郭建麗，馮瑪莉

（山西省中醫(yī)藥研究院，山西太原030012）

利血平是中樞神經(jīng)鎮(zhèn)靜劑之一，它主要影響節(jié)后交感神經(jīng)末梢遞質(zhì)去甲腎上腺素的貯存和釋放，并能降低腦內(nèi)和外周神經(jīng)遞質(zhì)中單胺類遞質(zhì)的含量，從而降低交感腎上腺神經(jīng)的功能，使副交感神經(jīng)功能相對或絕對亢進(jìn)。利血平所致肝郁脾虛證模型是較經(jīng)典的方法之一［1］，體重、攝食、蔗糖偏愛度、自主活動、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、免疫器官變化都是經(jīng)典的檢測方法。為此，本研究通過經(jīng)典復(fù)制方法對大、小鼠注射利血平，利用經(jīng)典的檢測方法，觀察肝郁脾虛模型的行為學(xué)表現(xiàn)和利血平致肝郁脾虛模型較為合適的鼠種。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 昆明種小鼠，體重（20±2）g，清潔級，SD 種大鼠，體重（200±20）g，清潔級，山西省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動物室提供，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證編號為SCXK（晉）2010-002，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證編號為SYXK（晉）2010-002。實(shí)驗(yàn)前在山西省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)中心喂養(yǎng)1 w，自由進(jìn)食和飲水，排除環(huán)境因素對行為的影響。

1.1.2 試劑與儀器 利血平注射液：天津金耀氨基酸有限公司，批號：國藥準(zhǔn)字H12020905。交直流電子秤：ACS-A-JJ，中航第一集團(tuán)太原航空儀表有限公司；大鼠行為觀察敞箱（自制）：為正方形敞箱，邊長100 cm，高40 cm，底部劃有25個20 cm ×20 cm的正方形小格；大鼠游泳桶、止血鉗、紗布等由山西省中醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組與造模 實(shí)驗(yàn)鼠雌雄各半，將其隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組各10只，實(shí)驗(yàn)組小鼠用利血平 0.1 mg/kg 皮下注射，連續(xù) 14 d［1］，實(shí)驗(yàn)組大鼠用利血平 4 mg/kg腹腔注射，連續(xù) 2 d［1］，對照組注射同量注射用水。

1.2.2 觀測指標(biāo) ①一般情況觀察：包括眼睛狀態(tài)、日常理毛、皮毛變化、對外界刺激的反應(yīng)、大便性狀、掙扎時(shí)的表現(xiàn)、精神狀態(tài)。②精神行為學(xué)指標(biāo)測試：體重、攝食，參照文獻(xiàn)［2］來計(jì)算實(shí)驗(yàn)鼠的糖水偏愛率。參照文獻(xiàn)［3］曠場實(shí)驗(yàn)（Open-field teat）測試實(shí)驗(yàn)鼠的水平運(yùn)動和垂直運(yùn)動。參照文獻(xiàn)［4］在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中記錄動物的不動時(shí)間。③免疫器官指數(shù)：剖取脾臟、胸腺，稱重，計(jì)算脾臟、胸腺指數(shù)（mg/g）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0軟件處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）來表示，多組間數(shù)據(jù)采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)組與對照組大鼠、小鼠外觀行為比較

大鼠實(shí)驗(yàn)組與對照組相比出現(xiàn)明顯的倦怠、瞇眼、倦臥，長時(shí)間不進(jìn)行日常理毛，對外界的聲音刺激反應(yīng)遲鈍，眼角有輕微的破損，個別鼻腔有出血現(xiàn)象，皮毛不澤甚者稀疏。小鼠同對照組相比有瞇眼現(xiàn)象，其他反應(yīng)不明顯。具體觀測指標(biāo)見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)組與對照組大、小鼠外觀行為表現(xiàn)

2.2 實(shí)驗(yàn)組與對照組大小鼠攝食、體重、1%蔗糖偏愛度比較

結(jié)果見表2。

表2 實(shí)驗(yàn)組與對照組大小鼠攝食、體重、1%蔗糖偏愛度比較 （±s）

表2 實(shí)驗(yàn)組與對照組大小鼠攝食、體重、1%蔗糖偏愛度比較 （±s）

注：與對照組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

組別 攝食（g）體重（g）1%蔗糖偏愛度大鼠 小鼠 大鼠 小鼠 大鼠 小鼠對照組 34.70±6.80 5.20±1.03 392.2±70.2 34.80±4.78 0.491 9±0.066 0.707 0±0.08實(shí)驗(yàn)組 10.00±4.442）3.10±1.851） 277.5±69.82） 27.50±7.461） 0.591 6±0.126 22） 0.859 0±0.117 31）

