肖開提，阿曼古麗·加孜，圖爾蓀·艾合麥提，芒力克·托合提，阿布力克木，艾尼瓦爾

（1.新疆維吾爾自治區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，新疆烏魯木齊 830064；2.和田地區(qū)動(dòng)物疫病控制與診斷中心，新疆和田 844000；3.喀什地區(qū)動(dòng)物疫病控制與診斷中心，新疆喀什 848002）

牛結(jié)核病主要是由牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis）引起牛的一種慢性消耗性傳染病。結(jié)核病在新疆地區(qū)流行歷史悠久，無論農(nóng)區(qū)、牧區(qū)，城鎮(zhèn)養(yǎng)殖小區(qū)均有發(fā)生，分布較廣，發(fā)病與流行不受氣候、地形、地貌限制，以散發(fā)為主，在個(gè)別地區(qū)呈地方性流行，發(fā)病以奶牛為多，外省引進(jìn)奶牛及進(jìn)口牛發(fā)病率高于土種牛和改良牛。本項(xiàng)目針對(duì)現(xiàn)在我國(guó)常用的牛結(jié)核病診斷方法及一些國(guó)際先進(jìn)診斷方法進(jìn)行對(duì)比，以促進(jìn)我國(guó)牛結(jié)核病檢疫水平的提高。同時(shí)，對(duì)于牛結(jié)核病陽(yáng)性的牛，進(jìn)行病理剖檢及分枝桿菌分離，并應(yīng)用基因定型方法分型鑒定。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)方法與定點(diǎn)檢測(cè)

2008—2010年每年檢測(cè)樣品700份。首先用國(guó)標(biāo)（PPD）進(jìn)行檢疫，對(duì)陽(yáng)性牛開展進(jìn)口牛型、禽型結(jié)核菌素（PPD）試驗(yàn)，同時(shí)進(jìn)行γ-干擾素試驗(yàn)等驗(yàn)證同時(shí)開展流行病學(xué)調(diào)查，收集各地相應(yīng)流行菌株，有條件地開展血清學(xué)試驗(yàn)及分子流行病學(xué)等研究工作。在塔城、阿勒泰、阿克蘇、喀什等4地區(qū)選擇A縣、B縣、C縣、D縣四家牛場(chǎng)開展結(jié)核病的檢測(cè)，進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，收集各地相應(yīng)流行菌株，有條件地開展血清學(xué)試驗(yàn)及分子流行病學(xué)研究工作。

1.2 儀器

精密電子天平、超凈工作臺(tái)、顯微鏡、電子數(shù)顯卡尺、微量金屬注射器，電子推毛器、高速低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、微量可調(diào)移液器、超純化水機(jī)、隔水式恒溫培養(yǎng)箱、定時(shí)恒溫磁力攪拌器。

1.3 PPD與診斷試劑盒

國(guó)產(chǎn)牛PPD由哈藥集團(tuán)生物公司提供，批號(hào)20404；進(jìn)口牛PPD、禽型PPD和牛結(jié)核桿菌γ—干擾素檢測(cè)試劑盒，購(gòu)于北京測(cè)迪科技有限公司。

1.4 染色液

萋—尼氏（ziehl—neelsen）抗酸染色法染色液。

1.5 培養(yǎng)基

L—J培養(yǎng)基和L—J改良培養(yǎng)基。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 牛結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)

依據(jù)中華人民共和國(guó)標(biāo)準(zhǔn)《動(dòng)物結(jié)核病診斷技術(shù)（GB/T18645-2002）》進(jìn)行。

2.2 歐盟比較變態(tài)反應(yīng)

在國(guó)產(chǎn)PPD變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)陽(yáng)性牛頸部的另一側(cè)分兩點(diǎn)同時(shí)注射進(jìn)口牛型和禽型PPD，操作方法與國(guó)產(chǎn)PPD變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)相同。

2.3 γ-干擾素試驗(yàn)

從國(guó)產(chǎn)PPD變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)陽(yáng)性牛采集抗凝血，進(jìn)行牛γ-干擾素酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELISA）比較實(shí)驗(yàn)。

