齊 茜，劉曉勇，劉紅柏，張 穎，張永旺，張洪玉，彭 翔，孫大江

（1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院鱘魚繁育技術(shù)工程中心，北京 100070；2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所，哈爾濱 150070；3.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院，北京 100141）

鱘魚屬亞冷水性魚類[1-2]。我國的鱘魚養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，夏季高溫季節(jié)親魚發(fā)病率升高，保護(hù)親魚安全度夏顯得尤為重要。中草藥相對(duì)于抗生素與化學(xué)藥物，具有毒副作用小、無殘留、安全性好、不會(huì)造成環(huán)境污染等特點(diǎn)，逐漸成為預(yù)防和治療動(dòng)物疾病的理想選擇[3]。采用中草藥作為飼料添加劑增強(qiáng)鱘親魚免疫力和抗病力，最大限度地減少魚病發(fā)生，是生產(chǎn)綠色無公害水產(chǎn)品發(fā)展的需要，也是養(yǎng)殖戶為保證養(yǎng)殖效益經(jīng)常采取的措施?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)200多種中草藥具有免疫促進(jìn)作用[4]，關(guān)于中草藥促進(jìn)鱘魚機(jī)體免疫力提高的研究較多，劉紅柏等針對(duì)施氏鱘(Acipenser schrenkii)進(jìn)行多種復(fù)方及單方研究[5-8]，但此方面未見西伯利亞鱘的相關(guān)研究報(bào)道。本文基于生產(chǎn)實(shí)際，針對(duì)夏季養(yǎng)殖戶可能采取的鱘親魚疾病預(yù)防措施，以我國重要的繁殖養(yǎng)殖品種之一西伯利亞鱘（Acipenser baeri）為研究對(duì)象，初步研究常用清熱解毒類中草藥板藍(lán)根和甘草復(fù)方對(duì)西伯利亞鱘親魚血液生化指標(biāo)的影響，旨在為高溫季節(jié)鱘親魚的疾病預(yù)防提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)用中草藥來自北京鑫洋水產(chǎn)高新技術(shù)有限公司。健康非免疫狀態(tài)下的西伯利亞鱘親魚來自中國水產(chǎn)科學(xué)研究院鱘魚繁育技術(shù)工程中心，魚齡為7+齡，平均體重為9～11 kg。

1.2 方法

1.2.1 中草藥方劑及添加方式

復(fù)方中草藥由甘草和板藍(lán)根原材料微粉按照1:1的比例組成，以1%的劑量用520淀粉粘合劑添加入全價(jià)配合飼料，對(duì)照組投喂普通全價(jià)配合飼料。

1.2.2 試驗(yàn)魚的養(yǎng)殖

試驗(yàn)在生產(chǎn)條件下進(jìn)行，試驗(yàn)用池為4個(gè)半徑4 m的圓形水泥池，每組2個(gè)平行，每組120尾。養(yǎng)殖水源為河水、井水混合水，水溫25～28℃，pH 7.8。每天按魚體重的0.5%投喂，一天2次。試驗(yàn)期為24 d。

1.2.3 樣品采集

投喂24 d后，分別在對(duì)照組和試驗(yàn)組隨機(jī)挑選雌雄魚各6尾于尾動(dòng)(靜)脈處采集肝素抗凝血，4℃下以3 500 r·min-1離心20 min，取血清。將血清立即置-40℃保存。

1.2.4 生化指標(biāo)的檢測(cè)

白蛋白、溶菌酶、堿性磷酸酶、超氧化物歧化酶、丙二醛、過氧化氫酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)采用南京建成生產(chǎn)的試劑盒，總膽固醇和甘油三脂檢測(cè)采用長春回力生產(chǎn)的試劑盒。

1.2.5 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件中的單因子方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

探索建立積極有效的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究激勵(lì)機(jī)制，充分調(diào)動(dòng)和發(fā)揮藥品生產(chǎn)企業(yè)和科研機(jī)構(gòu)的積極性，有效借助各方力量、鼓勵(lì)多方投資參與，加大藥品標(biāo)準(zhǔn)的研究力度，促進(jìn)藥品標(biāo)準(zhǔn)提高和藥品質(zhì)量提升。

