王朝暉，李玉中，宋麗媛，王乃玉

(大連醫(yī)科大學(xué) 附屬第二醫(yī)院1.實(shí)驗(yàn)中心，2.檢驗(yàn)科，3.病理科，遼寧 大連 116027)

TSHR和MMP-9在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

王朝暉1，李玉中2，宋麗媛3，王乃玉3

(大連醫(yī)科大學(xué) 附屬第二醫(yī)院1.實(shí)驗(yàn)中心，2.檢驗(yàn)科，3.病理科，遼寧 大連 116027)

［目的］探討甲狀腺乳頭狀癌(PTC)組織中促甲狀腺激素受體(TSHR)與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)的表達(dá)及其與病理參數(shù)之間的關(guān)系。［方法］應(yīng)用免疫組織化學(xué)(SP)法檢測(cè)56例PTC，30例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及11例正常甲狀腺組織標(biāo)本的TSHR和MMP-9蛋白表達(dá)。［結(jié)果］TSHR蛋白在PTC、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和正常甲狀腺組織的表達(dá)率分別為91.07%、70.00%和27.27%，三組間比較差異有顯著性意義(P＜0.05);TSHR在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移PTC組與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)率分別為76.92%與95.35%(P＞0.05);在Ⅲ～Ⅳ期與Ⅰ～Ⅱ期的表達(dá)率分別為89.66%與92.60%(P＞0.05)。MMP-9蛋白在PTC、結(jié)甲和正常甲狀腺組織中表達(dá)率分別為88.37%、36.67%和0%，三組間比較差異有顯著性意義(P＜0.05);在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移PTC組與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移PTC組的表達(dá)率分別為92.31%與79.07%(P＞0.05)，在Ⅲ～Ⅳ期與Ⅰ～Ⅱ期的表達(dá)率分別為89.66%與74.07%(P＞0.05)。TSHR、MMP -9的表達(dá)與患者的性別、年齡及腫瘤大小均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。［結(jié)論］TSHR蛋白高表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生有關(guān)，可能是甲狀腺癌發(fā)生的一個(gè)早期標(biāo)志;MMP-9高表達(dá)可能與甲狀腺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

甲狀腺乳頭狀癌;TSHR;MMP-9;免疫組織化學(xué)法

甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)受多因素影響，表現(xiàn)為多步驟的復(fù)雜過(guò)程，涉及大量的相關(guān)基因結(jié)構(gòu)和表達(dá)調(diào)控的改變。促甲狀腺激素受體(TSHR)是調(diào)控甲狀腺細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的主要受體，其異常表達(dá)是獲得性、遺傳性或先天性甲狀腺疾病的重要原因之一［1］。MMP-9是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)家族成員之一，是降解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的主要酶類，其主要作用是降解ECM，分解基底膜中的纖維連接蛋白和層粘連蛋白［2］。腫瘤細(xì)胞通過(guò)分泌基質(zhì)金屬蛋白酶來(lái)水解基底膜和基質(zhì)中的Ⅳ型膠原等成分，破壞基底膜，侵入小血管和淋巴管而造成腫瘤擴(kuò)散［3］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌組織TSHR、MMP-9蛋白表達(dá)，旨在探討TSHR、MMP-9與腫瘤發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 臨床資料

收集2010年1月—12月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院手術(shù)切除的甲狀腺乳頭狀癌(PTC)、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫(簡(jiǎn)稱結(jié)甲)和正常甲狀腺組織(PTC根治術(shù)取出的患者另一側(cè)正常甲狀腺)蠟塊各56、30和11例，56例癌癥患者中男性18例，女性38例，年齡20～74歲，中位年齡53歲。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移43例。Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期29例?；颊咝g(shù)前均未進(jìn)行放化療和生物治療。

1.2 方 法

用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)97例標(biāo)本TSHR和MMP-9蛋白的表達(dá)，TSHR抗體購(gòu)自武漢博士德公司，使用濃度1∶100;MMP-9抗體購(gòu)自Neomarkers公司，工作濃度1∶100，操作步驟按免疫組化試劑盒要求進(jìn)行，組織切片在檸檬酸鹽緩沖液中用微波進(jìn)行抗原熱修復(fù)100℃ 10 min。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做空白對(duì)照。免疫組化(Streptavidin Peroxidase，SP)試劑盒和DAB顯色劑均購(gòu)自北京中山試劑有限公司。

