施明毅，李建利,2

冠心病是指冠狀動(dòng)脈粥樣硬化使血管腔狹窄或阻塞，或（和）因冠狀動(dòng)脈功能性改變導(dǎo)致心肌缺血缺氧或壞死而引起的心臟病[1]，是心血管系統(tǒng)常見(jiàn)病、多發(fā)病，嚴(yán)重威脅中老年的健康和生命。冠心康膠囊是四川中醫(yī)藥科學(xué)院中醫(yī)研究所針對(duì)冠心病腎虛血瘀證研制的新藥，由丹參、淫羊藿、黃芪、赤芍、太子參、五味子、麥冬、川芎、當(dāng)歸、桂枝、紅花等十一味中藥組成，具補(bǔ)心強(qiáng)腎、活血化瘀、通竅止痛之功效，主要用于胸悶氣短、冠心病心絞痛、心肌缺血的治療。本文結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)及預(yù)試驗(yàn)，通過(guò)對(duì)處方研究及劑型選擇、制備工藝研究、中試研究、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究和初步穩(wěn)定性研究等方面的理論進(jìn)行初步探討，旨在為具體實(shí)驗(yàn)研究提供思路。

1 處方研究與劑型的選擇

1.1 處方來(lái)源、組成及功能主治

本處方為四川中醫(yī)藥科學(xué)院中醫(yī)醫(yī)院的名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方，由丹參、淫羊藿、黃芪、赤芍、太子參、五味子、麥冬、川芎、當(dāng)歸、桂枝、紅花等組成，具強(qiáng)心補(bǔ)腎、活血化瘀、通竅止痛之功效，主要用于胸悶氣短、冠心病心絞痛、心肌缺血的治療。

1.2 劑型的選擇

本品處方原以湯劑和片劑形式應(yīng)用于臨床多年，具有良好的強(qiáng)心補(bǔ)腎，活血化瘀，通竅止痛作用。但湯劑口服劑量大，不宜貯存、攜帶不便，不適應(yīng)現(xiàn)代生活的需要；片劑在制備、儲(chǔ)存、服用等方面亦存在諸多不便。本課題組成員曾將本方制成膠囊劑、顆粒劑與片劑進(jìn)行了比較，結(jié)果表明：膠囊劑與顆粒劑療效相近，片劑次之；片劑制作穩(wěn)定性較差，顆粒劑口感差攜帶服用不及膠囊劑方便；膠囊劑美觀(guān)、穩(wěn)定性好，利于生產(chǎn)、運(yùn)輸、貯藏和服用，更易為患者接受。膠囊劑不僅整潔、美觀(guān)、容易吞服，而且還具有可掩蓋藥物的不良?xì)馕?、提高藥物的穩(wěn)定性、藥物生物利用度高、彌補(bǔ)其他制劑的不足等特點(diǎn)[2]。綜合考慮處方功能主治及臨床用藥需要、方中藥物主要有效成分性質(zhì)，以及生產(chǎn)成本等因素，新制劑的劑型選定為膠囊劑。

2 制備工藝研究

2.1 工藝路線(xiàn)的確定

本課題研究的新制劑為中藥復(fù)方制劑，擬制成硬膠囊劑，注冊(cè)申請(qǐng)6類(lèi)新藥。本復(fù)方由11味中藥組成，其中丹參為君藥，其水溶性和脂溶性成分均含有效成分，故擬采用醇水雙提法，先乙醇提取醇溶性成分，藥渣干燥后并入水提藥中共同水提；川芎、當(dāng)歸和桂枝均含有較多的揮發(fā)油，與其活血化瘀、補(bǔ)血通經(jīng)的功能關(guān)系密切，其他有效成分基本可溶于水，故可采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取后的水液并入水提液中處理，藥渣干燥后并入水提藥中共同水提；淫羊藿、黃芪、麥冬、紅花有效成分基本都能溶于水，擬采用水提取法；赤芍、太子參、五味子有效成分基本都能溶于醇且水溶性效果較差，擬采用乙醇提取法。

