許曉霞

[摘要] 目的 對大黃中多糖成分進(jìn)行提取、純化，并對其組分及結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。 方法 采用超聲提取大黃多糖，三氯乙酸脫蛋白， Superdex 200 凝膠色譜純化多糖，采用氣相色譜分析多糖的組分，采用紫外光譜分析多糖結(jié)構(gòu)。 結(jié)果 經(jīng)分離純化，得到單糖純品SRPⅠ、SRPⅡ、SRPⅢ，其中SRPⅠ由葡萄糖、半乳糖和木糖組成，SRPⅡ由鼠李糖、葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖組成，SRPⅢ由鼠李糖、半乳糖、巖藻糖、甘露糖及果糖組成，紫外光譜分析發(fā)現(xiàn)，大黃多糖中含有β型糖苷鍵、吡喃糖環(huán)、氫鍵及羥基等結(jié)構(gòu)。 結(jié)論 大黃多糖含有多種單糖組分，分子結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜。

[關(guān)鍵詞] 大黃；多糖；組分；結(jié)構(gòu)；氣相色譜法；紫外光譜法

[中圖分類號] R284.1[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）32-0093-02

大黃是常用的中藥材，具有清濕熱、瀉下等作用，是中醫(yī)藥藥典收錄的藥物之一，現(xiàn)代藥理學(xué)的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，多糖是大黃的有效成分之一[1]，也是大黃提純、利用的主要藥效成分。本文就大黃多糖的提取、純化及組分進(jìn)行研究，為大黃多糖藥學(xué)制劑的研究提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 主要儀器與試劑

掌葉大黃（購于甘肅銓水），苯酚、硫酸、丙酮（浙江碧云天生物試劑公司），其它試劑為分析純，DL-360超聲波儀（江蘇常州醫(yī)用設(shè)備廠），電子恒溫水浴箱（上海精密儀器廠），分析天平（上海精密儀器廠），R-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海申勝生物技術(shù)有限公司）， DZG-6020 型真空干燥箱（蘇州江東精密儀器有限公司），D-1 冷凍干燥機、BS-100A 自動部分收集器（鄭州科達(dá)儀器廠），800 型離心沉淀器（金壇市城西麗華實驗儀器廠），R201 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（常州諾基儀器有限公司），Jasco FT-IR 410 光譜儀（日本）等。

1.2大黃多糖的提取及去蛋白

精密稱取烘干至恒重的大黃根莖研磨成粉末，烘干至恒重，稱取100g，置500 mL燒瓶中，采用石油醚回流脫脂2 h，2次，殘渣加水進(jìn)行超聲提取，提取參數(shù)設(shè)置35kHz，提取后濾去殘渣，置于60℃水浴鍋中水浴濃縮，活性炭（0.1%）脫色后過濾，濾液采用乙醇脫水，真空干燥，得大黃多糖。干燥后稱取10 mg，加入蒸餾水配制成0.5 mg/L大黃多糖溶液，加入1%三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)，離心過濾，上清液進(jìn)行醇析、過濾、沉淀、復(fù)溶，提取去蛋白多糖。

1.3 大黃多糖純化

精密稱取大黃多糖3 g，溶解于1000 mL蒸餾水中，配制成3 mg/mL大黃多糖溶液，上 Superdex 200 柱，參數(shù)設(shè)置：體積4 mL；移動相為超純水；流率0.5 mL/min，LKB Superfrac fraction收集器收集過濾液（5 mL），Shimadzu RID-10A 折光指數(shù)分析器進(jìn)行分析，合并多糖部分，重復(fù)上樣，在相同的出峰部分重復(fù)收集 5 次，濃縮后合并，蒸發(fā)濃縮，用乙醇沉淀，先后用無水乙醇、丙酮洗滌，真空干燥得精多糖。分離得三個純化組分，分別命名為SRPⅠ、SRPⅡ和SRPⅢ，采用苯酚-硫酸法進(jìn)行測定，顯示峰值對稱單峰曲線（圖1），得單一純品多糖。

