齊雅雯 姜歡歡

[摘要] 目的 建立高效液相色譜法測定倍氯米松尿素乳膏中丙酸倍氯米松含量的方法。 方法 色譜柱（菲羅門C18 4.6 mm×150 mm，4 μm），以甲醇-水（82∶18）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長240 nm。 結(jié)果 線性范圍（0.94～4.72）μg/mL（r = 0.999 99），高、中、低濃度的平均回收率分別為101.46%、101.35%、101.57%，RSD分別為0.29%、0.17%、0.77%。 結(jié)論 該法分離度好、快速、簡便、重現(xiàn)性好，可用于倍氯米松尿素乳膏的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 倍氯米松尿素乳膏；高效液相色譜法；丙酸倍氯米松；含量測定

[中圖分類號] R927.2[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）12-0064-02

倍氯米松尿素乳膏是衢州市皮膚病性病醫(yī)院的醫(yī)院制劑，適用于過敏性與炎癥性皮膚病和相關(guān)疾病，如濕疹、過敏性皮炎、接觸性皮炎、神經(jīng)性皮炎、扁平苔蘚、盤狀紅斑狼瘡、掌跖膿皰病、瘙癢、銀屑病等。為了更有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-5]建立了測定產(chǎn)品中倍氯米松含量的高效液相色譜法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀：島津LC-10AD泵，SPD-10A紫外檢測器，色譜柱（菲羅門C18 4.6 mm×150 mm，4 μm），N2000色譜工作站；電子天平：MettlerAE240；超聲波清洗器；紫外分光光度計：島津UV2450。

1.2 試藥

丙酸倍氯米松對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）；甲醇為色譜純，水為去離子水；空白基質(zhì)，倍氯米松尿素乳膏3批由衢州市皮膚病性病醫(yī)院提供，規(guī)格為25 g，每克中含丙酸倍氯米松0.25 mg。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

色譜柱（菲羅門C18 4.6 mm×150 mm，4 μm），以甲醇-水（82∶18）為流動相，流速為1.0 mL/min，240 nm檢測波長，20 μL進(jìn)樣量，柱溫為室溫，用外標(biāo)法定量峰面積。在此色譜條件下，出峰時間為4.9 min，理論塔板數(shù)均在2 000以上，陰性對照品無干擾，分離度達(dá)到要求。

2.2 線性關(guān)系

將105℃干燥至恒重的丙酸倍氯米松對照品約0.011 80 g精密稱取后置100 mL量瓶中，加入甲醇-水使其溶解，稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液5 mL，置100 mL量瓶中加甲醇-水至刻度，即得對照品儲備液[2-4]，精密量取此儲備液2、3、4、5、6、8、10 mL分別于50 mL量瓶中，加入甲醇-水稀釋至刻度，搖勻，依據(jù)上述色譜條件進(jìn)樣20 μL，記錄峰面積，以峰面積A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=647X+4.2×104（r = 0.999 99，n = 7），線性范圍為（0.94～4.72）μg/mL。

2.3 精密度試驗

取丙酸倍氯米松樣品，重復(fù)進(jìn)樣5次，按2.7項下樣品含量測定方法測定日內(nèi)精密度，結(jié)果RSD為0.88%（n = 5）。

2.4 重復(fù)性試驗

取同一批號樣品5份，按2.7項下含量測定方法進(jìn)行樣品測定，結(jié)果丙酸倍氯米松含量平均值為103.85%，RSD=0.54%（n = 5）。

2.5 穩(wěn)定性試驗

分別對2.3項下丙酸倍氯米松樣品進(jìn)樣20 μL，在0、2、4、6、…… 24 h按照2.7項下含量測定的條件進(jìn)行峰面積測定，計算含量，結(jié)果RSD=0.60%，說明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 回收率試驗

