王曉麗 周石瓊 李波 魏曉瑞 崔奎青 石德順

摘要：應(yīng)用光鏡及ＨＥ染色等技術(shù)對(duì)體細(xì)胞克隆水牛的脂肪和皮膚組織及其細(xì)胞類(lèi)型和形態(tài)進(jìn)行了詳細(xì)的觀察，旨在為以后體細(xì)胞克隆牛的研究提供一定的理論依據(jù)，結(jié)果表明，脂肪組織外周有疏松結(jié)締組織包裹，脂肪小葉不明顯；皮膚由表皮和真皮構(gòu)成，借助皮下組織與深部的肌肉相連，局部表皮有脫落，皮膚上有毛囊分布。

關(guān)鍵詞：水牛；體細(xì)胞克隆；脂肪；皮膚

中圖分類(lèi)號(hào)：Ｑ８１３；Ｓ８２３．８＋３文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０12）06－1193-02

Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｆａｔ ａｎｄ Ｓｋｉｎ ｉｎ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｎｕｃｌｅａｒ

Ｔｒａｎｓｆｅｒｅｄ Ｂｕｆｆａｌｏ

ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｌｉ１，ＺＨＯＵ Ｓｈｉ－ｑｉｏｎｇ１，ＬＩ Ｂｏ２，ＷＥＩ Ｘｉａｏ－ｒｕｉ１，ＣＵＩ Ｋｕｉ－ｑｉｎｇ１，ＳＨＩ Ｄｅ－ｓｈｕｎ１

（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｇｕａｎｇｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００５ ，Ｃｈｉｎａ；

２． Ａｑｕａｔｉｃ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｂｕｒｅａｕ， Ｊｉｎｘｉｕ Ｙａｏ Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｃｏｕｎｔｙ，Ｌａｉｂｉｎ ５４５７００，Ｇｕａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｓｏｍａｔｉｃ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｂｕｆｆａｌｏ， ｔｈｅ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｅｌｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｄｉｐｏｓｅ ａｎｄ ｓｋｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ｓｏｍａｔｉｃ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｆｅｒｅｄ ｂｕｆｆａｌｏ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ ａｎａｔｏｍｙ， ＨＥ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｓｏｍａｔｉｃ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｂｕｆｆａｌｏ ｗｅｒｅ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｌｏｏｓｅ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ， ａｎｄ ｔｈｅ ｆａｔ ｌｏｂｕｌｅ ｗａｓ ｎｏｔ ｏｂｖｉｏｕｓ； Tｈｅ ｓｋｉｎ ｗａｓ ｃｏｍｐｏｓｅｄ of ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ａｎｄ ｄｅｒｍｉｓ， ａｎｄ ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｂｙ ｈｙｐｏｄｅｒｍｉｓ． Ｐａｒｔ ｏｆ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ｗａｓ ａｂｓｃｉｓｓｉｏｎ． Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｈａｉｒ ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｂｕｆｆａｌｏ； ｓｏｍａｔｉｃ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｆｅｒ； ｆａｔ； ｓｋｉｎ

自從１９９７年體細(xì)胞克隆羊“多莉”出世以來(lái)，體細(xì)胞克隆動(dòng)物已成為當(dāng)前科學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。目前已成功克隆出了牛、羊、豬、兔等動(dòng)物［１－４］。我國(guó)研究人員也在動(dòng)物體細(xì)胞克隆方面進(jìn)行了大量的研究。其中廣西大學(xué)動(dòng)物繁殖研究所就先后成功地獲得了體細(xì)胞克隆水牛和體細(xì)胞克隆黃牛［５］。

本試驗(yàn)對(duì)出生后不幸夭折的體細(xì)胞克隆水牛進(jìn)行剖檢，發(fā)現(xiàn)小牛犢的皮膚表面無(wú)毛附著，局部皮膚脫落；脂肪組織呈黃蠟樣干酪狀，手捏無(wú)油性，對(duì)所取皮膚和脂肪組織進(jìn)行固定，通過(guò)光鏡及ＨＥ染色等技術(shù)對(duì)體細(xì)胞克隆水牛皮膚及脂肪組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察分析，為以后體細(xì)胞克隆水牛的研究提供必要的理論支撐。

１材料與方法

脂肪及皮膚組織取材于廣西大學(xué)動(dòng)物繁殖研究所的體細(xì)胞克隆水牛。此克隆水牛出生時(shí)死亡，對(duì)其進(jìn)行解剖，取皮膚和脂肪組織，然后用７５％的酒精固定，經(jīng)脫水、透明、石蠟包埋后切片（厚度７ μｍ），再ＨＥ染色［６］，在光鏡下觀察、顯微攝影。

２結(jié)果與分析

２．１脂肪組織

解剖后發(fā)現(xiàn)，體細(xì)胞克隆水牛體內(nèi)脂肪組織呈黃蠟樣干酪狀，手捏無(wú)油性，質(zhì)感呈干肉狀。經(jīng)ＨＥ染色后，低倍鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，脂肪組織外周有疏松結(jié)締組織包裹，脂肪小葉不明顯（圖１）。