通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)[3~6]及初步預(yù)實(shí)驗(yàn)，綜合考慮處方特點(diǎn)、藥材性質(zhì)、制劑類(lèi)型、臨床用藥要求、大生產(chǎn)的可行性和生產(chǎn)成本，以及工藝的先進(jìn)性要求等多方面因素，初步擬定工藝路線(xiàn)如下：

水蒸氣蒸餾法混合提取川芎、當(dāng)歸和桂枝，得川芎、當(dāng)歸和桂枝揮發(fā)油、水提液1和藥渣1；揮發(fā)油采用β-環(huán)糊精包合技術(shù)包合得包合物，備用。乙醇提取丹參，得醇提液1和藥渣2；乙醇回流混和提取太子參、赤芍和五味子，得醇提液2和藥渣（棄去）；合并醇提液1和醇提液2，減壓回收乙醇得濃縮液1，備用。水煎煮提取淫羊藿、黃芪、麥冬、紅花、藥渣1和藥渣2，得水提液2和藥渣（棄去）；合并水提液1和水提液2，濃縮至一定程度，得濃縮液2，純化，濾過(guò)得濾液。合并濃縮液1和濾液，濃縮至一定程度，得清膏，干燥得浸膏粉。將浸膏粉和包合物裝入空心膠囊，得成品。

2.2 藥材的鑒定與前處理

按《中國(guó)藥典》2010年版一部和《四川省中藥飲片炮制規(guī)范》2002年版相關(guān)項(xiàng)下要求進(jìn)行藥材鑒定和炮制。

2.3 提取工藝研究

2.3.1 川芎、當(dāng)歸和桂枝揮發(fā)油提取工藝研究[4~7]采用水蒸氣蒸餾法提取川芎、當(dāng)歸、桂枝揮發(fā)油，以揮發(fā)油的收率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇加水量、浸泡時(shí)間及提取時(shí)間等為主要影響因素，應(yīng)用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)選最佳提取工藝條件。試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，揮發(fā)油最佳提取工藝條件為加9 倍量的水，浸泡80 min，蒸餾提取7.5 h。

2.3.2 β-環(huán)糊精包合揮發(fā)油技術(shù)研究[5,8,9]采用包合水溶液超聲法制備包合物，以揮發(fā)油包合率、包合物收得率及包合物含油率（權(quán)重系數(shù)分別為0.6、0.2和0.2）為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的用量比、包合溫度、超聲時(shí)間為考察因素，應(yīng)用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)選最佳的包合工藝，并對(duì)包合物進(jìn)行驗(yàn)證。試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，揮發(fā)油的β-CD 最佳包合工藝條件為β- CD 與揮發(fā)油的用量比為7∶1，包合溫度為45 °C，超聲時(shí)間為40 min。

2.3.3 丹參醇提工藝研究[5,11]選擇乙醇濃度、加醇量、提取時(shí)間、提取次數(shù)四個(gè)因素，以丹參酮ⅡA含量和干浸膏收率（權(quán)重系數(shù)分別為0.7和0.3）為指標(biāo)，利用L9(34)正交試驗(yàn)法優(yōu)選最佳醇提工藝條件。試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，最佳提取工藝加12 倍量的80%乙醇，煎煮3 次，每次30 min。

2.3.4 赤芍等醇提工藝研究[3.11]醇提赤芍、五味子和太子參。選取乙醇濃度、加醇量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素，以芍藥苷含量和干浸膏收率（權(quán)重系數(shù)分別為0.7和0.3）為指標(biāo)，利用L9(34)正交試驗(yàn)法優(yōu)選最佳醇提工藝條件。試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，最佳提取工藝加10 倍量的70%乙醇，煎煮3 次，每次30 min。

2.3.5 淫羊藿等水提工藝研究[5,11~13]水煎煮提取淫羊藿、黃芪、麥冬、紅花、丹參醇提藥渣和揮發(fā)油提取藥渣。以加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為考察因素，以淫羊藿苷、丹參素含量和干浸膏收率（權(quán)重系數(shù)分別為0.4、0.4和0.2）為指標(biāo)，按L9（34）進(jìn)行正交試驗(yàn)，篩選最佳水煎煮工藝條件。試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，最佳水提取工藝條件為加10 倍量的水，煎煮3次，每次60 min。

