桂瑾　鐘曉鵬　張保軍

[摘要]前言：本文通過(guò)對(duì)焦作地區(qū)2012年上半年進(jìn)境皮張抽樣進(jìn)行炭疽監(jiān)測(cè)調(diào)查，分析測(cè)定那些來(lái)源國(guó)家進(jìn)境皮張中可能攜帶炭疽疫病，及炭疽疫病在進(jìn)境皮張中是否存在隱性或潛在威脅。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)：利用阿斯科利（Ascoh）實(shí)驗(yàn)，對(duì)抽取的100份試驗(yàn)樣品，涉及357585張，來(lái)源7個(gè)國(guó)家的進(jìn)境皮張進(jìn)行炭疽檢測(cè)及結(jié)果分析。討論：目前鹽潰的皮張攜帶炭疽的可能性相對(duì)較少，為進(jìn)口皮張的檢疫監(jiān)管提供了確鑿的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，在保障進(jìn)境皮張安全的同時(shí)，對(duì)保障我國(guó)A-R，身體健康也具有重要的意義。

[關(guān)鍵詞]進(jìn)境皮張檢驗(yàn)檢疫炭疽監(jiān)測(cè)

焦作地區(qū)進(jìn)境皮張深加工業(yè)的發(fā)展是伴隨著我國(guó)改革開(kāi)放的進(jìn)程而逐步發(fā)展壯大起來(lái)的。目前主要品種包括鹽漬綿羊皮、鹽漬山羊皮及生牛皮等。根據(jù)河南出入境檢驗(yàn)檢疫局統(tǒng)計(jì)，從近11年時(shí)間來(lái)全省進(jìn)口皮張數(shù)量來(lái)看，每年焦作進(jìn)口皮張數(shù)量約占全省進(jìn)口皮張總量的90-97％左右，年出口創(chuàng)匯多達(dá)幾十億美元，現(xiàn)已發(fā)展成為亞洲最大的鞋里皮生產(chǎn)加工銷售基地和羊剪絨制品集散地。

炭疽桿菌病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患急性傳染病，是一種重要的人獸共患自然疫源性疾病，現(xiàn)已列為國(guó)家二類疫病，而皮張中又極易攜帶和傳播炭疽病，因此對(duì)進(jìn)境皮張的炭疽檢疫監(jiān)測(cè)工作是十分重要和必須的。

實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)：現(xiàn)就2012年上半年焦作地區(qū)進(jìn)境皮張情況進(jìn)行檢疫監(jiān)測(cè)調(diào)查，具體調(diào)查方法及實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)步驟如下：

一、調(diào)查方法

原則是根據(jù)來(lái)源國(guó)家、地區(qū)及進(jìn)境皮張的品種等特點(diǎn)，涵蓋2012年上半年進(jìn)境皮張的所有典型皮張。從指定批次進(jìn)境皮張中，隨機(jī)選取有代表性樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

二、檢測(cè)對(duì)象

抽取的有代表性進(jìn)境皮張

三、實(shí)驗(yàn)采用標(biāo)準(zhǔn)

SN／T1700-2006《動(dòng)物皮毛炭疽Ascoli反應(yīng)操作規(guī)程》

器材：高壓消毒器、50uL～200uL單通道移液器、普通冰箱、浸樣瓶、反應(yīng)管、顯微鏡、超凈工作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、革蘭氏染色液等

四、藥品與診斷試劑

浸樣液、炭疽沉淀素標(biāo)準(zhǔn)抗原、炭疽沉淀素陽(yáng)性血清、炭疽沉淀素陰性血清

五、方法及步驟

1在進(jìn)境皮張專用原皮庫(kù)中，抽取指定批次的皮張，選擇根據(jù)國(guó)家質(zhì)檢總局及SN／T2123-2008《出入境動(dòng)物檢疫實(shí)驗(yàn)樣品采集、運(yùn)輸和保存規(guī)范》及GB／T18088-2000《出入境動(dòng)物檢疫采樣》要求，隨機(jī)選取有代表性，優(yōu)先采集有疑似病變部位，一般從每張皮的腿部或腋下剪取樣皮一塊約2cm2，裝入特制的樣品袋中，送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

