余曦明，楊勝梅，蔡明建，余望貽

（1.湖南中醫(yī)藥大學，湖南 長沙 410007；2.湖南斯奇生物制藥有限公司，湖南 長沙 410000）

卡介菌多糖核酸（BCG-Polysaccharides nucleic acid，BCG-PSN）是從卡介菌中經熱酚法提取多糖、核酸混合而制成的新型免疫調節(jié)劑，含有多糖及核酸等多種免疫活性物質。BCG-PSN注射液是目前臨床上常用的免疫調節(jié)劑，具有調節(jié)機體免疫水平，增強機體抗感染和抗過敏的能力，多應用于病毒感染性疾病、自身免疫性疾病等的輔助治療。本研究以BALB/c裸鼠及KM小鼠作為研究對象，系統(tǒng)檢測了BCG-PSN對裸鼠及正常小鼠的腹腔單核巨噬細胞吞噬功能的影響，以探討B(tài)CG-PSN對小鼠免疫功能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

BALB/c裸鼠，雄性，體質量18～22 g；KM小鼠，雄性，體質量18～22 g，年齡6～8周齡，均購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，合格證號為SCXK（湘）2009-0004。

1.2 藥物及試劑

BCG-PSN注射液（商品名：斯奇康注射液，湖南斯奇生物制藥有限公司，批號：S20100410，規(guī)格：0.5 mg/mL，以0.5 mgBCG-PSN干粉溶于1 mL生理鹽水制成；BCG-PSN主要含質量分數為75.1%的核酸，質量分數為7.76%的多糖，質量分數為0.66%的蛋白質；臨用時用生理鹽水配制成相應濃度的溶液）；注射用胸腺肽（西安迪賽生物藥業(yè)有限責任公司，產品批號：1105281-7，規(guī)格：40 mg/支）；生理鹽水（湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院）；5%雞紅細胞混懸液；1%淀粉自制。

1.3 方法

1.3.1 動物分組 將50只裸鼠按照隨機數字表法分為5組：BCG-PSN高、中、低劑量組，裸鼠陽性藥物（胸腺肽）對照組，裸鼠正常對照組，每組10只；KM小鼠，空白對照組10只。

1.3.2 給藥 BCG-PSN高、中、低劑量組：根據成人用藥量按體表面積換算成小鼠的等效劑量為中劑量（6.25 mg/kg），低劑量為中劑量的1/2倍，高劑量為中劑量的2倍；陽性對照組：予注射用胸腺肽給藥，按成人用藥量換算成小鼠的等效劑量（10 mg/kg）；裸鼠正常對照組和KM空白對照組：生理鹽水。各組用生理鹽水調整藥物濃度后均按0.5 mL/只腹腔注射，隔日1次，連續(xù)21 d。

1.3.3 指標測定 藥物對免疫缺陷的動物腹腔單核巨噬細胞吞噬功能的影響：采用半體內法，于停藥后的第1天動物腹腔注射無菌的1%淀粉2 mL，20 h后腹腔注射5%RBC雞紅細胞懸液2 mL，30 min后頸椎脫臼處死動物，輕揉腹部，然后剖開腹腔，取出腹腔洗液分別滴于兩張載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內，置37℃孵箱溫育30 min。孵畢，置生理鹽水中漂洗，以除去未貼片細胞。晾干，以甲醇固定，瑞氏染色、鏡檢，計算吞噬百分率（%）=吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數/計數的巨噬細胞數×100、吞噬指數=被吞噬的雞紅細胞總數/計數的巨噬細胞數。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 BCG-PSN對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率的影響

裸鼠正常對照組腹腔巨噬細胞對雞紅細胞吞噬百分率下降，與KM對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與裸鼠正常對照組相比，BCG-PSN高劑量組能顯著提高裸鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。結果見表1。

表1 藥物對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率的影響（±s）

表1 藥物對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率的影響（±s）

注：與KM空白對照組比較*P＜0.05；與裸鼠正常對照組比較#P＜0.01；與陽性對照組比較△P＜0.01。

BCG-PSN高劑量組 12.5 42.40±6.55#△BCG-PSN中劑量組 6.25 38.00±4.19△BCG-PSN低劑量組 3.125 35.90±4.93裸鼠陽性對照組 0.5mL 31.67±4.87裸鼠正常對照組 0.5mL 35.22±5.65*KM空白對照組 0.5mL 40.50±5.17

