劉月玲 朱秋玲

廣州醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院藥劑科，廣東 廣州 510150

通常中醫(yī)將人參作為補(bǔ)氣強(qiáng)壯藥，而將三七作為活血化瘀止血藥來(lái)使用。近年來(lái)，對(duì)人參與三七的研究越來(lái)越廣，如秦鑒等[1-3]研究表明人參三七煎劑（紅參和三七比例為1∶1）對(duì)大鼠缺血再灌注心肌損傷具有保護(hù)作用，參七湯可顯著降低缺血心肌內(nèi)皮素的濃度 ；鄭穎等[4]報(bào)道人參與三七兩藥均能顯著改善急性血瘀模型動(dòng)物血液流變性及微循環(huán)，延長(zhǎng)凝血酶原時(shí)間和凝血酶凝結(jié)時(shí)間；三七對(duì)慢性炎癥有顯著抑制作用。無(wú)論是參七湯還是人參三七煎劑都少不了煎煮的工序，本實(shí)驗(yàn)是用參七粉（直徑為10 μm以下的超細(xì)粉）來(lái)研究其對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化（AS）模型家兔血脂代謝和血管內(nèi)皮功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑和藥品 膽固醇，天津市大茂化學(xué)試劑廠；豬油自煉；血清脂質(zhì)測(cè)定試劑盒（TC、TG、LDL-C 、HLD-C）由澳斯邦生物工程有限公司生產(chǎn)；ET、TXB2、6-K-PGF1α試劑盒均購(gòu)自解放軍總醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)中心放免研究所；參七粉：由生三七粉和紅參粉以1∶1混合組成，粒徑在10 μm以下占95%，由廣州市白云區(qū)藥品公司提供；血脂康（北京北大維信生物科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20081107）。高脂飼料配方[5-6]：1.5%膽固醇，5.0%豬油，93.5%基礎(chǔ)飼料。

1.1.2 動(dòng)物和儀器 健康新西蘭白兔40只，雌雄各半，體重2.0～2.5 kg，4個(gè)月齡，由廣東藥學(xué)院動(dòng)物藥理實(shí)驗(yàn)室提供。LD-R4-84C冷凍離心機(jī)（法國(guó)制造），日立717OA型全自動(dòng)生化分析儀，SN-682型放射免疫γ-計(jì)數(shù)器 （上海核輻射光電儀器有限公司），F(xiàn)T-646A微機(jī)單頭放免儀（北京核儀器儀器廠），奧林帕斯CH30光學(xué)顯微鏡。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組與造模 所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前均以普通飼料適應(yīng)性飼喂1周，排除飲食異常者，在穩(wěn)定其血脂水平及代謝狀況后，隨機(jī)分為4組，即對(duì)照組、模型組、參七粉組和血脂康組，每組10只，除對(duì)照組給予普通飼料外，其余各組每天上午均先給予高脂飼料50 g/（kg·d），待食完后晚上再補(bǔ)充普通顆粒飼料。同時(shí)，參七粉組給參七粉2.0 g/（kg·d）飼喂，血脂康組給血脂康 0.5 g/（kg·d）飼喂 （均將藥物拌入少量的高脂飼料內(nèi)食入后，再投入剩余的高脂飼料）。動(dòng)物單籠飼養(yǎng)，飲水不限，自由攝食，4組平行試驗(yàn)8周。

1.2.2 TC、TG、LDL-C、HDL-C的測(cè)定 各組試驗(yàn)動(dòng)物分別于實(shí)驗(yàn)前及實(shí)驗(yàn)第8周末，禁食（不禁水）12 h，經(jīng)耳緣靜脈取血，分離血清，用酶法測(cè)定血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）水平，采用日立717OA型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。各組血脂的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

1.2.3 TXB2、6-K-PGF1α、ET的測(cè)定 各組試驗(yàn)動(dòng)物分別于實(shí)驗(yàn)第8周末，禁食（不禁水）12 h，經(jīng)耳緣靜脈取血2.5 mL，加 2%EDTA抗凝，4℃，3000 r/min離心10 min，取血漿-20℃保存待測(cè)。 TXB2、6-K-PGF1α、ET 均用放射免疫法測(cè)定，具體測(cè)定步驟按放免試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。各指標(biāo)測(cè)定見(jiàn)表 2。