2 結(jié)果與分析

2.1 死亡率

試驗(yàn)期間，西伯利亞鱘親魚的死亡率為0。

2.2 中草藥對(duì)血清ALB、TG和CHOL含量影響

由表1可知，試驗(yàn)組西伯利亞鱘雌、雄親魚血清ALB、CHOL和TG較對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 中草藥對(duì)血清LSZ及AKP活性變化影響

由表2可知，試驗(yàn)組西伯利亞鱘雌、雄親魚血清溶菌酶和堿性磷酸酶較對(duì)照組顯著升高（P＜0.05），LSZ分別升高71.80%、459.28%，AKP升高62.61%、33.33%。

2.4 中草藥復(fù)方對(duì)血清MDA、SOD和CAT含量影響

由表3可知，試驗(yàn)組西伯利亞鱘雌、雄親魚血清中SOD含量較對(duì)照組稍有降低，差異不顯著；血清MDA含量較對(duì)照顯著升高（P＜0.05）；血清CAT含量較對(duì)照組顯著降低（P＜0.05）。

表1 中草藥對(duì)血清白蛋白、甘油三酯和總膽固醇含量的影響Table 1 Effects of Chinese herb on the ALB、TG and CHOL contents in serum of Acipenser baeri

表2 中草藥對(duì)血清溶菌酶和堿性磷酸酶含量的影響Table 2 Effects of Chinese herb on the LSZ and AKP contents in serum of Acipenser baeri

表3 中草藥對(duì)血清丙二醛、超氧化物歧化酶及過氧化氫酶含量的影響Table 3 Effects of Chinese herb on the MDA、SOD and CAT contents in serum of Acipenser baeri

2.5 中草藥復(fù)方對(duì)血清GOT和GPT含量的影響

結(jié)果見表4。

由表4可知，試驗(yàn)組雌、雄西伯利亞鱘親魚血清中的GOT和GPT較對(duì)照組顯著升高（P＜0.05），雄魚較對(duì)照組分別升高了144.79%、47.95%，雌魚較對(duì)照組分別提高了76.07%、18.20%。

表4 中草藥對(duì)血清谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量的影響Table 4 Effects of Chinese herb on the GOT and GPT contents in serum of Acipenser baeri

3 討論與結(jié)論

生物體內(nèi)血液生理指標(biāo)與魚體的新陳代謝、營養(yǎng)狀況以及疾病有密切關(guān)系，當(dāng)魚體受到外界因子影響而發(fā)生生理生化或病理變化時(shí)，必定會(huì)在血液生理生化指標(biāo)中反映出來[9-10]。研究表明，板藍(lán)根含有吲哚類生物堿、芥子苷類化合物等化學(xué)成分，具有抗菌、抗病毒、抗內(nèi)毒素、免疫促進(jìn)等作用，甘草含有100多種化學(xué)成份，可以調(diào)和諸藥，具有抗炎癥、抗病毒、解毒等功效[11-12]。本試驗(yàn)選取甘草和板藍(lán)根作為復(fù)方添加劑預(yù)防夏季疾病，結(jié)果顯示1%的甘草和板藍(lán)根對(duì)機(jī)體血液生化指標(biāo)具有一定的調(diào)節(jié)作用。

3.1 中草藥復(fù)方對(duì)血清免疫指標(biāo)的影響

溶菌酶在魚類的非特異性免疫中起著重要的作用，對(duì)革蘭氏陰性菌有強(qiáng)烈的殺菌作用[1]。本研究中，試驗(yàn)組的溶菌酶較對(duì)照組顯著提高，在一定程度上增強(qiáng)了機(jī)體的免疫力，這與劉紅柏等對(duì)施氏鱘[7]、梁擁軍等對(duì)寶石鱸（Scortum barcoo）[14]、周顯清等對(duì)中華鱉（Pelodiscus sinensis）[15]研究一致，中草藥成份增強(qiáng)了細(xì)胞分泌溶菌酶的能力，進(jìn)而提高了血清溶菌酶活力。堿性磷酸酶是高等動(dòng)物體內(nèi)巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志酶，在體內(nèi)直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝，是機(jī)體生長代謝，維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，維持機(jī)體健康所必需的酶，受營養(yǎng)狀況、環(huán)境變化、疾病及生長狀況的影響[16]。本研究中，試驗(yàn)組堿性磷酸酶活性較對(duì)照組升高，進(jìn)一步在一定程度說明受中草藥復(fù)方影響機(jī)體的免疫力提高。板藍(lán)根具有增強(qiáng)免疫力的作用[11]，因此本試驗(yàn)中機(jī)體免疫力的提高可能主要與板藍(lán)根有關(guān)，具體機(jī)理需要進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。

