張建坤 龐國蓮 陳昊賓 羅賢勇

（云南省曲靖市第一人民醫(yī)院，云南 曲靖 655000）

大腸癌是我國常見的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率有逐年升高趨勢，且發(fā)病年齡年輕化，大腸癌的發(fā)生、發(fā)展與癌基因的激活、抑癌基因的失活、基因的突變或丟失及蛋白的過度表達(dá)等密切相關(guān)[1]。本文應(yīng)用免疫組化方法檢測和分析S-100蛋白在大腸癌中的表達(dá)，旨在探討其與大腸癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集云南省曲靖市第一人民醫(yī)院病理科2009年9月至2011年6月期間有明確病理診斷的大腸癌手術(shù)標(biāo)本46例。并收集該46例大腸正常組織標(biāo)本作為對照組。年齡32歲～70歲，中位年齡51歲。

1.2 方法

采用鏈菌素親生物素-過氧化酶法（S-P法）：石蠟切片先經(jīng)過二甲苯脫蠟，后梯度乙醇水化。再將切片置于10mmol/L檸檬酸鈉緩沖液（pH=6.0）內(nèi)，高溫高壓抗原修復(fù)2min；一抗采用1∶100稀釋的S-100兔抗人多克隆抗體（購自福州邁新生物技術(shù)有限公司）。4℃溫育過夜。其余步驟按常規(guī)免疫組化S-P法進(jìn)行，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。乙醇梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。陰性對照采用PBS液代替第一抗原，用已知陽性組織切片作陽性對照。所有對照均與實(shí)驗(yàn)標(biāo)本在相同條件下進(jìn)行免疫組化染色。

1.3 結(jié)果判定

S-100蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞核或細(xì)胞漿，呈棕黃色顆粒狀。每張切片根據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分：無色（-）為陰性；淺黃色（±）為弱陽性；黃色（+）為陽性；棕黃色（++）強(qiáng)陽性。對照組大腸正常粘膜組織亦根據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用spss 16.0 for windows對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，χ2檢驗(yàn)或作相關(guān)分析，以P＜0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 S-100蛋白在不同部位表達(dá)情況

本試驗(yàn)46例大腸癌組織中有38例S-100蛋白表達(dá)，陽性率82.61%（38/46）；46例大腸正常組織S-100蛋白均不表達(dá)，其陽性率為0.00%（0/46），大腸癌組織中S-100蛋白表達(dá)陽性率顯著高于大腸正常粘膜，二者相比具有顯著性差異（P=0.00）。

2.2 大腸癌組織中S-100蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

本實(shí)驗(yàn)18例高分化大腸癌病例中有6例S-100蛋白表達(dá)，陽性率為33.33%（6/18），28例中低分化大腸癌中有24例呈陽性，陽性率為85.71%（24/28），二者相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.67，P=0.00）；在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的20例大腸癌中，S-100蛋白表達(dá)的為8例，陽性率為40.00%（8/20），在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的26例大腸癌中，有23例S-100蛋白表達(dá)陽性，其陽性率為88.46%（23/26），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.95，P=0.00）；在臨床分期中，判定為I+II期的24例大腸癌與判定為III期的22例大腸癌組織相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.78，P=0.59）；在25例男性病例與21例女性病例中，差異無顯著性（χ2=0.12，P=0.67）；患者年齡＜51歲的19例大腸癌與患者年齡≥51歲的27例大腸癌組織相比，差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.03，P=0.98）。

由上所知，S-100蛋白表達(dá)與大腸癌的分化程度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P＜0.05），而與大腸癌的臨床分期、患者性別、年齡無相關(guān)性（P＞0.05）。

3 討 論

S-100蛋白是從牛腦中提取的一種可溶性、富含天門冬氨酸和谷氨酸的腦特異性的酸性蛋白，相對分子質(zhì)量為20000～25000，因其能溶于100%的硫酸銨溶液，所以S-100蛋白被看作神經(jīng)外胚葉腫瘤的一種很有用的抗原，與神經(jīng)生理功能有關(guān)，是一組低分子量的鈣結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白之一[2]。S-100蛋白有三種亞型，即S-100ao、S-100a、S-100b，在細(xì)胞周期過程、細(xì)胞分化、細(xì)胞骨架和膜相互作用中起作用[3]。S-100蛋白主要存在神經(jīng)組織、垂體、頸動(dòng)脈體、腎上腺髓質(zhì)、唾液腺及少數(shù)間葉組織，主要用于星形細(xì)胞少突膠質(zhì)瘤、室管膜瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)鞘瘤、惡性黑色素瘤、脂肪肉瘤的診斷與鑒別診斷。

本研究對46例大腸癌組織標(biāo)本及大腸正常組織中S-100蛋白檢測結(jié)果顯示，高分化癌組織中S-100蛋白陽性率為33.33%（6/18），中～低分化癌中陽性率為85.71%（24/28），二者相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.67，P=0.00）；在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中，S-100蛋白陽性率為40.00%（8/20），在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中其陽性率是88.46%（23/26）。二者相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.95，P=0.00），由此可見，S-100蛋白陽性表達(dá)在大腸癌組織中明顯高于在大腸正常組織中，并隨著大腸癌分化程度的降低S-100蛋白的表達(dá)逐漸升高；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中高于在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例，因此，大腸癌組織中S-100蛋白表達(dá)陽性率與分化程度、和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，而S-100蛋白表達(dá)水平與大腸癌臨床分期、患者性別、年齡、無相關(guān)性（P＞0.05）。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)對S-100蛋白在46例大腸癌組織的表達(dá)檢測分析結(jié)果顯示，S-100蛋白在低分化的大腸癌中表達(dá)強(qiáng)陽性，因此可能對大腸癌的發(fā)生、發(fā)展具有重要的作用；S-100蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌中的表達(dá)明顯，故認(rèn)為S-100蛋白的表達(dá)情況可作為判斷大腸癌預(yù)后的指標(biāo)之一。因此，S-100蛋白可作為判斷大腸癌分化程度和預(yù)后的參考指標(biāo)，尤其對大腸癌惡性演進(jìn)以及判斷預(yù)后具有重要意義，可作為新的生物標(biāo)志物及治療大腸癌浸潤轉(zhuǎn)移的潛在靶目標(biāo)。

[1]王金松,曾樹林.S100蛋白在大腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].微循環(huán)學(xué),2011,21(1):37-41.

[2]Lee GJ,Carter TE,Villagarcia MR.A major QTL conditioning salt tolerance in S-100 soybean and descendent cultivars[J].Theoretical Applied Genetics,2005,10(4):787-791.

[3]Magro G,Grasso S,Emmanuele C.Immunohistochemical distribution of S-100 protein and type IV collagen in human embryonic and fetal sympathetic neuroblasts[J].Histochemical J,1995,27(9):694-701.