1.4大黃多糖的氣相色譜分析

精密稱取木糖 9.4 mg，甘露糖 10.7 mg，巖藻糖9.8 mg，果糖 10.4 mg，甘露醇 11.2 mg，半乳糖10.9 mg，葡萄糖11.4 mg，鼠李糖 10.2 mg，阿拉伯糖 10.0 mg，分別加入 10 mg 鹽酸羥胺和1.0mg內(nèi)標(biāo)肌醇六乙酰酯，吡啶1 mL，震蕩混勻后90℃水浴30 min，取出冷卻后加 2.0 mL醋酸酐， 90℃水浴中?；?30 min，產(chǎn)物干燥，采用氯仿重新溶解，加樣進(jìn)行氣相色譜分析，得標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（圖2），分析條件：OV1 石英柱子（12 mm×0.30 mm），電子沖擊模式：70 eV，溫度300℃，分流比1∶45，進(jìn)樣量2 μL。氣體流速氮氣25 mL/min，精密稱取氫氣 30 mL/min，SRPⅠ、SRPⅡ和SRPⅢ單糖10 mg，按上述條件操作。

1.鼠李糖2.巖藻糖3.阿拉伯糖4.木糖5.甘露糖6.葡萄糖7.半乳糖8.甘露醇9.果糖

1.5 大黃紅外光譜分析

使用溴化鉀（1/10 mg）壓片法分析大黃多糖的紅外光譜，波長范圍（4 000～400） cm-1，觀察譜峰情況。

2 結(jié)果

2.1 大黃多糖的組分

SRPⅠ、SRPⅡ和SRPⅢ單糖分析結(jié)果顯示，SRPⅠ由葡萄糖、半乳糖和木糖組成，SRPⅡ由鼠李糖、葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖組成，SRPⅢ由鼠李糖、半乳糖、巖藻糖、甘露糖及果糖組成。

2.2 大黃多糖的分子結(jié)構(gòu)

光譜分析結(jié)果顯示（圖3），大黃多糖的吸收光譜符合多糖的一般特性，在3408 cm-1處出現(xiàn)峰值，提示有多個羥基分子的震動，存在分子間或分子內(nèi)的O-H鍵，在2926 cm-1及2339 cm-1處出現(xiàn)吸收峰值，意味著存在-CH2-和-CH3伸縮震動，（1708～1642）cm-1處以及1419 cm-1處出現(xiàn)峰值，意味著存在C-H的彎曲震動，（1384～1062）cm-1處出現(xiàn)峰值，意味著存在吡喃糖環(huán)的C-O鍵的不同形式的震動，871 cm-1處出現(xiàn)峰值，意味著存在β型糖苷鍵。

3 討論

大黃是蓼科植物的根莖部分，是臨床常用的中藥，伴隨現(xiàn)代藥理學(xué)的發(fā)展，傳統(tǒng)的中藥炮制手段漸漸不能滿足現(xiàn)代制劑發(fā)展的要求，對藥物的組分提純并進(jìn)行現(xiàn)代中藥制劑的開發(fā)是目前藥學(xué)的研究熱點，有利于提高中藥的治療效果，也有利于中藥材的開發(fā)利用?，F(xiàn)代藥物制劑的開發(fā)要求明確中藥的組分、結(jié)構(gòu)及其藥理、藥效，因此對其組分的提純及結(jié)構(gòu)的鑒定具有重要的意義。多糖是大黃的有效成分之一，具有抗氧化、調(diào)節(jié)免疫力及保肝等多種作用[2.3]，在傳統(tǒng)的治療作用中，大黃多糖也是有效的藥理成分之一。因此大黃多糖是大黃新型制劑開發(fā)的主要成分。既往的研究結(jié)果顯示[4.5]，采用水提等工藝能夠從大黃生品中提取多糖，并且能夠獲得滿意的得率，我們采用水提法結(jié)合超聲提取，從大黃多糖中提取了三種多糖單品，初步證實了大黃多糖的組分。采用氣相色譜分析及紫外光譜分析等技術(shù)手段對大黃多糖單品進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，大黃多糖中含有多種單糖成分，包括葡萄糖、半乳糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖、巖藻糖、甘露糖以及果糖等[6～8]，分子結(jié)構(gòu)鑒定初步明確了其糖苷鍵及吡喃糖環(huán)的存在，能夠為大黃多糖的開發(fā)利用提供初步的理論依據(jù)。

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（收稿日期：2011-12-23）