3.2 中草藥復(fù)方對(duì)血清抗氧化能力的影響

機(jī)體的抗氧化能力強(qiáng)弱與健康程度存在著密切關(guān)系。超氧化物歧化酶（SOD）能清除超氧陰離子自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷，對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化水平起至關(guān)重要作用。丙二醛（MDA）是機(jī)體被自由基氧化后的產(chǎn)物。在正常生理狀態(tài)下，機(jī)體自由基的產(chǎn)生和清除處于動(dòng)態(tài)平衡。因此，動(dòng)態(tài)檢測(cè)SOD、MDA能比較準(zhǔn)確地反映機(jī)體內(nèi)自由基的代謝狀況，對(duì)判斷魚體健康狀況具有重要價(jià)值[14]。本試驗(yàn)表明，試驗(yàn)組西伯利亞鱘親魚血清的SOD均值較對(duì)照組降低，差異不顯著，MDA較對(duì)照組升高，差異顯著，二者在一定程度反映機(jī)體抗氧化能力的下降。

CAT廣泛存在于需氧微生物和動(dòng)植物細(xì)胞中，在細(xì)胞內(nèi)主要與線粒體及過氧化物結(jié)合，是一種與D-氨基酸氧化酶等一系列需氧脫氫酶相偶聯(lián)的酶，它能將細(xì)胞代謝產(chǎn)生的毒性物質(zhì)分解為水和氧。在健康的魚體內(nèi)，當(dāng)CAT活性降低時(shí)，魚體內(nèi)自由基過多，可破壞體內(nèi)一些重要生化過程，導(dǎo)致代謝混亂[17]。本試驗(yàn)中，CAT的含量較對(duì)照組顯著降低，這和MDA含量升高的結(jié)果一致，進(jìn)一步說明機(jī)體的抗氧化能力下降。

3.3 中草藥復(fù)方對(duì)血清生化指標(biāo)的影響

血漿中白蛋白、甘油三酯、總膽固醇等的含量反應(yīng)機(jī)體營養(yǎng)和代謝狀態(tài)。有研究表明甘草具有減少甘油三酯積聚，降低膽固醇作用[11]。但是本試驗(yàn)中，甘草和板藍(lán)根復(fù)方對(duì)西伯利亞鱘親魚血漿中白蛋白、甘油三酯和總膽固醇含量的影響不顯著，一方面可能和試驗(yàn)周期及試驗(yàn)品種的生長階段有關(guān)，另一方面可能和中草藥的使用方法有關(guān)，本實(shí)驗(yàn)采用微粉直接添加，不利于有效藥物發(fā)揮作用，同時(shí)可能和鱘魚腸道較短有關(guān)，不利于有效藥物的吸收利用，具體機(jī)理需進(jìn)一步單方試驗(yàn)。

3.4 藥物副作用評(píng)價(jià)

谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）等血清中的酶類主要分布于機(jī)體的肝和腎等組織細(xì)胞，在正常情況下，血清中這些酶活性低而且含量相對(duì)穩(wěn)定，而患病魚血清中的含量則顯著高于健康魚。一般認(rèn)為，這是病魚的肝、腎等組織受到損傷的表現(xiàn)[18-21]。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組這兩種酶較對(duì)照組相比顯著升高，與劉紅柏等對(duì)大黃加甘草的復(fù)方研究結(jié)果一致[9]，說明某些中藥會(huì)對(duì)肝功能產(chǎn)生負(fù)面影響，但是具體作用機(jī)理尚需進(jìn)一步深入研究。這與吉紅等對(duì)黃芩素對(duì)鯉魚健康及生長的研究一致[22]。

綜上，中草藥并非絕對(duì)安全，其作用可能是雙向的，在增強(qiáng)免疫力的同時(shí)，也會(huì)給肝臟造成一定負(fù)擔(dān)。因此在使用中草藥時(shí)一定要慎重，以免使用不當(dāng)造成危害。本試驗(yàn)對(duì)于夏季鱘親魚疾病防控和生產(chǎn)指導(dǎo)具有重要意義。

[1] 謝忠明,孫大江,王樹京,等.鱘魚養(yǎng)殖技術(shù)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2000:258-263.

