鳴，葛欣，王曉妮.秦皮抗菌作用研究［J］.西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志，2003，24(5):387-388.

［6］陳胡蘭，湯沛然，張梅，等.不同產(chǎn)地紫花地丁中秦皮乙素的含量比較［J］.成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，1(33):72－73.