3 結(jié)果

2008—2010年對(duì)A縣、B縣、C縣、D縣的四個(gè)選定牛場(chǎng)進(jìn)行了跟蹤檢測(cè)。三年A縣共檢測(cè)任務(wù)為508頭，實(shí)際檢測(cè)1 098頭奶牛，陽(yáng)性4頭。牛型、禽型結(jié)核菌素比較試驗(yàn)結(jié)果為2頭牛型，γ-干擾素試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果為陰性。B縣檢測(cè)任務(wù)為375頭，實(shí)際檢測(cè)866頭奶牛，陽(yáng)性10頭，牛型、禽型結(jié)核菌素比較試驗(yàn)結(jié)果為7頭牛型，γ-干擾素試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果為6頭牛型。C縣檢測(cè)任務(wù)為375頭，實(shí)際檢測(cè)1 454頭奶牛，陽(yáng)性23頭，牛型、禽型結(jié)核菌素比較試驗(yàn)結(jié)果為14頭牛型、5頭禽型，γ-干擾素試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果為7頭牛型3頭禽型。D縣檢測(cè)任務(wù)為942頭，實(shí)際檢測(cè)2 088頭奶牛，陽(yáng)性22頭，牛型、禽型結(jié)核菌素比較試驗(yàn)結(jié)果為7頭牛型、1頭禽型，γ-干擾素試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果為7頭牛型、1頭禽型，剖檢5頭檢測(cè)陽(yáng)性牛，其中三頭肺門淋巴結(jié)有明顯病變。詳見表1和圖1。

3.1 2008年檢測(cè)700頭，四縣檢出陽(yáng)性牛12頭，陽(yáng)性率為1.7%。

3.2 2009年檢測(cè)2 401頭奶牛，四個(gè)縣市檢出陽(yáng)性牛30頭，總的陽(yáng)性率為1.3%。

3.3 2010年檢測(cè)2 305頭奶牛，四個(gè)縣市檢出陽(yáng)性牛17頭，總的陽(yáng)性率為0.74%。

表1 2008—2010年三種檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果比較表

4 結(jié)論

4.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

三年項(xiàng)目執(zhí)行期間供檢測(cè)奶牛5 406頭，國(guó)產(chǎn)（PPD）進(jìn)行檢測(cè)，檢出陽(yáng)性牛59頭，陽(yáng)性率為1.02%。歐盟（PPD）比較試驗(yàn)檢出陽(yáng)性牛36頭其中牛型牛30頭、禽型6頭，γ-干擾素試驗(yàn)檢出陽(yáng)性24頭其中牛型牛20頭、禽型4頭，國(guó)產(chǎn)（PPD）試驗(yàn)與γ-干擾素試驗(yàn)的比較符合率為41%。通過對(duì)國(guó)內(nèi)產(chǎn)結(jié)核菌素、進(jìn)口結(jié)核菌素及γ-干擾素試驗(yàn)進(jìn)行比較試驗(yàn)看，國(guó)內(nèi)產(chǎn)結(jié)核菌素敏感性較高，進(jìn)口結(jié)核菌素敏感性適中，可以看出PPD試驗(yàn)特異性較低，會(huì)出現(xiàn)一定比列的假陽(yáng)性，造成誤判，而γ-干擾素試驗(yàn)有較強(qiáng)的特異性，如果能降低該試驗(yàn)的成本，作為PPD試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果的補(bǔ)充試驗(yàn)，加入到國(guó)標(biāo)中，可排除假陽(yáng)性，有效降低經(jīng)濟(jì)損失，詳見表1和圖1。

4.2 流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果

通過這三年對(duì)定點(diǎn)地區(qū)定點(diǎn)牛群奶牛結(jié)核病的連續(xù)檢測(cè)，無害化處理陽(yáng)性牛，使定點(diǎn)牛群的陽(yáng)性感染率同比下降顯著。如A縣陽(yáng)性感染率從2008年的1.14%降到2010年的0.2%，同比降低82.5%；B縣陽(yáng)性染率從2008年的1.71%降到2010年的0.44%，同比降低74.3%；C縣陽(yáng)性感染率從2008年的2.3%降到2010年的1.5%，同比降低65.2%；D縣陽(yáng)性感染率從2008年的1.86%降到2010年的0.46%，同比降低54.6%。同時(shí)掌握了定點(diǎn)縣（市）奶牛結(jié)核在規(guī)模場(chǎng)、農(nóng)區(qū)散養(yǎng)戶、牧區(qū)散養(yǎng)戶的流行率，為在全疆范圍內(nèi)開展經(jīng)濟(jì)、有效的奶牛結(jié)核的檢測(cè)、凈化工作，提供了科學(xué)依據(jù)。詳見表2、表3和圖2。

