貴州大學動物科學學院水產養(yǎng)殖 熊 達 張小雪＊劉 學

廣東省微生物研究所

省部共建重點實驗室示范基地 許國煥 吳月嫦 張 麗

魚類由于生活在水中，環(huán)境較為復雜，體內的活性氧水平常因水中溶解氧、溫度以及毒素等環(huán)境因子的異常變化而升高，超過自身抗氧化能力，過量的活性氧簇（ROS）引起蛋白質、脂肪、核酸等生物大分子氧化，進而導致細胞損傷。硫辛酸（LA）不僅能夠清除氧自由基、螯合重金屬離子，還具有修復氧化損傷的作用（José，2008）。茴三硫（ATT）具有促進肝細胞活性、保護肝細胞及利膽作用，同時，它能促進體內醇類物質快速代謝而清除，從而降低血中膽固醇含量（王小虎，1999）。茴三硫藥理作用是能明顯增強肝臟谷胱甘肽（GSH）、谷氨半胱氨酸合成酶（GCS）、谷胱甘肽還原酶 （GSSG-R）和谷胱甘肽硫轉移酶 （GSHSTx）活性，降低谷胱甘肽過氧化酶（GSH-Px）活性從而顯著增強肝細胞活力。本研究以奧尼羅非魚幼魚作為試驗對象，通過添加茴三硫、硫辛酸兩種抗氧化劑來評價其對奧尼羅非魚生長性能和抗氧化能力的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗用魚、抗氧化劑及主要試劑 試驗用奧尼羅非魚（Oreochromis niloticus×O.aureus）魚苗為當年培育，取自廣州市花都區(qū)花東鎮(zhèn)魚種場。魚苗運回實驗室后，3%食鹽水浸泡消毒10～15 min，放入預先消毒的暫養(yǎng)池中。暫養(yǎng)馴化15 d后，挑選體質健康，初始體重（6.43 ± 0.03）g，體長（5.74±0.06）cm的試驗魚，經3%的食鹽浸泡后隨機分為4組，每組設3個重復，每個重復30尾魚。隨機放入已經消毒的室內圓形水族箱（直徑100 cm，高75 cm）中進行飼養(yǎng)，試驗期56 d。

茴三硫純度為93.0%，硫辛酸純度為85.3%，均由廣東碧德生物科技有限公司提供。茴三硫和茴三硫標準品均購自Sigma，純度均為98%。茴三硫和硫辛酸純度用HPLC法進行檢測確定。

1.2 日糧組成及試驗設計 在基礎飼料中添加750 mg/kg茴三硫 （參照《中國藥典》，按人體正常劑量換算成按每千克飼料添加量；下同）和硫辛酸600 mg/kg，以未添加抗氧化物質的基礎飼料為空白對照。飼料原料逐級擴大混合均勻后，加適量蒸餾水冷制粒，40℃烘干后4℃保存?zhèn)溆?。試驗日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 試驗日糧組成及營養(yǎng)水平%

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗魚采用微流水養(yǎng)殖系統(tǒng)，24 h充氣增氧，每天投喂 2次，時間為 7∶30和 17∶00，投喂率為體重的3%～4%（每2周進行一次調整），試驗期間水溫為28～31℃，溶解氧為4.0～6.0 mg/L，pH 7.0 ～ 7.5，氨氮小于 0.2 mg/L，光照周期為12 h光照和12 h黑暗。

1.4 樣品采集 試驗結束后，禁食24 h，各缸魚稱重，再從各試驗缸分別隨機取6尾魚，測定體長、體重后從尾靜脈采血，并在冰盤上解剖魚體，取肝臟，置于-80℃保存?zhèn)溆?。將采集的血?℃靜置 24 h，10000 r/min，低溫離心 10 min，取上清液（血清），-20℃保存，備用。

1.5 測定指標和方法

1.5.1 生長性能測定 試驗飼料樣品在105℃烘干至恒重，采用凱氏定氮法測定樣品的總氮含量，計算粗蛋白含量；粗脂肪含量采用索氏抽提法；粗灰分含量采用高溫（550℃）灰化法測定（AOAC，1995）。于試驗開始和結束當天早晨分別空腹稱量每箱魚的總重，記錄每天每組飼料攝食量，計算總增重和餌料系數(shù)等生長指標。計算公式如下：

增重率 （WGR，%）=[（試驗末魚均重-試驗初魚均重）/試驗初魚均重]×100；

特定生長率 （SGR，%/d）=（in試驗末魚均重-in試驗初魚均重）/試驗天數(shù)×100；

飼料系數(shù) （FCR）=攝取的飼料總重量/（試驗末魚總體重-試驗初魚總體重）；

蛋白質效率 （PER）=（試驗末魚總體重-試驗初魚總體重）/投喂飼料總量（g）×飼料中的蛋白質質量分數(shù)（%）。

1.5.2 血液生化指標的測定 超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、總抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）均用南京建成試劑盒，測定方法根據(jù)試劑盒提高的方法進行。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)均為 “平均值±標準差”，采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0中的單因素方差分析（ONE-WAY ANOVA）進行統(tǒng)計分析，均值的多重比較采用Duncan’s法進行，顯著水平為0.05。

