宋向芹 司秀文 張 芳 趙延婷

濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科 (山東濱州，256603)

慢性乙型肝炎 (CHB)是由乙型肝炎病毒 (HBV)感染而引起的一種傳染性疾病。我國是HBV感染高發(fā)地區(qū)，其中一部分患者逐漸發(fā)展為肝纖維化，25%～40%的肝纖維化患者最終發(fā)展為肝硬化乃至肝癌。肝炎、肝纖維化、肝硬化、肝癌的形成是一個多因素多細胞參與的復(fù)雜過程，其涉及多種細胞因子的改變。細胞因子對肝臟疾病的作用越來越受到關(guān)注，其血清學(xué)標志物可能是HBV病情進展的潛在的標志物［1］。多項研究表明血管內(nèi)皮生長因子 (Vascular endothelial growth factor，VEGF)在肝臟相關(guān)疾病發(fā)生發(fā)展中起著重要作用［2，3］，但有關(guān)VEGF在HBV相關(guān)肝病患者血清中的表達變化研究較少。為探討VEGF在乙型肝炎相關(guān)肝病患者血清中的動態(tài)變化及其意義，筆者作了相關(guān)的研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年7月-2011年12月，選擇正常對照組43例，年齡25～60歲，為我院健康體檢合格人員，無心、肺、肝、腎等重要臟器疾病，肝腎功能等血清學(xué)指標檢查正常。慢性乙型肝炎40例，肝纖維化36例，肝硬化40例，肝細胞癌50例，診斷均符合2010年版中國慢性乙型肝炎的診斷標準［4］。

1.2 主要試劑和方法 抽取住院的各種肝病患者及健康查體者清晨空腹靜脈血5ml，分別注入兩個促凝試管中，分離血清，避免溶血、脂血標本，1管用于當日測定 AST、ALT、GGT、HBsAg;另一管血清分別按1次用量分裝于數(shù)支離心管中，編號、密封，凍存于-80℃，集中測定VEGF。血清可溶性VEGF檢測采用雙抗體夾心ELISA法;血清ALT、AST、GGT采用OLYPUS 2700全自動生化分析儀檢測。以上均嚴格按照標準化操作程序進行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS.V13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。計量數(shù)據(jù)用(±s)表示，兩組間比較用t檢驗，兩組數(shù)據(jù)間相關(guān)關(guān)系用直線相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組人員血清VEGF水平 見表1。

表1 各組人員血清 VEGF水平比較 (±s，ng/L)

表1 各組人員血清 VEGF水平比較 (±s，ng/L)

組間比較，P均＜0.05

組別n VEGF慢性乙型肝炎組40 59.3 ±29.12肝炎肝纖維化組 36 106.5 ±40.7肝炎肝硬化組 40 196.3 ± 50.4肝細胞肝癌組 50 289.4 ±60.3正常對照組43 20.8 ±8.9

2.2 4 組患者VEGF與AST、ALT及GGT的相關(guān)性 見表2。

表24 組患者VEGF水平與AST、ALT、GGT相關(guān)性比較(±s)

表24 組患者VEGF水平與AST、ALT、GGT相關(guān)性比較(±s)

組別n VEGF GGT ALT AST慢性乙型肝炎組 40 59.3±29.1 65.2 ±7.8 272.8 ±80.8 178.9 ±69.8肝炎肝纖維化組 36 106.5±40.7 123.3 ±20.9 255.7 ±52.3 167.9 ±70.9肝炎肝硬化組 40 196.3 ±50.4 234.7 ±40.9 265.7 ±60.8 198.9 ±89.2肝細胞肝癌組 50 289.4 ±60.3 543.8 ±50.6 298.8 ±70.8 197.6 ±98.5

肝細胞癌、肝炎肝硬化、肝纖維化和慢性肝炎患者血清VEGF水平與AST、ALT無相關(guān)性，與GGT成正相關(guān) (r=0.337，P ＜0.05)。

2.3 VEGF與GGT聯(lián)合檢測，對肝細胞癌患者診斷的敏感性和特異性 見表3。

表3 VEGF、GGT聯(lián)合檢測對肝細胞癌診斷的靈敏性和特異性 (%)

3 討論

我國是乙型病毒性肝炎高發(fā)地區(qū)，部分患者逐漸發(fā)展成肝纖維化、肝硬化甚至肝癌，每年死于乙型肝炎相關(guān)疾病者多達35萬人，乙型肝炎相關(guān)疾病已成為我國一個重要的公共健康問題。

VEGF是目前所知最重要的直接作用于血管內(nèi)皮細胞的生長因子，可特異性地促進內(nèi)皮細胞分裂、增殖和移動，增加血管通透性，在血管形成中起重要作用［5］。由于VEGF在原位誘導(dǎo)血管生成，正常人循環(huán)中的VEGF濃度比較低，而在與血管內(nèi)皮細胞增殖相關(guān)的生理與病理過程中，VEGF濃度可明顯升高［6］。乙型肝炎相關(guān)肝病進展過程中有肝細胞的損害和再生，而肝再生與VEGF的作用密切相關(guān)，肝再生包括內(nèi)皮細胞增生、新生血管的生成、肝細胞的增殖、肝竇的重構(gòu)等復(fù)雜過程，理論上認為VEGF會有波動，故研究患者血清VEGF水平能否敏感地反映肝細胞損傷、壞死和再生程度等具有重要的意義。

