龐 超 周俊杰 劉 瑋 梅振玉 張 敏 張麗君

目前，隨著醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展，醫(yī)療技術(shù)水平不斷提高。然而，隨著各種診斷治療手段與日俱增(如器官移植、抗腫瘤藥物、廣譜抗生素、免疫抑制劑的廣泛使用，各種介入性檢查治療、靜脈內(nèi)高營養(yǎng)及其他導(dǎo)管留置等)，與此同時，也增加了菌血癥、敗血癥等病癥的發(fā)生。菌血癥和敗血癥發(fā)病時間迅速，病死率較高。近20年來，血液感染的發(fā)生率明顯增加，Maki等[1]研究顯示，已由70年代的6%上升至目前的13%(不包括相當(dāng)一部分由厭氧菌感染所導(dǎo)致的菌血癥和敗血癥)。由于菌血癥和敗血癥是臨床上嚴重危及患者生命的疾病，病死率高達17.9%～27.8%[2-3]，而血液細菌培養(yǎng)是確立菌血癥和敗血癥診斷的重要依據(jù)，對于嚴重感染性疾病的患者能否有效的治愈，很大程度上決定于及時準確的細菌培養(yǎng)報告。而過去傳統(tǒng)的手工細菌培養(yǎng)方法，時間長(8 d甚至更長)、效率低、準確性差，遠不能適應(yīng)現(xiàn)代臨床醫(yī)療診治的需要，因此先進的全自動培養(yǎng)系統(tǒng)在醫(yī)院的使用，對之前常采用的人工細菌培養(yǎng)陽性率低、培養(yǎng)時間長及嚴重耽誤臨床冶療的現(xiàn)象得到了很大的改觀。

LABSTAR 50全自動血液細菌培養(yǎng)儀是安徽省“十五”科技攻關(guān)項目，此項目開創(chuàng)了該類產(chǎn)品填補國內(nèi)空白及可替代進口產(chǎn)品的新局面。同時，應(yīng)用了最新的科技成果，使Labstar 50的綜合性能得到了全新的提高。標(biāo)本培養(yǎng)所需時間和提高陽性率等都有了新的突破，陽性標(biāo)本在24 h即可獲得報告，陽性標(biāo)本最快發(fā)現(xiàn)時間≤6 h，極大縮短了患者的診治時間，提高病床周轉(zhuǎn)率，提高醫(yī)院的經(jīng)濟效益。

1 LABSTAR 50全自動血液細菌培養(yǎng)儀基本原理

LABSTAR 50全自動血液細菌培養(yǎng)儀采用連續(xù)熒光法和顯色法在臨床上快速檢測血液中細菌與真菌的全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)，采用連續(xù)熒光法和顯色法在臨床上快速檢測血液中細菌與真菌的全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)，其基本原理是微生物在培養(yǎng)基中消耗其中的養(yǎng)分并釋放出代謝物質(zhì)NADH、NADPH等，激發(fā)培養(yǎng)基內(nèi)含有的熒光指示劑發(fā)光，通過儀器內(nèi)的熒光探測器檢測，并經(jīng)過電腦的分析和運算得出培養(yǎng)結(jié)果，并作出相應(yīng)的分析報告。同時瓶底顯色技術(shù)的應(yīng)用更大程度上避免了標(biāo)本的假陽性和假陰性。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 標(biāo)本來源

臨床標(biāo)本菌株由安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科提供，并經(jīng)西門子 Microscan Walkaway-40全自動細菌鑒定儀鑒定確認：大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、糞腸球菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌、腦膜炎奈瑟菌、A群化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、白色念珠菌；標(biāo)準菌株：ATCC25922大腸埃希氏菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC27853銅綠假單胞菌，購買自衛(wèi)生部臨檢中心。

