滿永宏 包東武

復(fù)方中藥CRFC-2對小鼠食物過敏模型拮抗作用的實驗研究

滿永宏 包東武

目的研究復(fù)方中藥CRFC-2在小鼠食物過敏動物模型中拮抗花生變態(tài)反應(yīng)的效果及機制。方法以花生粗提物和金黃色葡萄球菌腸毒素B誘導(dǎo)花生過敏小鼠動物模型，分別經(jīng)CRFC-2處理和胃腸道激發(fā)后，檢測過敏癥狀、直腸體溫、血管滲出、組胺水平、血清特異性抗體水平。結(jié)果CRFC實驗組小鼠未出現(xiàn)明顯的過敏癥狀。結(jié)論復(fù)方中藥CRFC-2在小鼠動物模型中能夠拮抗花生誘導(dǎo)的食物變態(tài)反應(yīng)。

食物過敏;CRFC;復(fù)方中藥

多數(shù)花生過敏是由IgE抗體介導(dǎo)的I型超敏反應(yīng)，可以引起血壓降低、面部和喉嚨腫脹等癥狀阻礙呼吸，從而導(dǎo)致休克。同時，花生過敏也是食物過敏中導(dǎo)致死亡人數(shù)最高的一種，90%因食物過敏引發(fā)的死亡都是由花生導(dǎo)致的，而西醫(yī)對花生過敏尚缺乏有效的預(yù)防手段［1］。先前的研究中，我們已經(jīng)證實復(fù)方中藥CRFC-1可以在食物過敏小鼠動物模型中阻斷變態(tài)反應(yīng)，本實驗去掉了艾葉、黃苓兩味中藥，研究其是否具有相同的功能。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級Balb/c小鼠50只，鼠齡6～8周，雄性，體重18～20g，購自鄭州大學(xué)實驗動物中心。

1.2 復(fù)方中藥CRFC-2由當(dāng)歸、黃芪、香附、荊芥、麻黃、陳皮、黨參、黃連、靈芝組成。原材料購自南陽市乾景中藥村有限責(zé)任公司，產(chǎn)地明確，并經(jīng)南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校中醫(yī)系教研室鑒定并煎制，含原藥材0.16g/ml，置于4℃冰箱備用。

1.3 試劑 山羊抗小鼠IgE抗體為Serotec公司產(chǎn)品;組胺檢測試劑盒為eBioscience公司產(chǎn)品;小鼠組胺ELISA試劑盒為The Binding Site，Inc公司產(chǎn)品;Evan’s藍(lán)染料為上海如吉生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品;金黃色葡萄球菌腸毒素B(SEB)購自中國軍事醫(yī)學(xué)研究院;花生粗取物(WPE)按文獻(xiàn)方法制備［2］。

1.4 給藥及分組 50只實驗小鼠隨機分為CRFC-2組(n=25)和對照組共兩組(n=25)。2mg WPE與10μg SEB混合，共溶于400μl 0.2M重碳酸鹽中，灌胃喂服小鼠每周2次，連續(xù)3周。從第3周開始，CRFC-2組按10ml/kg體質(zhì)量取復(fù)方中藥CRFC-2灌胃，對照組給予等體積蒸餾水，2次/d，連續(xù)7周(3～9周)。在第5周和第7周，分別給予2mg WPE與10μg SEB混合物灌胃以維持致敏狀態(tài)。在第10周，兩組均以100mg WPE灌胃進(jìn)行胃腸道激發(fā)。

1.5 過敏癥狀檢查 WPE灌胃5～10min之后，小鼠開始出現(xiàn)癥狀，30～50min達(dá)到高峰，評分標(biāo)準(zhǔn)如下:0-無癥狀發(fā)生;1-搔撓鼻子及頭部;2-呼吸部位毛豎起、眼周和唇部水腫增加或腹瀉;3-口周及尾巴紫紺、呼吸困難或震顫及痙攣;5-死亡。

1.6 血管性滲出檢查 WPE灌胃激發(fā)前，從小鼠尾靜脈注入 Evan’s藍(lán)染料100μl(0.5%)，胃腸道激發(fā)后30～40min之后，檢查小鼠四肢變藍(lán)程度確定血管滲出性。