2將樣品及樣品袋放入高壓滅菌器中，103kPa12l℃消毒30min。

3高壓滅菌后，將消毒后的樣品去除脂肪，每5塊被檢皮樣為一組放入浸樣瓶中，并記錄樣品編號(hào)和相對(duì)應(yīng)的浸皮瓶號(hào)。按質(zhì)量：體積=1：10的比例加入皮浸液，在室溫下浸泡16～24h后，中性濾紙過(guò)濾，其澄清液為被檢樣品。

4對(duì)照試驗(yàn)

4.1炭疽沉淀素陽(yáng)性血清對(duì)照試驗(yàn)

在一支加有100uL-200uL1：5000標(biāo)準(zhǔn)炭疽抗原的反應(yīng)管中，徐徐加入等量的炭疽沉淀素陽(yáng)性血清，抗原液面與血清接觸面必須清楚。15分鐘內(nèi)判定結(jié)果。

4．2炭疽陰性血清對(duì)照試驗(yàn)

在一支加有100uL-200uL標(biāo)準(zhǔn)炭疽抗原的反應(yīng)管中，徐徐加入等量的1：5000炭疽沉淀素陰性血清，抗原液面與血清接觸面必須清楚。15分鐘內(nèi)判定結(jié)果。

5樣品試驗(yàn)

反應(yīng)管中加入100uL-200uL的炭疽沉淀素陽(yáng)性血清，作陽(yáng)性血清對(duì)照反應(yīng)管。同時(shí)另取一反應(yīng)管加入等量的1：5000炭疽陰性血清，作陰性血清對(duì)照反應(yīng)管。

將等量被檢皮樣抗原徐徐加入到試驗(yàn)反應(yīng)管和陰性血清對(duì)照反應(yīng)管中，使之形成清晰的界面。15分鐘內(nèi)判定結(jié)果。

六、結(jié)果的判定

1炭疽沉淀素陽(yáng)性血清對(duì)照試驗(yàn)：兩界面出現(xiàn)清晰、致密的白色沉淀環(huán)。

2炭疽陰性血清對(duì)照試驗(yàn)：兩界面無(wú)白色沉淀環(huán)出現(xiàn)。

3被檢樣品試驗(yàn)

3．1陰性血清對(duì)照反應(yīng)管：應(yīng)呈陰性反應(yīng)，兩界面無(wú)白色沉淀環(huán)出現(xiàn)。

3．2對(duì)照實(shí)驗(yàn)成立后判定結(jié)果：

陰性反應(yīng)：反應(yīng)管中陽(yáng)性血清與被檢樣品浸泡液界面清晰，并且沒(méi)有出現(xiàn)白色沉淀環(huán)。

陽(yáng)性反應(yīng)：反應(yīng)管中陽(yáng)性血清與被檢樣品浸泡液界面清晰，并且出現(xiàn)致密的、明顯的白色沉淀環(huán)。

可疑反應(yīng)：反應(yīng)管中陽(yáng)性血清與被檢樣品浸泡液界面清晰，并且出現(xiàn)模糊、疏松、不明顯的白色沉淀環(huán)。

七、檢測(cè)結(jié)果分析

上半年在進(jìn)口皮張進(jìn)行檢驗(yàn)檢疫的過(guò)程中，抽取了100份試驗(yàn)樣品進(jìn)行炭疽檢測(cè)及結(jié)果分析，涉及皮張數(shù)量357585張，來(lái)源7個(gè)國(guó)家。從100批進(jìn)境皮張?zhí)烤覚z測(cè)結(jié)果來(lái)看，抽取的樣品中未發(fā)現(xiàn)其攜帶疑似炭疽病菌。

從以上圖表中可以看出，澳洲進(jìn)口皮張占抽檢樣品的86％，美國(guó)等其他國(guó)家總共占14％。作為“騎在羊背上的國(guó)家”澳大利亞來(lái)說(shuō)其畜牧業(yè)在世界上是非常有名的，畜牧業(yè)發(fā)展水平非常高，其國(guó)家的檢疫要求也非常嚴(yán)，焦作進(jìn)口澳大利亞皮張量占全國(guó)總進(jìn)口綿羊皮量的70％左右。