由表2可以看出，與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組大小鼠體重、攝食降低，蔗糖偏愛度上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。

2.3 實(shí)驗(yàn)組與對照組大、小鼠自主活動比較

結(jié)果見表3。

表3 實(shí)驗(yàn)組與對照組大鼠、小鼠自主活動比較 （±s）

表3 實(shí)驗(yàn)組與對照組大鼠、小鼠自主活動比較 （±s）

注：與對照組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

組別 水平運(yùn)動 垂直運(yùn)動大鼠 小鼠 大鼠 小鼠對照組 41.00±7.67 6.70±5.01 13.50±2.45 56.96±17.84實(shí)驗(yàn)組 28.88±5.512） 1.80±1.871） 8.63±2.232） 7.50±7.461）

由表3可以看出，與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組大、小鼠自主活動均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。

2.4 實(shí)驗(yàn)組與對照組大、小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動時(shí)間比較

結(jié)果見表4。

表4 實(shí)驗(yàn)組與對照組大、小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動時(shí)間比較 （±s）

表4 實(shí)驗(yàn)組與對照組大、小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動時(shí)間比較 （±s）

注：與對照組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

大鼠 小鼠對照組 48.875±19.98 68.08±25.51實(shí)驗(yàn)組 104.38±39.502） 177.53±28.311）組別

由表4可以看出，與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組大、小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動時(shí)間延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。

2.5 實(shí)驗(yàn)組與對照組大、小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)比較

結(jié)果見表5。

表5 實(shí)驗(yàn)組與對照組大、小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)比較 （mg/g±s）

表5 實(shí)驗(yàn)組與對照組大、小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)比較 （mg/g±s）

注：與對照組比較，1）P<0.05，2）P<0.01

組別 脾臟指數(shù) 胸腺指數(shù)大鼠 小鼠 大鼠 小鼠對照組 0.28±0.13 0.06±0.020 0.26±0.54 0.20±0.11實(shí)驗(yàn)組 0.13±0.032） 0.02±0.0211） 0.12±0.022） 0.13±0.332）

由表5可以看出，與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組大、小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。

3 討 論

在實(shí)驗(yàn)過程中觀察到注射利血平后12 h大鼠即有肝郁脾虛表現(xiàn)，48 h時(shí)癥狀最明顯。在剖檢時(shí)發(fā)現(xiàn)大鼠腹腔都有出血，懷疑利血平導(dǎo)致大鼠腹腔廣泛少量的出血。

體重和攝食水平是反映實(shí)驗(yàn)鼠脾虛的指標(biāo)。蔗糖偏愛度降低反映了對獎賞的敏感缺乏和快感消失以及自主活動減少，這種狀態(tài)與人類肝郁證常見的缺乏動力、沉默寡言、生活興趣減退等類似。強(qiáng)迫游泳不動時(shí)間增加，即逃避不良環(huán)境的欲望減退，類似于肝郁證常見的“無助感”。脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)可以反應(yīng)機(jī)體免疫力的大?。?］。這些都是檢測肝郁脾虛的經(jīng)典指標(biāo)，通過經(jīng)典指標(biāo)驗(yàn)證利血平致肝郁脾虛模型成功與否，通過經(jīng)典復(fù)制方法和檢測指標(biāo)，觀察肝郁脾虛鼠的行為學(xué)表現(xiàn)。

小鼠體積小，便于操作和飼養(yǎng)，飼料消耗量少，需要的飼養(yǎng)空間也很小，適宜大量生產(chǎn)繁殖，可在短時(shí)間內(nèi)提供大量動物。但用小鼠造肝郁脾虛模型所耗時(shí)間較長，行為表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)也沒有大鼠顯著。大鼠對情緒反應(yīng)敏感，可在短時(shí)間復(fù)制成肝郁脾虛模型，是研究肝郁模型的首選實(shí)驗(yàn)動物。

綜上所述，用利血平致大鼠肝郁脾虛模型，是研究肝郁脾虛模型行為學(xué)較好的選擇。

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