1.2.4 病理標(biāo)本的制作及主動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài)學(xué)觀察 于實(shí)驗(yàn)第8周末采血完畢后將所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以氣栓法處死。打開(kāi)胸腔，立即將主動(dòng)脈根部至髂動(dòng)脈分叉處的整條動(dòng)脈取出，剝離外膜結(jié)締組織，縱向剖開(kāi)，用生理鹽水洗去血跡，進(jìn)行大體形態(tài)觀察。取升主動(dòng)脈至主動(dòng)脈弓部組織，用10%甲醛固定后石蠟包埋，制備橫切面石蠟切片，厚度為4 μm，用蘇木精-伊紅（HE）染色，常規(guī)制作光鏡標(biāo)本，觀察主動(dòng)脈壁血管內(nèi)皮細(xì)胞組織形態(tài)學(xué)的改變。

1.3 AS斑塊判斷標(biāo)準(zhǔn)[7]

肉眼觀察為點(diǎn)狀或條紋狀黃色不隆起或微隆起于內(nèi)膜的病灶，常見(jiàn)于主動(dòng)脈后壁及其分支出口處。光鏡下病灶處的內(nèi)膜下有大量泡沫細(xì)胞聚集。泡沫細(xì)胞體積大，圓形或橢圓形，胞質(zhì)內(nèi)含有大量小空泡。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 15.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用方差分析，多組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 參七粉對(duì)血脂的影響

結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)前各組間動(dòng)物的血脂水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)后第8周末，與對(duì)照組比較，模型組、參七粉組和血脂康組血清TC、TG、LDL-C明顯高于對(duì)照組 （P<0.05或P<0.01）；與模型組比較，參七粉組和血脂康組血清TC、TG、LDL-C明顯低于模型組（P<0.05）；HDL-C各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組第8周末血脂的測(cè)定結(jié)果（，mmol/L）

表1 各組第8周末血脂的測(cè)定結(jié)果（，mmol/L）

注：與對(duì)照組比較，﹟P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05

組別 TC TG HDL-C LDL-C對(duì)照組模型組參七粉組血脂康組1.49±0.2523.10±4.55##14.30±3.35##▲13.58±3.15##▲1.16±0.313.30±0.56#1.93±0.38#▲1.75±0.35#▲0.58±0.100.48±0.120.68±0.150.50±0.110.65±0.1519.85±4.90##13.58±3.85##▲11.88±3.58##▲

2.2 參七粉對(duì) TXB2、6-K-PGF1α、ET 的影響

實(shí)驗(yàn)前各組間 TXB2、6-K-PGF1α、ET 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)后第8周末，模型組血漿ET、TXB2含量較對(duì)照組顯著升高 （P<0.05 或 P<0.01），6-K-PGF1α/TXB2值較對(duì)照組顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，參七粉組和血脂康組ET、TXB2含量明顯低于模型組 （P<0.05）；6-K-PGF1α/TXB2值則顯著高于模型組（P<0.05）；各組間6-K-PGF1α差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組第 8 周末 ET、6-K-PGF1α、TXB2的測(cè)定結(jié)果（）

表2 各組第 8 周末 ET、6-K-PGF1α、TXB2的測(cè)定結(jié)果（）

注：與對(duì)照組比較，﹟P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05

組別 ET（ng/L） 6-K-PGF1α（ng/L） TXB2（ng/L） 6-K-PGF1α/TXB2對(duì)照組模型組參七粉組血脂康組172.55±28.85347.30±35.30#255.75±30.55#▲246.85±25.45#▲113.30±12.10101.85±10.53108.68±11.75106.70±11.3088.10±8.65295.32±25.35##▲173.53±22.63#▲180.45±24.56#▲1.27±0.280.33±0.15##0.64±0.20#▲0.61±0.18#▲