2.4 分離純化及濃縮干燥工藝研究

2.4.1 水提液純化工藝研究 以淫羊藿苷保留率、丹參素保留率及固形物減少率（權(quán)重系數(shù)分別為0.4、0.4和0.2）為指標(biāo)，擬考察水提醇沉法（55%、70%、85%乙醇 )、澄清劑吸附法(甲殼素類(lèi)澄清劑、ZTC1+1天然澄清劑)、高速離心法 （4000，8000，12000轉(zhuǎn)/分）的除雜效果，篩選最佳工藝。預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，ZTC1+1（Ⅱ型）澄清劑澄清效果效佳。

2.4.2 分離、濃縮工藝研究 依據(jù)物料的理化性質(zhì)、制劑要求及預(yù)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行分離、濃縮工藝方法及參數(shù)選擇試驗(yàn)。初步選取300目濾布濾過(guò)，減壓濃縮。

2.4.3 干燥工藝研究 綜合考慮物料的理化性質(zhì)、制劑要求及生產(chǎn)成本等因素，擬采用烘箱直接干燥法，考察干燥溫度及干燥時(shí)間等因素，優(yōu)選干燥工藝試驗(yàn)參數(shù)。初步選用烘箱在70-80℃條件下干燥72h。

2.5 制劑成型工藝研究

2.5.1 輔料篩選試驗(yàn) 擬選用酒精、糊精等?？疾焖幂o料的種類(lèi)、型號(hào)、規(guī)格、用量等。

2.5.2 半成品質(zhì)量考察 包括休止角測(cè)定、堆密度測(cè)定，吸濕率考察，臨界相對(duì)濕度考察。

2.5.3 制劑處方考察與確定試驗(yàn) 考慮臨床用藥的要求、制劑原輔料性質(zhì)、劑型特點(diǎn)等因素，初步確定制劑處方組成，明確所用輔料的種類(lèi)、型號(hào)、規(guī)格、用量等。

2.5.4 包裝材料及容器的選擇 結(jié)合休止角、堆密度測(cè)定結(jié)果和空膠囊容積情況進(jìn)行選擇。

2.6 初定制備方法

取制劑處方量，川芎、當(dāng)歸和桂枝，加8倍量水，浸泡0.5 h，水蒸氣蒸餾法提取7 h，得揮發(fā)油、水提液1和藥渣1；揮發(fā)油在40 ℃條件下超聲環(huán)境下，按β-CD：油為6:1 (g﹒mL-1)比例逐滴滴加50 %的揮發(fā)油乙醇溶液，超聲包合20 min，于冰箱中冷卻24 h，抽濾，用少量無(wú)水乙醇洗滌，至無(wú)揮發(fā)油氣味，40 ℃恒溫干燥1 h，即得包合物，備用。加12倍量80%乙醇提取丹參，提取3次，30 min/次，得醇提液1和藥渣2。加10倍量70%乙醇回流混合提取太子參、赤芍和五味子，提取3次，30 min/次，得醇提液2和藥渣（棄去）。加10倍量水煎煮提取淫羊藿、黃芪、麥冬、紅花、藥渣1和藥渣2，提取3次，1h/次，得水提液2和藥渣（棄去）；合并水提液1和水提液2，減壓濃縮至1:5（60 ℃）得濃縮液，濃縮液用70%的乙醇醇沉，濾過(guò)，將濾液與醇提液合并，減壓回收乙醇，并濃縮至1:1 (60 ℃)，得清膏，用烘箱在70~80 ℃條件下干燥72 h。收集浸膏粉末，加入揮發(fā)油包合物和約10%的糊精，混合均勻，裝入空心膠囊，得成品。