[2] 孫大江,曲秋芝,馬國軍,等.中國鱘魚養(yǎng)殖概況[J].大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào),2003,18(3)：216-227.

[3] 楊明爽.中草藥添加劑在畜牧養(yǎng)殖上的應(yīng)用[J].食品飼料添加劑信息,1994(1):10-11.

[4] 郭玉娟,陳學(xué)年.我國中草藥防治水生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物病害研究進(jìn)展[J].水產(chǎn)科學(xué),2005(4):36-40.

[5] 劉紅柏,盧彤巖,張春燕,等.黃芪對(duì)史氏鱘抗氧化能力及免疫力的影響[J].大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,21(3):231-235.

[6] 黃江,魏巍,王荻等.中草藥方劑對(duì)施氏鱘血漿和肝臟中一氧化氮、丙二醛含量及一氧化氮合酶活性的影響[J].水產(chǎn)學(xué)雜志,2009,22(3):28-31.

[7] 劉紅柏,黃江,馬愛枝等.中草藥復(fù)方添加劑對(duì)施氏鱘生長及血液生化指標(biāo)的影響[J].水產(chǎn)學(xué)雜志,2009,22(3):14-18.

[8] 張盈嬌,宋艷,曹陽,等.復(fù)方中草藥對(duì)史氏鱘血液及肝臟組織學(xué)的影響[J].飼料廣角,2011(16):38-39.

[9] 葉小芳,谷新利.中藥復(fù)方制劑免疫調(diào)節(jié)研究進(jìn)展[J].畜牧獸醫(yī)雜志,2007,26(1):28-29

[10] 劉廷,鞠玉琳,孫福亮.中草藥復(fù)方制劑連黃對(duì)動(dòng)物細(xì)胞免疫水平及血清生化指標(biāo)的影響[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2008(3):91-92.

[11] 彭愛紅.板藍(lán)根藥理活性成分及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥,2010,17(14):13-14.

[12] 王敏.甘草研究綜述[J].齊魯藥事,2005,24(10):614-616.

[13] 劉紅柏,魏巍.史氏鱘及小體鱘不同組織中溶菌酶水平的比較[J].水產(chǎn)學(xué)雜志,2007,20(1):57-60.

[14] 梁擁軍,孫向軍,孫硯勝,等.復(fù)方中草藥對(duì)寶石鱸抗氧化能力及免疫功能的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(15):7026-7029.

[15] 周顯清,牛翠娟,孫儒泳.黃芪對(duì)中華鱉免疫和抗酸應(yīng)激能力的影響[J].水生生物學(xué)報(bào),2003,27(1):110-112.

[16] 劉紅柏,張穎,白秀娟.史氏鱘及小體鱘不同組織中磷酸酶活性的比較[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2006(6):92-93.

[17] 周進(jìn),黃健,宋曉玲.免疫增強(qiáng)劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J].海洋水產(chǎn)研究,2003,24(4):70-79.

[18] 高露姣,施兆鴻,艾春香.不同脂肪源對(duì)施氏鱘幼魚血清生化指標(biāo)的影響[J].海洋漁業(yè),2005,27(40):3l9-323.

[19] Sadao S,Takafumi S,Hidetsuyo H,et a1.Response to feeding rates in common carpCyprinus carpio[J].Aquaculture,1997,151:371-377.

[20] 葛慕湘,楊培培,張文香,等.嗜水氣單胞菌對(duì)鯉魚血液指標(biāo)影響[J].河北漁業(yè),2006(1):8-10.

[21] Wang Yuan,Xiong Li,Yang Kangjian,et al.Effect of betacypermethrin on GPT and GOT activities of crucian serum[J].Agricultural Science&Technology Newsletter,2005,13:20-23.

[22] 吉紅,曹福余,余海淼.黃芩素對(duì)鯉魚健康及生長的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2008,35(4):535-539.