2.3 主動(dòng)脈內(nèi)膜組織形態(tài)學(xué)改變

肉眼觀察：對(duì)照組主動(dòng)脈血管壁薄而有彈性，內(nèi)膜光滑，色澤正常，無(wú)脂質(zhì)條紋形成；模型組主動(dòng)脈病變最為嚴(yán)重，內(nèi)膜表面粗糙，可見(jiàn)大量點(diǎn)狀或條紋狀黃色微隆起于內(nèi)膜的脂質(zhì)斑塊，可見(jiàn)AS斑塊形成，為灰白色，相互融合成片狀，明顯隆起突向管腔，表面粗糙不平，管腔明顯狹窄；參七粉組和血脂康組表現(xiàn)為不同程度降低AS病變，斑塊減小。光鏡下觀察對(duì)照組血管內(nèi)膜平坦，結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)皮細(xì)胞清晰，胞質(zhì)中未見(jiàn)異常顆粒，肌纖維排列整齊，中膜平滑肌細(xì)胞排列規(guī)則整齊；模型組見(jiàn)粥樣硬化斑塊形成，血管內(nèi)膜有大量泡沫細(xì)胞聚集，內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整，肌纖維排列紊亂并有斷裂現(xiàn)象，局部?jī)?nèi)皮壞死脫落，表面可見(jiàn)有小火山噴口樣缺損；參七粉組和血脂康組顯示血管內(nèi)膜層的泡沫細(xì)胞比模型組少，血管內(nèi)皮細(xì)胞清晰，其間有少量膠原纖維分布，肌纖維排列整齊。見(jiàn)圖1。

3 討論

圖1 各組主動(dòng)脈內(nèi)膜組織的形態(tài)學(xué)改變

現(xiàn)已公認(rèn)高脂血癥是AS發(fā)生的重要因素之一，其中TC、LDL-C被視為致AS的危害因子?，F(xiàn)已知血清TC、TG和LDL水平與AS形成呈正相關(guān)，HDL水平與AS形成呈負(fù)相關(guān)[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，參七粉能使高脂血癥家兔的TC、TG、LDL-C明顯降低，光鏡下觀察可見(jiàn)：預(yù)防性服用參七粉能顯著減輕高脂模型家兔主動(dòng)脈血管的AS斑塊，提示參七粉能調(diào)節(jié)血脂代謝，降低血脂水平，具有防治血脂紊亂和抗AS的作用。

近年來(lái)隨著對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生物功能認(rèn)識(shí)的不斷深入，普遍認(rèn)為內(nèi)皮細(xì)胞損傷所致的內(nèi)皮功能障礙是AS形成的早期表現(xiàn)。已知血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌多種血管活性物質(zhì)，參與動(dòng)脈壁細(xì)胞生物功能的調(diào)節(jié)。其中，內(nèi)皮素（ET）是一種重要的血管內(nèi)皮損傷因子，是肽類血管收縮劑，具有強(qiáng)大的收縮血管和促進(jìn)血管平滑肌的增殖作用，參與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成[9]。血栓素（TXA2）是另一具有強(qiáng)烈刺激血管收縮和促使血小板聚集的活性物質(zhì)，并能刺激血管細(xì)胞增殖，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成。前列環(huán)素（PGI2）為強(qiáng)力的血管擴(kuò)張物，具有對(duì)抗TXA2的作用，抑制血小板聚集，在心血管疾病中具有保護(hù)作用。TXA2與PGI2呈拮抗關(guān)系，兩者維持著平衡狀態(tài)，凡傾向于血栓形成的因素均與TXA2生成增多或PGI2減少有關(guān)，二者含量變化在AS形成發(fā)展中起到重要作用[7]。TXA2與PGI2極不穩(wěn)定，在血中的半衰期很短，不易直接測(cè)得，因此目前一般是通過(guò)測(cè)定兩者的穩(wěn)定代謝產(chǎn)物TXB2、6-K-PGF1α的含量來(lái)了解TXA2與PGI2的變化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，參七粉能顯著降低高脂模型家兔血漿ET、TXB2水平，提高6-酮-PGF1α/TXB2比值，對(duì)預(yù)防AS的發(fā)生及防止體內(nèi)血栓形成起著重要作用。

綜上所述，參七粉產(chǎn)生抗AS作用的機(jī)制可能為：①降低血清TC和LDL-C水平，延緩AS斑塊的形成；②調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞生成和釋放ET及TXA2，提高6-酮-PGF1α/TXB2比值，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，防止體內(nèi)血栓形成，產(chǎn)生抗AS的作用。AS的發(fā)生機(jī)制是十分復(fù)雜的，牽涉到許多因素的相互作用和制約，對(duì)參七粉更多的藥理作用有待進(jìn)一步的研究。

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