目前對于VEGF在肝病中的研究多采用肝組織免疫組化法，而對于血液中的VEGF與慢性肝病關(guān)系的研究報道較少，同時VEGF在慢性肝病中的研究結(jié)果不盡相同［7～9］。ALT、AST、GGT是較靈敏的肝功能指標［10］，是判斷肝內(nèi)炎性反映活動度的可靠指標［11］。因此，檢測血液中的VEGF及VEGF、ALT、AST和GGT的聯(lián)合檢測對于進一步探討血液中的VEGF在慢性肝病中的作用具有很高的臨床應(yīng)用價值。本研究通過檢測慢性乙型肝炎、肝纖維化、肝硬化和肝細胞癌組患者血清VEGF水平，并與正常對照組進行比較，各組的VEGF水平高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)，且隨著病情的進展，VEGF呈上升趨勢。慢性乙型肝炎向肝纖維化、肝硬化、肝細胞癌發(fā)展時，VEGF可能參與了整個發(fā)展過程。似乎預(yù)示從病毒感染到組織的過度增生到腫瘤形成，血管形成可能起某種推動作用。本研究結(jié)果表明VEGF能夠作為慢性肝病患者動態(tài)監(jiān)測的指標，已有研究證實VEGF可以作為肝細胞癌的一種分子標志物［12，13］。本文研究表明：VEGF水平與ALT、AST無明顯相關(guān)性;與GGT成正相關(guān)。VEGF與GGT聯(lián)合檢測，可以進一步提高對肝細胞癌患者診斷的靈敏度和特異性。

總之，VEGF與乙型肝炎的發(fā)病、肝細胞再生、肝組織病變等密切相關(guān)，在肝內(nèi)血管構(gòu)建中有重要的作用。檢測血清中VEGF含量為臨床觀察乙肝患者發(fā)病程度、判斷療效提供了新的工具。由于本研究采用血清標本，用夾心ELISA法測定VEGF濃度，與免疫組化法研究組織中的VEGF表達率相比，檢測血清VEGF不需用手術(shù)標本，取血方便，損傷小，又可反復(fù)檢測，在用于慢性乙型肝炎疾病動態(tài)進展監(jiān)測方面有一定的價值。

［1］KIM BK，HAN KH，AHN SH.Hepatitis B virus serology to predict antiviral response in chronic hepatitis B ［J］.Digestion，2011，84：29-34.

［2］COULION S，HEINDRYCX，F(xiàn)，GEERTS A，et al.Angiogenesis in chronic liver disease and its complications［J］.Liver Int，2011，31(2)：146-162.

［3］VANHEULE E，GEERTS AM，VAN HUYSSE J，et al.An intravital microscopic study of the hepatic microcirculation in cirrhotic mice models：relationship between fibrosis and angiogenesis［J］.Int J Exp Pathol，2008，89(6)：419-432.

［4］中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會.病毒性肝炎的診斷標準［J］.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2011，11(1)：56-60.

［5］VON MARSCHALL Z，CRAMER T，HOCKER M，et al.Dual mechanism of vascular endothelial growth factor upregulation by hypoxia in human hepatocellular carcinoma［J］.Gut，2001，48(1)：87-96.

［6］DRAFT A，WEINDDK OCHDS A，et al.Vascular endothelia growth factor in the sera and effusions of patients with malignant and non-malignant disease ［J］.Cancer，1999，85：178-187.

［7］郭燕萍，楊廣英，王建君，等.肝組織中轉(zhuǎn)化生長因子-β1、血管內(nèi)皮生長因子及微血管密度的表達在肝纖維化中的作用及意義［J］.中國實用醫(yī)刊，2008，35(27)：10-11.

［8］李曉虹，楊蒲芳，戚紅霞，等.血清TGF-β1及VEGF在慢性乙型肝炎、肝纖維化、肝硬化患者的臨床變化及其意義 ［J］.臨床消化病雜志，2011，23(3)：144-145.

［9］JINNO K，WANG W，ELLIS L，et al.NF-Kappa B regulates VEGF gene expression in human pancreatic cancers［J］.Proc Annu Meet Am Assoc Res，1996，37(4)：525-530.

［10］周玉寶，劉芳，武易.慢性乙型肝炎患者血清學(xué)指標綜合評價［J］.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2011，32(2)：165-166.

［11］牛文強，陳杰.乙型肝炎病毒外膜大蛋白與HBV DNA、ALT的關(guān)系及其臨床意義［J］.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，32(10)：1045-1046.

［12］GADELHAK NA， GADELHAK SA， EL-MORSIDA， et al.Prognostic significance of three hepatitis markers(p53 antibodies，vascular endothelial growth factors and alpha fetoprotein)in patients with hepatocellular carcinoma［J］.Hepatogastroenterology，2009，56(94-95)：1417-1424.

［13］KASED AO，HANBALI A，COTANT M，et al.Vascular endothelial growth factor in the management of hepatocellular carcinoma：a review of literature ［J］.Cancer，2009，115(21)：4895-4906.