1.7 直腸溫度檢查 胃腸道激發(fā)后25min，以體溫計測量小鼠直腸溫度。

1.8 血漿組胺水平檢測 胃腸道激發(fā)后30min取血約0.8ml，室溫放置2～3h，離心取上層血清檢測組胺水平。

1.9 血清特異性IgE檢測 CRFC組和對照組于第3、5、9周于尾靜脈取血，分別貯存于-20℃，最后同時檢測血清特異性IgE水平。

2 結(jié)果

2.1 過敏癥狀 CRFC組和對照組激發(fā)后的體征結(jié)果如表1所示。

表1 胃腸道激發(fā)后小鼠的變態(tài)反應(yīng)體征

2.2 血管性滲出檢查 對照組存在明顯的血管滲出性改變(藍(lán)色)，而CRFC-2組未見此特征。

2.3直腸溫度檢測 CRFC-2組直腸平均溫度為37.4℃，而對照組為34.4℃，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

2.4 血漿組胺水平檢測 CRFC-2組組胺水平為(51±25)nmol/L，對照組為(5421±2836)nmol/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。

2.5 小鼠血清特異性IgE CRFC-2組和對照組在第3周和第5周，血清特異性卵清蛋白IgE水平無明顯差異，第9周兩組血清特異性卵清蛋白IgE的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 CRFC-2組及對照組血清特異性卵清蛋白IgE水平(nmol/L)

3 討論

花生過敏是具有較高致死率的變態(tài)反應(yīng)，至今尚無有效的治療手段。雖然部分新型免疫療法可以在一定程度上預(yù)防其發(fā)生，但還沒有能完全降低或阻斷其嚴(yán)重癥狀的方法。

多數(shù)花生過敏為I型速發(fā)型超敏反應(yīng)，其發(fā)病機制中，IgE抗體的產(chǎn)生是重要的中心環(huán)節(jié)。花生中的Arah1和Arash2蛋白誘導(dǎo)機體產(chǎn)生食物特異性IgE抗體，IgE和過敏原通過高親和力的IgE受體(FceRI)，激活已致敏的肥大細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒，釋放組胺等生物活性介質(zhì)，引起毛細(xì)血管擴張、通透性增加、平滑肌收縮、腺體分泌增加，產(chǎn)生一系列局部或全身性臨床癥狀［3］。

本研究以花生粗提物(WPE)和金黃色葡萄球菌腸毒素B(SEB)混合物致敏小鼠，誘導(dǎo)建立花生過敏動物模型。對照組小鼠出現(xiàn)呼吸困難、眼周和唇部水腫等癥狀，血清中特異性IgE水平上升，這與Kirthana的研究結(jié)果一致［4］。

研究結(jié)果顯示，CRFC-2復(fù)方中藥在小鼠模型中可以完全預(yù)防花生過敏。在所有監(jiān)測指標(biāo)中，對照組表現(xiàn)出花生過敏癥狀，包括明顯的過敏體癥;血清特異性IgE、組胺水平顯著升高;直腸溫度下降，血管滲出性改變，而CRFC-2組則未出現(xiàn)明顯的過敏癥狀及上述生理指標(biāo)的改變。

因此，復(fù)方中藥CRFC-2可以在小鼠花生過敏動物模型中阻斷花生過敏原誘發(fā)的食物變態(tài)反應(yīng)，該方的毒理作用及對人類花生過敏的治療效果有待進(jìn)一步研究。

［1］劉文忠，韓躍華.食物超敏反應(yīng).國外醫(yī)學(xué).消化系疾病分冊，2003，23(1):3.

［2］Bock SA，Munoz-Furlong A，Sampson HA.Fatalities due to anaphylactic reactions to foods.J Allergy Clin Immunol，2001，107:191-193.

［3］Norman PS.Immunotherapy:1999-2004.J Allergy Clin Immunol，2004，113:1013-1023.

［4］Ricki M，Helm，Richard W.Nonmurine animal models of food allergy.Environ Health Perspect，2003，111(2):239-244.

Herbal formula crfc-2blocks peanut-induced anaphylaxis in food allergy model

MAN Yong-hong，BAO Dong-wu.Microbiology Laboratory of Nanyang Medical College，Nanyang 473061，China

ObjectiveThe purpose of this study was to investigate the effects and mechanism of a herbal formula，CRFC-2on anaphylactic reactions induced by peanut in a mouse model.MethodsAfter CRFC treatment for 7weeks，the mice were challenged with peanut and the anaphylactic scores rectal temperature，vascular leakage，plasma histamine levels，serum IgE were measured.ResultsAfter challenges，CRFC treated mice showed no sign of anaphylactic reactions.ConclusionCRFC-2treatment completely eliminated anaphylaxis in peanut-sensitized mice.

Food allergy; CRFC;Herbal formula

473061南陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)部病免教研室