取空白基質(zhì)9份各0.5 g，精密稱取分別置50 mL容量瓶中，再精密稱取丙酸倍氯米松對照品0.011 80 g，置25 mL量瓶中，用流動相溶解后，繼續(xù)用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液5 mL置100 mL量瓶中，加流動相至刻度并搖勻，精密量取6、5、4 mL各3份分別加入上述9份容量瓶中，按2.7項下含量測定方法處理。

2.7 樣品含量測定

分別取樣品三批約0.5 g，精密稱取，混勻后置50 mL量瓶中，加流動相30 mL于80℃水浴中加熱溶解后置超聲波清洗器中超聲15 min，放置室溫，用流動相稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻2 h，馬上濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液。另精密稱取丙酸倍氯米松對照品0.014 62 g置于50 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再取2 mL，精密量取置200 mL容量瓶中加流動相至刻度，搖勻，作為對照品溶液。分別取上述三批樣品溶液和對照品溶液20 μL進(jìn)樣，按外標(biāo)法計算百分標(biāo)示量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 溶液配備

3.1.1 水浴熱溶丙酸倍氯米松軟膏黏性大，樣品的溶解與濾過受到影響。直接溶解、過濾時，樣品損失較大。經(jīng)試驗，通過水浴加熱加快樣品的溶解，同時，溶解后的樣品溶液經(jīng)冷卻處理后則濾過完全。結(jié)果表明，此方法操作簡便，準(zhǔn)確性高，穩(wěn)定性好，重復(fù)性好，可作為丙酸倍氯米松軟膏含量測定的方法。采用本法測定80℃水浴加熱提取時要防止流動相噴出。

3.1.2 流動相超聲丙酸倍氯米松在本品中含量很少，有效的提取方法是含量測定準(zhǔn)確的重要前提；根據(jù)丙酸倍氯米松在流動相中的良好溶解性，我們采用流動相超聲使之溶解，從而達(dá)到提取完全的目的；加樣回收試驗結(jié)果表明，本方法能有效準(zhǔn)確地測量倍氯米松尿素乳膏中丙酸倍氯米松。

3.2 測定波長

色譜掃描結(jié)果顯示在波長為240 nm處丙酸倍氯米松在流動相中有最大吸收，因此選擇測定波長為240 nm。

3.3 流動相

本實驗曾經(jīng)用甲醇、無水乙醇作為溶劑進(jìn)行提取，結(jié)果提取后測得的含量差別無幾，說明選用這兩種溶劑均可。在流動相的選擇中，曾采用甲醇-水（74∶26），但倍氯米松尿素乳膏這一復(fù)方制劑的成份復(fù)雜，丙酸倍氯米松以外的成分同樣對測定有影響，經(jīng)過優(yōu)化和摸索，結(jié)果以甲醇-水（82∶18）的分離效果較好，回收率高。最后選擇甲醇-水（82∶18）為本實驗的流動相。

3.4 優(yōu)點

本實驗采用HPLC法測定倍氯米松尿素乳膏的含量，處理簡便，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制[6]。

[參考文獻(xiàn)]

[1]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典（二部）[S]． 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2O05：79-80.

[2]饒艷輝，胡虹，周學(xué)琴. 高效液相色譜法測定血液中丙酸倍氯米松的含量[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志，2008，10（2）：41-42.

[3]陳振霆. HPLC測定無極膏中丙酸倍氯米松的含量[J]. 海峽藥學(xué)，2005，17（3）：64-65．

[4]譚生建，胡文祥. HPLC法測定箭紅氣霧劑中丙酸倍氯米松含量測定方法研究[J]. 現(xiàn)代科學(xué)儀器，2000，6：60-61.

[5]丘桂賢，宋新康. HPLC法測定丙酸倍氯米松軟膏中丙酸倍氯米松的含量[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報，2009，25（6）：545-546.

[6]堵偉鋒，李磊，馬洪怡. 高效液相色譜內(nèi)標(biāo)法測定無極膏中丙酸倍氯米松的含量[J]. 安徽醫(yī)藥，2009，13（2）：162-163.

（收稿日期：2011-10-19）