2 結果與分析

2.1 茴三硫和硫辛酸對奧尼羅非魚生長性能及飼料利用率的影響 由表2可見，飼養(yǎng)56 d后，抗氧化劑茴三硫和硫辛酸組魚體增重率、特定生長率、蛋白質效率顯著高于對照組（P＜0.05），分別比對照組提高 15.80%、7.48%、25.15%和10.57%、5.12%、15.57%。茴三硫組FCR顯著低于其他各試驗組（P＜0.05），分別比對照組和硫辛酸組降低了18.33%和9.17%。

表2 茴三硫和硫辛酸對奧尼羅非魚生長性能及飼料利用率的影響

2.2 茴三硫和硫辛酸奧尼羅非魚抗氧化能力的影響 由表3可見，與對照組相比，添加抗氧化劑茴三硫和硫辛酸可顯著提高魚體血清SOD和TAOC水平 （P＜0.05），分別比對照組提高了98.77%和45.97%，90.59%和41.17%?？寡趸瘎┝蛐了峤MGSH-Px水平顯著高于其他各試驗組（P＜0.05），分別比茴三硫組和對照組提高了14.44%和14.96%。添加抗氧化劑茴三硫和硫辛酸可顯著降低魚體血清MDA水平（P＜0.05），比對照組降低了47.91%和28.43%（P＜0.05）。

表3 茴三硫和硫辛酸對奧尼羅非魚血清生化指標影響

3 討論

3.1 茴三硫和硫辛酸對奧尼羅非魚生長性能及飼料利用率的影響 目前，有關茴三硫對魚類生長性能影響的研究報道較少。吳聰（2010）研究表明，在高脂飼料中添加1%的硫辛酸飼喂6周齡小鼠8周，高脂日糧空白組體重顯著高于空白對照組（P＜0.05），添加1%的硫辛酸高脂日糧組體重顯著高于高脂日糧空白組（P＜0.05），與空白對照組差異不顯著（P＞0.05）。本研究結果也表明，茴三硫和硫辛酸均能有顯著提高奧尼羅非魚生長性能和飼料利用率。

3.2 茴三硫和硫辛酸對奧尼羅非魚血清生化指標影響 魚類的抗氧化水平高低可以間接反映機體的健康狀況?；顫姷淖杂苫巧镌诖x過程中排除外源物質和抗應激反應時的產物之一（VidaI等，2002；Luke 等，1999）。SOD、GSH-Px 是抗氧化酶系統(tǒng)的重要成員，具有清除機體代謝過程中產生的活性自由基，減少脂質過氧化損傷，保持機體健康的功能。在正常情況下，體內抗氧化酶系可以清除體內自由基，而當其氧化能力下降時，過量的氧自由基與不飽和脂肪酸發(fā)生脂質化氧化，會損傷細胞膜及細胞內的大分子蛋白和核酸，對動物造成損傷 （Mathew等2007；葉繼丹 等，2004；Walker等2000）。因此，抗氧化酶系統(tǒng)在維持機體正常代謝和功能上起著十分重要作用。GSH-Px可幫助阻止氫過氧化物和有機過氧化物的形成，該酶活性降低，則引起自由基和過氧化物積累，進而導致脂質和細胞膜氧化損傷（Cavaletto，2002）；GSH-Px是機體內廣泛存在的一種重要的過氧化物分解酶，它特異性地催化還原型谷胱甘肽（GSH）對脂質氫過氧化物的還原反應，從而保護細胞和細胞膜免受氧化損傷（Oliveros，2000）。T-AOC是用于評價機體抗氧化系統(tǒng)性能的綜合性指標（Cristina，2006）。MDA是膜脂過氧化的最終分解產物，其含量可以反映生物機體受到自由基攻擊程度，MDA從膜上產生的位置釋放后，可以與蛋白質、核酸反應，從而抑制蛋白質的合成。MDA是細胞氧化代謝產物，其含量高低直接反應了生物機體受自由基攻擊的程度。因此，MDA的積累可能對膜和細胞造成一定的傷害。在生產過程中，魚類因食用氧化酸敗飼料受到傷害，從MDA含量上能間接反映其傷害程度 （方展強和王春鳳，2005）。

本研究結果表明，茴三硫、硫辛酸兩種抗氧化劑的添加均能不同程度提高奧尼羅非魚的SOD、GSH-Px和T-AOC的酶活，并能顯著降低了MDA的含量。其中，茴三硫添加組與對照組相比，SOD和T-AOC分別提高了45.97%和98.77%，MDA降低了47.91%。硫辛酸組相對對照組，也有所改善，但是沒有茴三硫組效果顯著。這與陳齊勇（2011）研究結果一致。王艷艷等（2008）在研究高脂日糧中添加0.1%硫辛酸對小鼠肝臟與血漿CAT、GSH-Px及T-AOC酶活的影響時，也得出相似的結論。李安林等（2006）在研究硫辛酸對高脂日糧大鼠脂類代謝和抗氧化能力影響的試驗中發(fā)現(xiàn)，添加0.1%硫辛酸能有效抑制脂質過氧化，預防動脈粥樣硬化的發(fā)生。曲佳音等（2011）研究得出硫辛酸能有效提高肥胖大鼠的抗氧化能力的結論。本試驗結果表明，茴三硫和硫辛酸兩種抗氧化物質的添加均能提高奧尼羅非魚的抗氧化能力。

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