從以上表中可以看出，鹽漬綿羊皮占抽樣皮張批次的92％，鹽干羊皮。和鹽漬牛皮總共占8％。從皮張的腌制方法來(lái)看，鹽漬綿羊皮比鹽干羊皮的炭疽發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)較低，因炭疽桿菌繁殖體對(duì)日光、熱和常用消毒劑都很敏感，其芽孢的抵抗力很強(qiáng)，在煮沸10min后仍有部分存活，在干熱150℃

可存活30～60min，在濕熱120℃40min可被殺死。芽胞也可在動(dòng)物、尸體及其污染的環(huán)境和泥土中存活多年。新鮮腌

制的羊皮比風(fēng)干后的羊皮發(fā)生炭疽感染的機(jī)率更低。

討論：

1皮張加工業(yè)是焦作地區(qū)少數(shù)民族傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)，隨著國(guó)際經(jīng)濟(jì)的發(fā)展及國(guó)內(nèi)環(huán)保、勞動(dòng)保護(hù)等方面的加強(qiáng)，同時(shí)產(chǎn)品價(jià)格上漲的幅度相對(duì)于原皮的上漲影響較低，直接導(dǎo)致目前原皮生產(chǎn)的利潤(rùn)越來(lái)越低，目前企業(yè)為了降低生產(chǎn)成本，開(kāi)始試著從其他一些國(guó)家進(jìn)口皮張，這就加大了檢驗(yàn)檢疫執(zhí)法把關(guān)的難度，無(wú)形中也給皮革制造業(yè)帶來(lái)的許多新的風(fēng)險(xiǎn)和疫情隱患。

2炭疽桿菌在外界環(huán)境條件下易形成芽抱，抵抗力很強(qiáng)，特別在動(dòng)物皮張上長(zhǎng)期存在。若生產(chǎn)加工染疫皮張，炭疽桿菌有可能會(huì)從皮膚侵入，引起皮膚炭疽，使皮膚壞死形成焦痂潰瘍與周圍腫脹和毒血癥，亦存在引起肺炭疽或腸炭疽的可能性。

3通過(guò)對(duì)2012年上半年炭疽檢測(cè)結(jié)果分析來(lái)看，進(jìn)境皮張中攜帶炭疽病的可能比較低，但也不排除攜帶的可能性，因抽到的畢竟是少量的，不可能做到進(jìn)境皮張的逐張檢疫檢測(cè)。

4經(jīng)過(guò)鹽漬的進(jìn)境皮張一般至少鹽漬半個(gè)月以上，這也從另外一個(gè)方面降低了炭疽芽孢的存活幾率。

5通過(guò)分析進(jìn)境國(guó)家，可以看出澳大利亞的進(jìn)境皮張占70％以上，其國(guó)家對(duì)出口皮張的除害處理技術(shù)比較成熟，檢疫要求比較嚴(yán)格，且澳大利亞為無(wú)炭疽疫病國(guó)家，相對(duì)攜帶炭疽疫病的風(fēng)險(xiǎn)較低。

6對(duì)進(jìn)境皮張的炭疽監(jiān)測(cè)工作可以將檢測(cè)重點(diǎn)放在一些進(jìn)口量較少、畜牧業(yè)相對(duì)落后的、歷史上爆發(fā)過(guò)炭疽病的、我國(guó)首次進(jìn)口該國(guó)皮張的國(guó)家或地區(qū)。

7目前進(jìn)行的炭疽阿斯科利（Ascoli）實(shí)驗(yàn)只是對(duì)炭疽病進(jìn)行初篩實(shí)驗(yàn)，不排除假陰性的現(xiàn)象，因?yàn)樘烤以谄堉薪^大多數(shù)都是以芽胞的形式存在，其具有毒力強(qiáng)、高潛能、可視性低，在干燥的室溫環(huán)境中可存活20年以上等特點(diǎn)，因此給進(jìn)境皮張的炭疽檢測(cè)工作帶來(lái)了許多困難。

8在與外商簽訂貿(mào)易合同時(shí)，應(yīng)注明我國(guó)的檢驗(yàn)檢疫相關(guān)要求。