高倍鏡下，脂肪組織由大量脂肪細(xì)胞聚集而成，細(xì)胞表面有少量致密而纖細(xì)的纖維成分，基質(zhì)含量極少。在脂肪組織內(nèi)的疏松結(jié)締組織較少，有小血管存在。脂肪細(xì)胞較大且邊緣不規(guī)則，呈球形、卵圓形或多角形。細(xì)胞核不可見(jiàn)，細(xì)胞內(nèi)的脂滴呈現(xiàn)大空泡形（圖２）。

２．２皮膚

解剖后發(fā)現(xiàn)，體細(xì)胞克隆水牛皮膚呈棕黑色，表面無(wú)毛附著，局部皮膚脫落。

ＨＥ染色后，低倍鏡下發(fā)現(xiàn)，皮膚由表皮和真皮構(gòu)成，借助皮下組織與深部的肌肉相連，局部表皮有脫落，皮膚上有毛囊分布（圖３）。

高倍鏡下，表皮由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成，未發(fā)現(xiàn)角化層，基底層附著于基膜上，由一層矮柱狀的基底細(xì)胞組成。胞質(zhì)內(nèi)因有豐富的游離核糖體而呈嗜堿性，故染色較深；表皮局部與真皮層脫離。真皮位于表皮下方，分層不明顯。在真皮下方為皮下組織，由疏松結(jié)締組織和脂肪組織構(gòu)成。毛囊周?chē)窗l(fā)現(xiàn)典型結(jié)構(gòu)的皮脂腺和汗腺（圖４）。

３小結(jié)與討論

本研究發(fā)現(xiàn)，體細(xì)胞克隆水牛體內(nèi)脂肪組織外周有疏松結(jié)締組織包裹，脂肪小葉不明顯；脂肪組織由大量脂肪細(xì)胞聚集而成，細(xì)胞表面包繞著少量致密而纖細(xì)的網(wǎng)狀纖維，基質(zhì)含量極少。在脂肪組織內(nèi)的疏松結(jié)締組織較少，有小血管存在。脂肪細(xì)胞較大且邊緣不規(guī)則，呈球形、卵圓形或多角形。細(xì)胞核不可見(jiàn)，細(xì)胞內(nèi)的脂滴呈現(xiàn)大空泡形，這是由于在ＨＥ染色切片中脂滴被溶解的緣故。

皮膚由表皮和真皮組成，借助皮下組織與深部組織相連，毛、趾甲、皮脂腺、汗腺等是皮膚衍生物。在皮膚中還含有感受各種刺激的感受器，如毛、皮脂腺和汗腺等，具有感覺(jué)、調(diào)節(jié)體溫、分泌、排泄廢物以及儲(chǔ)藏營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用［７，8］。表皮由基底至表面一般可分為五層，即基底層、棘細(xì)胞層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。本研究發(fā)現(xiàn)，體細(xì)胞克隆水牛皮膚由表皮和真皮構(gòu)成，借助皮下組織與深部的肌肉相連，局部表皮有脫落，皮膚上有毛囊分布；表皮由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成，未發(fā)現(xiàn)角化層，真皮位于表皮下方，分層不明顯。在真皮下方為皮下組織，由疏松結(jié)締組織和脂肪組織構(gòu)成。毛囊周?chē)窗l(fā)現(xiàn)典型結(jié)構(gòu)的皮脂腺和汗腺。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 譚景和．動(dòng)物克隆技術(shù)研究的歷史、現(xiàn)狀與展望［Ｊ］．動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，２００３，２４（２）：１－６．

［２］ 龔國(guó)春，戴蘊(yùn)平，李寧． 利用體細(xì)胞核移植技術(shù)生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因牛［Ｊ］．科學(xué)通報(bào)，２００３，１２（４８）：２５２８－２５３３．

［３］ 李光華，葉紹輝． 動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)的研究進(jìn)展［Ｊ］． 家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，２００６，２７（４）：１－５．

［４］ 戴蘊(yùn)平，連正興，朱化彬，等．中國(guó)紅系冀南黃牛的克隆及其繁殖性能［Ｊ］．科學(xué)通訊，２００５，５０（２４）：２７６３－２７６８．

［５］ 陸鳳花．世界首例成活的體細(xì)胞克隆水牛在廣西大學(xué)誕生［Ｊ］．廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué)，２００５，２４（１）：５．

［６］ 芮菊生．組織切片技術(shù)［Ｍ］．北京：人民教育出版社，１９８０．

［7］ 沈霞芬．家畜組織學(xué)與胚胎學(xué)［Ｍ］．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，２０００．

［8］ 李曉霞，孫宏夫．高原紫外線對(duì)人體表皮朗格罕細(xì)胞影響的免疫組化研究［Ｊ］．高原醫(yī)學(xué)雜志，１９９６，６（２）：１２－１5．