李 玲，謝 崢

（荊門(mén)市第二人民醫(yī)院，湖北 荊門(mén) 448000）

續(xù)斷又名龍豆、屬折、和尚頭、川續(xù)斷等。為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷DipsacusasperWall.exHenry的干燥根。廣泛分布于四川、湖北、云南、西藏等地。資源極為豐富。在《神農(nóng)本草經(jīng)》中被列為上品，味苦、辛、微澀，性微溫。功能為補(bǔ)肝腎、養(yǎng)筋骨、通關(guān)節(jié)、和血脈，安胎止血。生品續(xù)筋骨、通血脈力勝，多用于風(fēng)濕痹痛，跌打損傷；炒用補(bǔ)肝腎、安胎止血力強(qiáng)，多用于腎虛腰痛，崩漏胎滑諸癥?，F(xiàn)代研究已經(jīng)證明續(xù)斷中含有生物堿、皂苷類(lèi)等多種化學(xué)成分[1]。本文對(duì)續(xù)斷中總皂苷進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

UV-VIS L-7240檢測(cè)器；UV-754（上海第三分析儀器廠）;RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；AS2060B超聲儀（AUTOSCIENCE）；大孔吸附樹(shù)脂DM101（天津農(nóng)藥股份有限公司樹(shù)脂分公司）；川續(xù)斷藥材（購(gòu)自恩施）。

2 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果

2.1 總皂苷的提取

精密稱取80℃干燥后的川續(xù)斷藥材1 kg，打成粉末，用95%的乙醇回流提取3次，每次加8倍量乙醇，分別提取至沸騰后計(jì)時(shí)1.5、1、1 h，過(guò)濾，合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇并濃縮至小體積，轉(zhuǎn)入坩堝中水浴揮干，得浸膏，稱重702.7 g，比重0.98。

取6.25 g浸膏水浴揮干，稱重為1 g，蒸餾水定容至100 mL，后不再進(jìn)行任何處理，作為樣品I；另取50 g浸膏用蒸餾水定容至500 mL，取20 mL作為樣品Ⅱ；另取120 mL溶液分別用110 mL、50 mL、50 mL的水飽和正丁醇萃取3次，合并正丁醇層（上層），回收正丁醇至干，用蒸餾水定容150 mL作為樣品Ⅲ。

2.2 DM101大孔樹(shù)脂對(duì)總皂苷的吸附性能考察

2.2.1 大孔吸附樹(shù)脂的預(yù)處理 稱取20 g大孔樹(shù)脂，用10倍量無(wú)水乙醇浸泡24 h，然后用乙醇洗至洗出液∶水=1∶5無(wú)白色渾濁現(xiàn)象，再用蒸餾水洗至無(wú)醇，濕法裝柱備用。

2.2.2 大孔吸附樹(shù)脂吸濕率測(cè)定 稱取3份2 g未處理的樹(shù)脂，經(jīng)過(guò)預(yù)處理后稱重分別為2.2、2.1、2.3 g，計(jì)算得出吸濕率為10%。

2.2.3 吸附容量的測(cè)定 取1 g續(xù)斷干膏制成100 mL水溶液，準(zhǔn)確稱取已處理過(guò)的大孔樹(shù)脂6 g加入續(xù)斷水溶液中，進(jìn)行搖床，定時(shí)取樣，進(jìn)行香草醛反應(yīng)，測(cè)定水溶液中皂苷的含量。根據(jù)取樣時(shí)間和吸附量做吸附曲線，結(jié)果見(jiàn)表1、圖1。

表1 取樣時(shí)間和吸附容量

圖1 取樣時(shí)間和吸附量的吸附曲線圖

結(jié)果表明其吸附時(shí)間主要在前9 h，在24 h達(dá)到飽和。同時(shí)也可以計(jì)算出大孔樹(shù)脂對(duì)總皂苷的吸附量為55.6 mg/g。

2.2.4 大孔樹(shù)脂的用量探索 取50 mL續(xù)斷的水溶液放入已處理過(guò)的4 g大孔樹(shù)脂中搖床24 h，過(guò)濾、將濾液水浴揮干，稱重1 g，用甲醇定溶至10 mL。另取50 mL續(xù)斷的水溶液，水浴揮干，稱重1.3340 g，甲醇定容至10 mL，作為對(duì)照品。取樣品和對(duì)照品各5 uL，進(jìn)行香草醛反應(yīng)，測(cè)定其吸光度，計(jì)算得到大孔樹(shù)脂對(duì)總皂苷吸附量為60.2 mg/g，對(duì)生藥吸附量為1.007 g/g。

