劉 敏 陳其忠 鄧安彥 周守蓉 吳春磊 穆萬洋

1 四川省南充市中心醫(yī)院輸血科 607600； 2 四川省涼山彝族自治州第一人民醫(yī)院

近年來，我國的梅毒患者呈逐年增多之勢，這一現(xiàn)象已引起人們的高度重視。梅毒是由蒼白螺旋體引起的一種慢性性傳播疾病，它的臨床可見癥狀僅見于一期顯發(fā)階段、二期顯發(fā)階段和晚期，非顯發(fā)階段不僅無可見癥狀，患者也無自覺癥狀，梅毒螺旋體（TP）不能在體外培養(yǎng)，只能在活體內(nèi)繁殖，主要對兔睪丸和眼前房敏感。因此，檢測病原體只能直接在病灶中采集標本后立即做暗視野顯微鏡觀察（RF），因為成本、操作復(fù)雜和檢測時效等原因，除研究外，一般不做R－F和兔睪丸感染試驗（RIT）。梅毒是由梅毒螺旋體（TP）所引起的一種性傳播疾病，臨床診斷梅毒常需要血清學檢驗的結(jié)果來支持，根據(jù)TP感染機體后的特殊的免疫反應(yīng)規(guī)律，其實驗室篩查檢查方法分2類：（1）檢測非特異性梅毒螺旋體抗體，其標準化抗原均為心磷脂、卵磷脂和膽固醇，它們敏感性相同；（2）檢測特異性梅毒螺旋體抗體。現(xiàn)在有少數(shù)實驗室在用PCR技術(shù)檢測TP－DNA和采用梅毒抗體蛋白印跡法（Western－blot）檢測TP特征蛋白條帶，但是一般都是做研究［1］。正確的認識與評估梅毒血清學檢測方法，對于指導臨床診斷具有非常重要的意義，本報告通過分析酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）、甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）3種方法在梅毒診斷中的應(yīng)用，分析其各自應(yīng)用特點，現(xiàn)報告如下。

1 對象與方法

1.1 對象 本院2011年4－12月期間住院及門診患者12 960例，其中年齡在70歲以上的老年患者2 120例。

1.2 檢測方法 采靜脈血，分離血清。用TPELISA進行 TP－Ab篩查，所有ELISA法 TP－Ab陽性標本再用TPPA進行確證試驗且同時進行甲苯胺紅不加熱血清學試驗（TRUST），出現(xiàn)凝集反應(yīng)者判定為TRUST陽性；以ELISA法和TPPA法均陽性者判斷為TP－Ab陽性標本。上述檢測均嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.3 試劑來源 ELISA法檢測試劑盒由珠海麗珠試劑有限公司提供；賽樂迪（SeIDdia）TPPA診斷試劑盒由日本富士瑞必歐株式會社提供；TRUST試劑盒由上海榮盛生物技術(shù)有限公司提供。1.4 儀器 洗板機，酶標儀。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用χ2檢驗進行統(tǒng)計學處理，P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

12 960 例患者用ELISA法篩查共檢出TP－Ab陽性334例，陽性率2.6%；經(jīng)TPPA確診277例陽性，陽性率2.1%；其余均為假陽性。再用TRUST試劑進行定性和定量試驗，有98例陽性，陽性率0.8%；滴度1∶1～1∶4。表明TP－ELISA試劑檢測靈敏度高于TPPA法，其假陽性率為0.45%（57／12 683），TRUST 方法檢測漏檢率為64.62%（179／277）。數(shù)據(jù)分析見表1、2。