2.1.2 儀器

LABSTAR 50全自動血液細菌培養(yǎng)儀由山東鑫科生物科技股份有限公司生產(chǎn)，配套專用培養(yǎng)瓶(成人瓶、兒童瓶、厭氧瓶)；BACTEC 9120全自動血液細菌培養(yǎng)儀[4，9-10](美國BD公司生產(chǎn))，配套專用培養(yǎng)瓶(成人瓶、兒童瓶、厭氧瓶)用標(biāo)準菌株和已知臨床菌株按不同的濃度接種培養(yǎng)瓶比較最低檢測靈敏度、最短報警時間，并對其結(jié)果進行比較，評價LABSTAR 50全自動血培養(yǎng)儀性能及臨床適用性。

2.2 方法

2.2.1 菌液制備

(1)每種細菌均先以無菌生理鹽水，用比濁儀調(diào)制成1.0麥氏單位的菌懸液，再制成不同稀釋度(5 cfu、30 cfu)的測試樣品。同時以平皿瓊脂法進行菌落計數(shù)。

(2)按照血培養(yǎng)操作規(guī)范[5]、血培養(yǎng)的原則和規(guī)程[6]，將不同稀釋度的測試樣品1 ml與5 ml新鮮無菌羊血混合后加入待測血培養(yǎng)瓶。同時用無菌生理鹽水1 ml與5 ml新鮮無菌羊血混合后加入血培養(yǎng)瓶，作為陰性對照同時培養(yǎng)5 d；陽性瓶需轉(zhuǎn)種血平板和巧克力平板確認原始菌株[7]。

2.2.2 結(jié)果判讀

檢測最低靈敏度(最低檢測細菌數(shù))≤5 cfu；陽性報警時間符合率(在3 h內(nèi))≥90%。

3 結(jié)果

3.1 檢測最低靈敏度

接種量在10～30 cfu的菌株14種，分別以標(biāo)準瓶、兒童瓶、成人瓶測試，LABSTAR 50與BACTEC 9120均能陽性報警，符合率為100%。

接種量在1～5 cfu的菌株14種，分別以標(biāo)準瓶、兒童瓶、成人瓶測試，共接種42瓶，其中Labstar 50標(biāo)準瓶報警12例、兒童瓶報警13例、成人瓶報警13例；BACTEC 9120標(biāo)準瓶報警13例、兒童瓶報警13例、成人瓶報警12例，兩者不符合2例，符合率為95.24%?？偡下蕿?7.62%(見表1)。

表1 檢測時間的符合率

3.2 檢測時間

4 討論

各種血培養(yǎng)瓶對常見于血液的細菌均能夠培養(yǎng)出并報警；未發(fā)現(xiàn)假陽性、假陰性。多數(shù)細菌種類的最低檢測靈敏度可達1～5 cfu，與相關(guān)文獻報道的菌血癥病人血液中含菌量基本一致[8]。

部分菌株接種量≤5 cfu時不生長，且與BACTEC 9120對照的結(jié)果并不完全一致，分析原因：由于稀釋至10-8后，菌液相對濃度非常低，在菌液取樣為1 ml時，可能由于菌液不均勻和取樣異常而沒取到細菌(或細菌死亡)。

LABSTAR50陽性報警時間與BACTEC 9120對照，沒有顯著差異。

LABSTAR50全自動培養(yǎng)儀在安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科經(jīng)過與BACTEC 9120全自動血培養(yǎng)儀的性能對照試驗表明，LABSTAR50全自動血培養(yǎng)儀在主要性能方面上達到了進口同類產(chǎn)品的技術(shù)指標(biāo)，實現(xiàn)了全封閉在線自動培養(yǎng)和檢測，降低了污染率，提高了檢測陽性率，縮短了培養(yǎng)時間，具有較好的靈敏度和陽性率；培養(yǎng)瓶種類齊全(標(biāo)準瓶、兒童抗生素中和瓶、成人兒童抗生素中和瓶、厭氧瓶)能夠滿足我國臨床血液細菌培養(yǎng)對自動化快速培養(yǎng)的要求。

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