2.3 含量測(cè)定方法學(xué)考察

2.3.1 對(duì)照品溶液的配置 精密稱取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品2.9 mg，用甲醇溶解并定溶于5 mL容量瓶中作為對(duì)照品溶液。

2.3.2 最大吸收波長(zhǎng)的測(cè)定 分別取對(duì)照品溶液40 μL和總皂苷溶液40 μL進(jìn)行香草醛反應(yīng)顯色后于紫外掃描測(cè)定，對(duì)照品和樣品均在（532±2）nm處呈現(xiàn)最大吸收。

2.3.3 線性關(guān)系考察 分別取黃芪甲苷對(duì)照品溶液60、80、120、180、360 uL，水浴揮干溶劑，進(jìn)行香草醛反應(yīng)，于532 nm處測(cè)定吸收度，根據(jù)樣品量（x）和吸收值（Y）可得回歸方程y=15.297x－0.0517，R2=0.999。

2.3.4 精密度考察 精密吸取對(duì)照品溶液80 uL，進(jìn)行香草醛反應(yīng)，測(cè)定吸光度，并重復(fù)5次，結(jié)果表明精密度良好，RSD為0.75%。

2.3.5 顯色穩(wěn)定性的考察 取同一對(duì)照品80 uL，按項(xiàng)下操作顯色后每隔20 min測(cè)定1次吸光度，結(jié)果表明，在顯色后60～100 min之間吸收度很穩(wěn)定（RSD=1.037%），但100 min后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，吸收度逐漸上升。所以測(cè)定應(yīng)在顯色后50～100 min之間進(jìn)行。

2.4 解吸附實(shí)驗(yàn)及樣品含量測(cè)定

將樣品Ⅱ、Ⅲ分別加入已處理并填裝好的大孔樹(shù)脂柱中（濕法上樣），依次用蒸餾水、30%、50%、70%、90%乙醇洗脫至Lieberman反應(yīng)為陰性為止，收集不同濃度的乙醇洗脫液，濃縮至干，用甲醇定容。進(jìn)行香草醛反應(yīng)，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2～3。

測(cè)定結(jié)果表明Ⅱ、Ⅲ樣品的70%、90%乙醇洗脫部分基本不含三萜皂苷成分，而兩者30%、50%乙醇洗脫部分共洗脫了91.03%、96.64%的皂苷，反映了其良好的解吸附能力。計(jì)算樣品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中總?cè)圃碥盏暮?。結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明，大孔樹(shù)脂能夠很好的富集續(xù)斷中的總?cè)圃碥铡?/p>

3 討論

續(xù)斷是常用中藥，其有效部分為三萜皂苷，但除三萜皂苷外，還含有較多的糖、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，影響皂苷的測(cè)定，從樣品中除盡又比較困難。因此需要對(duì)續(xù)斷中的總皂苷進(jìn)行富集來(lái)排除其他因素的干擾。通常對(duì)于皂苷的富集采用正丁醇萃取法。由于此法的富集程度有限，作者決定探索一種更好的方法來(lái)解決該問(wèn)題。結(jié)果找到了DM101型大孔樹(shù)脂并結(jié)合正丁醇萃取來(lái)處理樣品效果很好，不僅吸附快，解吸也快，對(duì)皂苷的吸附具有很好的選擇性。

表2 樣品Ⅱ不同濃度乙醇洗脫部分總皂苷的量

表3 樣品Ⅲ不同濃度乙醇洗脫部分總皂苷的量

表4 樣品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中總?cè)圃碥盏暮?/p>

在使用樹(shù)脂的過(guò)程中，需要探索乙醇洗脫的最佳濃度。本文通過(guò)使用30%、50%、70%、90%4種不同濃度的乙醇溶液洗脫至Lieberman反應(yīng)為陰性為止，發(fā)現(xiàn)30%、50%的乙醇能洗脫掉90%以上皂苷，具有很強(qiáng)的解吸附能力，可作為總皂苷洗脫的最佳濃度。

對(duì)洗脫之后的樣品揮干甲醇定容后便可進(jìn)行含量測(cè)定。參考了文獻(xiàn)資料后對(duì)總皂苷的含量通常采用比色法測(cè)定，可以消除雜質(zhì)干擾。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性均較好。

[1]Zhong JH,Li CS,Li DD.Progress in research of the active chemical components of Cornus off i cinalis[J].Zhongguo Xinyao Zazhi(Chin J New Drugs),2001,10(11):808-812.