范 蕾，王偉影

(浙江省麗水市食品藥品檢驗(yàn)所，浙江 麗水 323000)

蛇膽川貝液是由蛇膽汁、平貝母、杏仁水組成的復(fù)方制劑，具有祛風(fēng)止咳、除痰散結(jié)的功效。方中的平貝母為百合科多年生草本植物平貝母 Fritiliariae ussuriensis Maxim.的干燥鱗莖，性味苦、甘，微寒，歸肺、心經(jīng)，具有清熱潤(rùn)肺、化痰止咳功效。甾體生物堿是平貝母功效的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)其含量測(cè)定的方法有比色法、滴定法等，但存在終點(diǎn)不易辨認(rèn)、靈敏度低等不足;而薄層色譜法、柱前衍生化法[1]等也有干擾因素多、樣品處理煩瑣的局限;又因甾體生物堿沒有紫外吸收，無法使用紫外檢測(cè)器測(cè)量[2]。本試驗(yàn)采用高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法，選取平貝母中貝母素甲和貝母素乙兩個(gè)指標(biāo)，同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀，自動(dòng)進(jìn)樣器，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，Agilent色譜工作站。貝母素甲(批號(hào)為110750－200305)、貝母素乙(批號(hào)為110751－200303)均來自中國(guó)藥品生物制品檢定所;蛇膽川貝液(武漢鑫瑞藥業(yè)有限公司，批號(hào)分別為20100501，20100302，20101003);乙腈、甲醇為色譜純(Merck公司)，二乙胺為分析純(杭州高精精細(xì)化工有限公司)，水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent SB C18柱(150 mm ×4.6 mm， 5 μm);流動(dòng)相:乙腈－水－ 二乙胺(70∶30∶0.03);流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃;漂移管溫度:85℃;載氣(氮?dú)?流速:2.5 L/min。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。

2.2 溶液制備

取貝母素甲、貝母素乙對(duì)照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為0.75，0.89 g/L的混合溶液，作為貯備液。精密量取貯備液制成每1 mL含貝母素甲60μg、含貝母素乙70μg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。精密取樣品25 mL，置分液漏斗中，加氨水2 mL，用氯仿提取4次，20 mL/次，提取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙庀♂屩?0 mL，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。取處方中除平貝母外中藥飲片自制空白樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):取 2.2項(xiàng)下 3種溶液，按 2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，運(yùn)行時(shí)間12 min。在此條件下，樣品中貝母素甲、貝母素乙均分離良好，空白對(duì)照無干擾。見圖1。

線性關(guān)系考察:取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，依次進(jìn)樣 1，2，5，10，15，30，40 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以lgA為縱坐標(biāo)、lgC為橫坐標(biāo)繪制曲線，回歸方程貝母素甲為 Y=0.7541 X－19.7760(r=0.9997)，貝母素乙為 Y=0.6875 X－19.3512(r=0.9996)。結(jié)果表明，貝母素甲進(jìn)樣量在 0.06～2.406μg 、貝母素乙進(jìn)樣量在 0.071 ～2.812μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn):取對(duì)照品貯備液，制成質(zhì)量濃度分別為貝母素甲187μg/mL，貝母素乙89μg/mL的混合溶液。按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果貝母素甲與貝母素乙的 RSD分別為0.38%和0.71%。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為20100501)樣品，平行取樣5份，依法測(cè)定。結(jié)果貝母素甲及貝母素乙的含量平均值分別為0.053 g/L 和 0.061 g/L，RSD 分別為 0.55%和 0.83%。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液(批號(hào)為20100501)，分別在0，5，10，20，24 h時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果貝母素甲與貝母素乙峰面積的 RSD分別為0.55%和0.29%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):取樣品(批號(hào)為20100501，含貝母素甲為0.053 g/L、貝母素乙為0.061 g/L)6份，分別精密加入對(duì)照品溶液3 mL(相當(dāng)于貝母素甲對(duì)照品561μg、貝母素乙對(duì)照品267μg)、4mL(相當(dāng)于貝母素甲對(duì)照品748μg、貝母素乙對(duì)照品356μg)、5 mL(相當(dāng)于貝母素甲對(duì)照品 935μg、貝母素乙對(duì)照品445μg)，再按2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備溶液并依法測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 貝母素甲與貝母素乙加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.5 樣品含量測(cè)定

根據(jù)上述方法，測(cè)定了3批樣品中貝母素甲與貝母素乙的含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

試驗(yàn)中，參照2005年版《中國(guó)藥典(一部)》中浙貝母含量測(cè)定項(xiàng)的流動(dòng)相乙腈－水－二乙胺(70∶30∶0.3)[3]進(jìn)行試驗(yàn)，貝母素甲和貝母素乙兩峰分離完全，供試品溶液中兩峰均分離、無干擾，故選擇此流動(dòng)相。

貝母素甲與貝母素乙均為生物堿類物質(zhì)，根據(jù)生物堿在堿性條件下易溶于有機(jī)溶劑的特點(diǎn)，在樣品提取時(shí)選用氨水將樣品調(diào)至堿性，使生物堿游離出來，再用氯仿提取，制得供試品溶液。

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器是一種新型質(zhì)量型檢測(cè)器，對(duì)于不易揮發(fā)的化合物，有無紫外吸收均可檢測(cè)。該檢測(cè)器的這一特點(diǎn)完全適用于貝母類生物堿的檢測(cè)，而且還克服了其他檢測(cè)方法靈敏度低、操作煩瑣、干擾因素多等缺點(diǎn)。2005年版《中國(guó)藥典(一部)》中沒有規(guī)定平貝母的含量測(cè)定項(xiàng)[3]。本試驗(yàn)將高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法應(yīng)用于蛇膽川貝液中平貝母所含貝母素甲與貝母素乙的測(cè)定，為產(chǎn)品質(zhì)量控制提供了試驗(yàn)依據(jù)，也為平貝母及含有平貝母的制劑中貝母素甲與貝母素乙的同時(shí)測(cè)定與研究提供了一種便捷、有效的手段。

[1]王振月，侯素云，王志林，等.不同產(chǎn)地不同物候期平貝母的貝母素乙含量測(cè)定研究[J].中藥材，2006，29(11):1135.

[2]李 萍，曾令杰，李松林.無紫外吸收的貝母總生物堿定量分析方法研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2002，37(8):614.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:65，205.