1.3 結(jié)果判斷

TSHR以胞膜或胞漿出現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞。隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野(400×)下的腫瘤細(xì)胞數(shù)，陽(yáng)性細(xì)胞＞20%為陽(yáng)性表達(dá);MMP-9以胞漿出現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞。隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野(400×)下的腫瘤細(xì)胞數(shù)，陽(yáng)性細(xì)胞＞10%為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包，兩組或多組計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。用Spearmen相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 TSHR與MMP-9蛋白在PTC、結(jié)甲和正常甲狀腺組織的表達(dá)

TSHR蛋白在PTC、結(jié)甲和正常甲狀腺組織的表達(dá)率分別為 91.07%、70.97% 和 27.27%，三組間比較差異有顯著性意義(P＜0.05);MMP-9蛋白在PTC、結(jié)甲和正常甲狀腺組織的表達(dá)率分別為88.37%、36.67%和0%。三組間比較差異有顯著性意義(P＜0.05)。TSHR和MMP-9免疫組化染色圖片如圖1。

2.2 TSHR、MMP-9蛋白表達(dá)與PTC患者病理參數(shù)的關(guān)系

TSHR、MMP-9蛋白表達(dá)與PTC患者的性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分期差異均無(wú)顯著性意義。見(jiàn)表1。

2.3 TSHR與MMP-9蛋白表達(dá)的相關(guān)性

TSHR與MMP-9的相關(guān)性分析顯示，二者表達(dá)相關(guān)性無(wú)顯著性意義。Spearmen相關(guān)系數(shù)r=0.031，P=0.822 ＞0.05，見(jiàn)表 2。

3 討 論

甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，不同的組織類型其惡性程度雖不相同，但都具有侵襲性強(qiáng)和易轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)，尤其PTC多伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是導(dǎo)致治療失敗和患者死亡的主要原因。TSHR為甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞膜受體，促甲狀腺激素通過(guò)與TSHR結(jié)合調(diào)控甲狀腺的功能和促進(jìn)甲狀腺濾泡細(xì)胞的生長(zhǎng)，TSHR在甲狀腺的調(diào)控中起主導(dǎo)作用。研究發(fā)現(xiàn)，PTC組織中TSHR的表達(dá)明顯高于結(jié)甲和正常甲狀腺組織，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組差異無(wú)顯著性意義。與王志峰［4］報(bào)道蛋白的表達(dá)相一致。而與戴亞麗［5］報(bào)道的蛋白表達(dá)結(jié)果相反。另外本研究發(fā)現(xiàn)，Ⅲ～Ⅳ期的表達(dá)低于Ⅰ～Ⅱ期，這說(shuō)明TSHR的高表達(dá)可能與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生有關(guān)，而與腫瘤惡性發(fā)展程度無(wú)關(guān)。如果能抑制甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞膜促甲狀腺激素受體的過(guò)度表達(dá)將有可能阻滯甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生。

圖1 TSHR和MMP-9蛋白在PTC、結(jié)甲和正常甲狀腺組織的表達(dá)(免疫組化 ×200)Fig 1 Expressions of TSHR and MMP-9 in PTC，nodular goiter and normal thyroid tissues(SP ×200)

表1 TSHR、MMP-9蛋白表達(dá)與PTC患者病理參數(shù)的關(guān)系Tab 1 The expressions of TSHR and MMP-9 in PTC tissues and their relation with clinicopathologic

表2 TSHR與MMP-9蛋白表達(dá)的相關(guān)性Tab 2 The relation of TSHR with MMP-9

MMP-9是腫瘤細(xì)胞分泌或誘導(dǎo)宿主細(xì)胞產(chǎn)生的能降解幾乎所有基底膜Ⅳ型膠原的蛋白酶。其通過(guò)降解腫瘤細(xì)胞基膜和包繞腫瘤的基質(zhì)，突破基質(zhì)屏障［6］。腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)是通過(guò)血管內(nèi)皮下基底膜及包膜的膠原降解而完成的，是腫瘤細(xì)胞血行轉(zhuǎn)移的形成途徑［7］。本研究發(fā)現(xiàn)MMP-9蛋白在PTC的表達(dá)明顯高于結(jié)甲和正常甲狀腺組織，且在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)92.31%高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組79.07%，在Ⅲ～Ⅳ期的表達(dá)89.66%高于Ⅰ～Ⅱ期表達(dá)74.07%，雖然結(jié)果差異不明顯，這可能與病例數(shù)較少有關(guān)，但至少說(shuō)明乳頭狀甲狀腺癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移可能與MMP-9大量產(chǎn)生有關(guān)。如果能抑制MMP-9的產(chǎn)生，將會(huì)減少乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。如果能尋找干擾二者蛋白表達(dá)的藥物，將有可能抑制甲狀腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。