3 中試研究

3.1 中試生產(chǎn)考察

將制劑處方量擴(kuò)大10倍，按以上工藝研究所得出的最佳工藝條件，連續(xù)生產(chǎn)3批中試樣品，進(jìn)一步驗(yàn)證制備工藝。

3.2 中試樣品的質(zhì)量檢查

對(duì)中試三批樣品（編號(hào)）進(jìn)行質(zhì)量檢查，包括性狀、鑒別、裝量差異、崩解時(shí)限、水分、微生物限度。

4 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

4.1 原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

按照《中國(guó)藥典》2010年版一部藥材項(xiàng)下對(duì)處方中全部藥材進(jìn)行檢驗(yàn)，各藥應(yīng)符合相關(guān)規(guī)定。

4.2 成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

4.2.1 定性鑒別 對(duì)處方中全部藥材進(jìn)行薄層鑒別研究。

4.2.2 成品含量測(cè)定 根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[5,11,13]及預(yù)試驗(yàn)，選取丹參酮ⅡA和淫羊藿苷含量為指標(biāo)，進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定法的方法學(xué)考察（包括測(cè)定條件選擇、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備、樣品制備方法、陰性樣品干擾考察、重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性、加樣回收率等試驗(yàn)）及成品指標(biāo)成分限量確定。初步試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，丹參酮ⅡA和淫羊藿苷含量參照藥典方法進(jìn)行測(cè)定，方法穩(wěn)定可行。

4.2.3 其他 包括通則檢查和重金屬及有害元素、農(nóng)藥殘存量考察，確定成品名稱(chēng)、漢語(yǔ)拼音、處方、制法、性狀、功能與主治、用法與用量、規(guī)格、貯藏、包裝標(biāo)準(zhǔn)及輔料標(biāo)準(zhǔn)等。

5 初步穩(wěn)定性研究

按確定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，對(duì)3批中試樣品，于室溫下進(jìn)行0~3個(gè)月共4次考察（每月考核一次），包括性狀、鑒別、水分、粒度、含量、微生物限度等。

6 討論

6.1 本研究處方來(lái)源于名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方，長(zhǎng)期臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，本處方不僅能改善局部心絞痛，而且能改善腎虛現(xiàn)象，使局部作用和整體調(diào)節(jié)有機(jī)結(jié)合，從治療腎虛血瘀入手，標(biāo)本同治，不失為目前治療冠心病的新思維藥物。

6.2 劑型選擇方面，相關(guān)預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本處方片劑，在制備和臨床使用中存在吸濕性強(qiáng)，穩(wěn)定性較差，口感差等缺點(diǎn)；本處方口服液制劑，久置易發(fā)霉、變質(zhì)，影響藥液的質(zhì)量穩(wěn)定性，同時(shí)貯存、運(yùn)輸不方便；本處方濃縮丸劑，崩解困難，時(shí)間長(zhǎng)達(dá)兩個(gè)多小時(shí)才能溶散；故考慮將其制成膠囊劑。

6.3 揮發(fā)油制備工藝研究中，本研究首次引入星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法進(jìn)行優(yōu)選工藝參數(shù)，采用水蒸氣蒸餾法混合提取揮發(fā)油，并用飽和水溶液超聲法進(jìn)行β-環(huán)糊精包合，方法簡(jiǎn)便，預(yù)測(cè)性良好，可為冠心康膠囊的工業(yè)生產(chǎn)提供試驗(yàn)依據(jù)，將最大程度地保留處方中主要的揮發(fā)性有效成分。水提液純化工藝研究發(fā)現(xiàn)，ZTC1+1（Ⅱ型）澄清劑澄清效果較佳，然而干膏得率卻高達(dá)25%以上，不利于制劑，如何平衡既提高有效成分含量，又節(jié)約成本且利于制劑的成型，今后研究將進(jìn)一步深入。

6.4 含量測(cè)定供試品溶液制備中，試驗(yàn)將制得的樣品貯備液直接微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液即得，方法更為簡(jiǎn)便，且減少了試驗(yàn)結(jié)果的影響因素，結(jié)果可靠。

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