表2 2009—2010年三種試驗(yàn)比較表

表3 三個(gè)檢測(cè)縣市三年陽(yáng)性率比較表

5 分析與討論

5.1 通過對(duì)國(guó)內(nèi)產(chǎn)結(jié)核菌素、進(jìn)口結(jié)核菌素及γ-干擾素試驗(yàn)進(jìn)行比較試驗(yàn)看，國(guó)內(nèi)產(chǎn)結(jié)核菌素敏感性較高，進(jìn)口結(jié)核菌素敏感性適中，可以看出PPD試驗(yàn)特異性較低，會(huì)出現(xiàn)一定比列的假陽(yáng)性，造成誤判，而γ-干擾素試驗(yàn)有較強(qiáng)的特異性，如果能降低該試驗(yàn)的成本，作為PPD試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果的補(bǔ)充試驗(yàn)，加入到國(guó)標(biāo)中，可排除假陽(yáng)性，有效降低經(jīng)濟(jì)損失。

5.2 從本單位對(duì)國(guó)家級(jí)種畜場(chǎng)的監(jiān)測(cè)情況看，如果堅(jiān)持檢測(cè)與淘汰相結(jié)合，通過幾年的努力和堅(jiān)持能夠達(dá)到檢疫凈化標(biāo)準(zhǔn)，如我們對(duì)烏市連續(xù)5年檢測(cè)，牛場(chǎng)堅(jiān)持無害化處理陽(yáng)性牛，使該牛場(chǎng)得結(jié)核陽(yáng)性率從2005年的 0.61%降到2010年的0感染率（2010年沒有檢出結(jié)核陽(yáng)性牛），在堅(jiān)持1—3年的檢測(cè)該場(chǎng)可達(dá)到檢疫凈化標(biāo)準(zhǔn)。

5.3 從監(jiān)測(cè)商品代奶牛場(chǎng)的結(jié)果看，結(jié)核病的陽(yáng)性率較高。這其中可能有3個(gè)主要原因：

5.3.1 牛場(chǎng)對(duì)奶牛結(jié)核病的防控意識(shí)淡漠，沒有在引進(jìn)牛時(shí)嚴(yán)把檢疫關(guān)。

5.3.2 平時(shí)的生產(chǎn)管理不嚴(yán)格規(guī)范。

5.3.3 商品牛場(chǎng)存在不配合獸醫(yī)部門對(duì)牛兩病監(jiān)測(cè)的情況，且自身的監(jiān)測(cè)也不到位，另對(duì)監(jiān)測(cè)出的陽(yáng)性和可疑牛的隔離觀察和處理不及時(shí)。

5.4 從監(jiān)測(cè)情況看，以放牧為主的土種?；蚴侨馀５慕Y(jié)核病的陽(yáng)性率最低，這其中可能主要得益于放牧的飼養(yǎng)方式。因?yàn)榉拍?，降低了牛群的飼養(yǎng)密度從而減少了牛間接觸感染的機(jī)會(huì)以及人和牛接觸感染的機(jī)會(huì)。

5.5 全疆奶牛結(jié)核病的防控形勢(shì)依然十分嚴(yán)峻，尤其是對(duì)小型規(guī)?；膛ｏ曫B(yǎng)場(chǎng)和個(gè)體奶牛飼養(yǎng)戶進(jìn)行重點(diǎn)監(jiān)測(cè)，在監(jiān)測(cè)出陽(yáng)性牛后，由于撲殺補(bǔ)償經(jīng)費(fèi)太少，財(cái)政收入不好的縣市，又無力提供補(bǔ)助金，使得散養(yǎng)戶陽(yáng)性牛得不到及時(shí)處理，成為主要的傳染源。而且存在被轉(zhuǎn)移的可能，所以防控牛結(jié)核病重點(diǎn)是監(jiān)測(cè)與淘汰相結(jié)合，目前只有監(jiān)測(cè)沒有淘汰，而陽(yáng)性牛被轉(zhuǎn)移是牛結(jié)核感染擴(kuò)散的主要途徑之一。因?yàn)樵诓幌腥驹吹那疤嵯拢乐挂赘袆?dòng)物的接觸是非常困難和不現(xiàn)實(shí)的。

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