:

［1］程維剛，殷德濤，盧秀波，等.THSR、ER與 CyclinD1在分化型甲狀腺癌中的表達(dá)及其意義［J］.鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，5(4):353 -376.

［2］Yang J H，Briggs W H，Libby P.Small mechanical strains selectively suppress matrix metallpprotainase-1 expression by human vascular smooth muscle cells［J］.Biol Chem，2003，273(11):6550 -6555.

［3］唐華美，胡宏慧，金宇飚，等.胃癌中 MMP-2表達(dá)與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究［J］.外科理論與實(shí)踐，2003，8(3):233 -236.

［4］王志峰，劉勤江，廖世奇，等.甲狀腺癌NIS和TSHR表達(dá)的矛盾性及非相關(guān)性［J］.腫瘤防治研究，2011，38(8):909-913.

［5］戴亞麗，葉靜，張帆，等.乳頭狀甲狀腺癌抑癌基因TSHR、P16和RAS啟動(dòng)子甲基化研究［J］.中華內(nèi)分泌代謝雜志，2010，26(5):381-384.

［6］Maeta H，Ohgi S，Trada T.Protein expression of matrix matalloprotei nases 2 and 9 and tissue inhibitors of matalloproteinases 1 and 2 in papillary thyroid carcinomas［J］.Virchows Arch，2001，438(5):121 -128.

［7］李慧云，吳增常.五種基質(zhì)金屬蛋白酶基因在乳頭狀甲狀腺癌中的表達(dá)［J］.中華內(nèi)分泌代謝雜志，2003，19(6):449-451.

Clinical significances of the TSHR and MMP-9 expressions in papillary thyroid carcinoma

WANG Zhao-hui1，LI Yu-zhong2，SONG Li-yuan3，WANG Nai-yu3
(1.Laboratory Center，2.Department of Clinical Laboratory，3.Department of Pathology，the Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University，Dalian116027，China)

Abstract:［Objective］To evaluate the expressions of thyroid stimulating hormone receptor(TSHR)and matrix metalloproteinase-9(MMP-9)in papillary thyroid carcinoma(PTC)and their clinical significances.［Method］The SP immunohistochemistry was used to detect the expressions of TSHR and MMP-9 protein in 56 cases of PTC，30 cases of nodular goiter and 11 cases of normal thyroid tissue.［Results］The positive expression rate of TSHR in PTC was significantly higher than those of nodular goiter and normal thyroid tissue(P＜0.05).and the rates in PTC with lymph node metastasis and without were 76.92%and 95.35%respectively(P＞0.05)，The rates in stageⅢ-Ⅳand stageⅠ-Ⅱwere 89.66%and 92.60%respectively(P＞0.05);The positive expression rate of MMP -9 protein in PTC was significantly higher than those of nodular goiter and normal thyroid tissue(P＜0.05).and the rates in PTC with lymph node metastasis and without were 92.31%and 79.07%respectively(P＞0.05)，and the rates in stage Ⅲ-Ⅳand stageⅠ-Ⅱwere 89.66%and 74.07%respectively(P＞0.05).Their expressions of both TSHR and MMP -9 were not related to sex，age and tumor size of the patient(P＞0.05).［Conclusion］Over-expression of TSHR might be related to the development of PTC and become a early marker of the thyroid carcinoma.The over-expression of MMP -9 could be related to invasion and metastasis.

Key words:papillary thyroid carcinoma;TSHR;MMP-9;immunohistochemistry

R736.1

A

1671-7295(2012)05-0443-03

遼寧省大連市科技計(jì)劃基金資助項(xiàng)目(2011E15SF107)

2012-04-15;

2012-09-03

王朝暉(1963-)，女，遼寧大連人，副主任技師。E-mail:dlwangzhaohui@163.com

李玉中，主任技師。E-mail:dlliyuzhong@126.com