2.2 BCG PSN對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率的影響

裸鼠正常對照組腹腔巨噬細胞對雞紅細胞吞噬指數下降，與KM對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與裸鼠正常對照組相比，BCG-PSN高、中、低劑量組能明顯提高裸鼠腹腔巨噬細胞的吞噬指數，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。結果見表2。

表2 藥物對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬指數的影響（±s）

表2 藥物對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬指數的影響（±s）

注：與KM空白對照組比較*P＜0.05；與裸鼠正常對照組比較#P＜0.01；與陽性對照組比較△P＜0.01。

組別 給藥劑量（mg/kg）吞噬指數BCG-PSN高劑量組 12.5 0.74±0.14# △BCG-PSN中劑量組 6.25 0.76±0.12# △BCG-PSN低劑量組 3.125 0.72±0.11#裸鼠陽性對照組 0.5 0.58±0.14裸鼠正常對照組 0.5 0.53±0.08*KM空白對照組 0.5 0.64±0.09

3 討論

BCG-PSN系經熱酚法從滅活的卡介菌提取而來，主要成分包括脂多糖和核酸。關于BCG-PSN的作用機理，通常認為可能是：通過調節(jié)機體內的細胞免疫、體液免疫、刺激網狀內皮系統(tǒng)，激活單核 巨噬細胞功能，增強自然殺傷細胞功能來增強機體抗病能力；通過穩(wěn)定肥大細胞，封閉IgE功能，減少脫顆粒細胞釋放活性物質，以及抗乙酰膽堿所致的支氣管痙攣作用，達到抗過敏功能；增強體內巨噬細胞的自然細胞毒效和誘導干擾素形成，因而還具有增強抗感染和抗腫瘤細胞生長的作用。

巨噬細胞是一類參與免疫反應的細胞，在調節(jié)淋巴細胞和免疫應答過程中起著重要作用[1-2]。巨噬細胞的主要功能有：直接吞噬和殺滅多種病原微生物；加工和遞呈抗原，激活特異性免疫反應；合成和分泌多種生物活性物質，調節(jié)免疫應答[3]。巨噬細胞不僅參與機體的特異性免疫反應與非特異性免疫反應，而且還是兩種免疫反應建立相互聯(lián)系的“橋梁細胞”，并作為效應細胞起作用。單核巨噬細胞的吞噬能力是衡量機體非特異性免疫功能的標志之一，它具有吞噬、加工和處理抗原物質，并把抗原傳遞給淋巴細胞，使其產生抗體或淋巴因子，加強殺傷靶細胞的能力。其吞噬功能不僅是免疫系統(tǒng)維持自身內環(huán)境穩(wěn)定的重要手段，也是機體產生免疫應答的基礎，大多數抗原經巨噬細胞處理后，免疫原性都大大增加。

裸鼠是隨著近代醫(yī)學發(fā)展，特別是免疫學和腫瘤學研究的需要，在近十幾年中發(fā)展起來的動物模型。它是先天性胸腺缺陷的突變小鼠，是由于第Ⅶ連鎖群內裸體位點的等位基因發(fā)生純合而形成的突變小鼠新品種。裸鼠由于無胸腺，因此缺乏免疫反應，是免疫缺陷動物。本實驗以BALB/c裸鼠作為免疫抑制小鼠模型，裸鼠正常對照組腹腔巨噬細胞的吞噬百分率及吞噬指數均比KM空白對照組顯著降低，可認為裸鼠的免疫能力低于正常小鼠；而BCGPSN高劑量組能顯著提高裸鼠腹腔巨噬細胞的吞噬百分率，BCG-PSN高、中、低劑量組均能顯著提高裸鼠腹腔巨噬細胞的吞噬指數，說明BCG-PSN能夠增強裸鼠的吞噬功能，通過增強其表達提高裸鼠的免疫功能。本研究結果提示BCG-PSN有較好的免疫增強作用，其研究結果為臨床進一步用藥奠定了良好的實驗基礎。

[1]何 慧,潘育芳.甘露聚糖肽片對小鼠單核吞噬細胞吞噬功能的影響[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導報,2006,12(11):12-13.

[2]李淑蓮,付 克,劉睿姝.柴芩清肝膠囊對小鼠單核吞噬細胞吞噬功能的影響[J].中醫(yī)藥信息,2009,26(1):88.

[3]Nomura M,Kaji A,Ma W,et al.Suppression of cell transformation and induction of apoptosis by caffeic acid phenethyl ester[J].Mol Careinog,2001,1(2):83-93.