表1 12 960例患者用ELISA法檢測TP－Ab結(jié)果的年齡分布

表2 12 960例患者標本TPPA和ELISA檢測結(jié)果

3 討論

人體感染梅毒后，會產(chǎn)生兩類抗體，一類是直接針對梅毒螺旋體的抗體，另一類則是針對類脂質(zhì)的抗體。TP－ELISA是一種基于基因工程的特異性檢測技術(shù)，特異性抗體在梅毒的潛伏期（約感染后2周）產(chǎn)生，對二期、潛伏期和治療后的梅毒的敏感性和特異性均較高［2］。TP－ELISA的主要缺點：該法檢測的是梅毒Ig M及Ig G的混合抗體，梅毒Ig G抗體治愈后相當長的時間內(nèi)仍然存在較高的陽性率，甚至終身陽性，因此，TP－ELISA陽性只說明正在感染或曾經(jīng)感染過，不能判斷梅毒疾病活力與否，所以不能作為療效監(jiān)測手段。且國內(nèi)外TP－ELISA試劑盒包被的TP分子抗原一般沒有經(jīng)過純化，而且用人血清清蛋白增加吸附性。這樣有可能出現(xiàn)假陽性抗原位點。老年人，特別是70歲以上，常伴有心腦血管疾病，或者其他老年性疾病，容易出現(xiàn)機體免疫功能異常，易產(chǎn)生一些針對連接用的清蛋白抗體或異常的蛋白質(zhì)。從而干擾TP－ELISA反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。本組資料結(jié)果顯示：70歲以上老年患者假陽性率為0.97%，而70歲以下老年患者假陽性率只有0.35%，兩組經(jīng)統(tǒng)計學處理，表示差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），與有關(guān)報道相符［3］。故對梅毒的診斷必須結(jié)合臨床表現(xiàn)，否則，可能導致臨床誤診，同時增加患者的不必要治療、用藥和心理負擔。TPPA法檢測的是梅毒特異性抗體，以明膠顆粒為載體，吸附梅毒螺旋體－Niohols株菌體抗原，克服了TPH A血細胞自溶而造成漏檢的弊端，臨床實驗室常以TPPA法陽性作為確診梅毒的依據(jù)，而梅毒螺旋體試驗檢出的抗體可持續(xù)終生，但是在患者伴硬下疳或生殖器官潰瘍疑為TP感染時，首次檢查可以為陰性，需隔1～2周重新復(fù)查。人體被梅毒螺旋體感染后，可產(chǎn)生Ig G和Ig M類抗體，僅僅憑借TPPA陽性就診斷為梅毒，尤其是無癥狀的老年人，顯然是不正確的［4］。由于TRUST操作方便、價格低廉，許多醫(yī)院及血站將其作為梅毒抗體的初篩試驗，陽性標本再用TPPA作確證試驗。但TRUST檢測梅毒的陽性率較低，假陽性較高，不適于作為梅毒的初篩方法。TRUST方便測定反應(yīng)素滴度，反應(yīng)素在初期梅毒病灶出現(xiàn)后1～2周就可測出，在二期梅毒滴最高，三期梅毒較低。由于反應(yīng)素對機體無保護作用，未經(jīng)治療的患者，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長期存在。經(jīng)適當治療后，抗體可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性，其滴度變化與梅毒的治療情況呈正相關(guān)，因此適合用于療效觀察、隨訪和復(fù)發(fā)的輔助診斷以及基層醫(yī)院應(yīng)用［5］。某些疾病可引起假陽性，如紅斑狼瘡、麻風、類風濕關(guān)節(jié)炎、混合結(jié)締組織病等［6］。所以TRUST用于梅毒螺旋體的診斷有很大的局限性。筆者認為對輸血前患者梅毒抗體的檢測應(yīng)采用敏感性和特異性較高的TP－ELISA法進行初篩，可提高梅毒抗體的檢出率；因TP－ELISA在對老年患者的梅毒篩查中，可出現(xiàn)一定數(shù)量的假陽性，需用TPPA作確證試驗，可排除假陽性患者；最后用TRUST法進行檢測，可判斷其是否為現(xiàn)癥患者，對疾病嚴重程度的判斷、療效觀察、是否復(fù)發(fā)或再感染的判斷有非常重要的意義。三種方法相互補充，為臨床提供更為科學和準確的結(jié)果。

綜上所述，三種方法每一種方法在臨床上的意義不同。ELISA法是門診、住院患者梅毒篩查的理想方法。對于ELISA陽性的標本最好同時做TRUST和TPPA檢測，另外對梅毒的診斷必須結(jié)合臨床表現(xiàn)，否則可能導致臨床誤診，同時增加患者的心理及經(jīng)濟負擔。

［1］ 馬開富，劉勝武.梅毒血清學診斷實驗方法研究進展〔J〕.國際檢驗醫(yī)學雜志，2012，11（33）：63－65.

［2］ 程艷杰，王廣杰，王旭梅，等.梅毒螺旋體血清學檢測方法的實驗室評價〔J〕.中國皮膚性病學雜志，2005，19（8）：503－504.

［3］ 何杜.輸血前患者血清梅毒螺旋體抗體檢測結(jié)果分析〔J〕.檢驗醫(yī)學與臨床，2012，47（8）：736－737.

［4］ 王柳溪.TP－ELISA法檢測老年人梅毒抗體易產(chǎn)生假陽性原因分析〔J〕.醫(yī)學理論與實踐，2008，21（9）：1085－1086.

［5］ 黨倩麗，馮捷，張小艷，等.梅毒螺旋體特異性抗體對梅毒早期診斷和治療的評價〔J〕.臨床皮膚科雜志，2005，34（2）：90－92.

［6］ 陳雪.三種梅毒血清學檢測方法應(yīng)用評價〔J〕.實用醫(yī)技雜志2011，99（18）：948－949.