包汝潑，左 鋒，陳 誠

(浙江省寧波市天衡制藥有限公司，浙江 寧波 315201)

坎地沙坦酯是一種新型血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)受體拮抗劑，可以選擇性地阻斷AngⅡ在人體組織中的作用，具有良好的降壓效果，并對(duì)心衰也有明顯治療作用，目前在抗高血壓市場(chǎng)上應(yīng)用較廣[1-2]。本試驗(yàn)采用原研廠家產(chǎn)品為參比制劑，通過篩選不同處方，考察不同制備工藝參數(shù)對(duì)雜質(zhì)及溶出特性的影響，以獲得質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品。

1 儀器和試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);GL-5C型全自動(dòng)干法制粒機(jī)(浙江明天機(jī)械有限公司);ZPS008型旋轉(zhuǎn)壓片機(jī)(上海天祥健臺(tái)制藥機(jī)械有限公司);GKZ快速整粒機(jī)(寧波市華拳機(jī)械有限公司);YPD-200C型片劑硬度儀(上海黃海藥檢儀器有限公司);RCZ-8M溶出試驗(yàn)儀(天津天大天發(fā)科技有限公司)和激光粒度儀(英國Malvern公司)?？驳厣程辊ゼ坝嘘P(guān)物質(zhì)A，B，E(寧波市天衡制藥有限公司);參比制劑必洛斯(天津武田藥品有限公司，批號(hào)為020B);乳糖(荷蘭DMV國際有限公司);玉米淀粉(法國羅蓋特公司);硬脂酸鎂(安徽山河輔料有限公司);羧甲基纖維素鈣(日本五德藥業(yè));聚乙二醇(PEG6000，三洋化成工業(yè)株式會(huì)社);檸檬酸三乙酯(蚌埠豐原醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司);甘油(浙江萬聯(lián)藥業(yè)有限公司);微晶纖維素PH-101(日本旭化成株式會(huì)社);乙腈等試劑為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2．1 含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法[3]

色譜條件:色譜柱為diamonsil ODS柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);以乙腈-水-乙酸(57∶43∶1)為流動(dòng)相A，以乙腈-水-乙酸(90∶10∶1)為流動(dòng)相B，流動(dòng)相梯度洗脫程序見表1;檢測(cè)波長254 nm;流速1.0 mL/min;柱溫30℃;進(jìn)樣量10 μL;理論板數(shù)按主峰計(jì)不低于2 000，主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度大于1.5。上述色譜條件下，各輔料對(duì)主峰檢測(cè)無干擾，主峰峰形良好，保留時(shí)間約為19.8 min。主藥質(zhì)量濃度在5.0～200.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，日間和日內(nèi)RSD均小于0.5%，回收率為98.3%～100.2%。

表1 梯度洗脫條件

樣品溶液制備與測(cè)定:精密稱取坎地沙坦酯和雜質(zhì)對(duì)照品各25 mg，置于50 mL容量瓶中，加入乙腈適量試溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，加入乙腈-水(3∶2)稀釋至刻度作為對(duì)照品溶液。另精密稱取坎地沙坦酯片細(xì)粉適量(約相當(dāng)于坎地沙坦西酯10.0 mg)，置于100 mL容量瓶中，加入乙腈-水(3∶2)適量，超聲處理 10 min，并稀釋至刻度，搖勻，12 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液作為供試品溶液，精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液10 μL，分別注入液相色譜儀。

2．2 溶出曲線測(cè)定及相似因子f2計(jì)算[4]

參考美國食品和藥物管理局溶出數(shù)據(jù)庫，用槳法進(jìn)行溶出曲線測(cè)定，具體試驗(yàn)條件，溶出介質(zhì)為0.35%吐溫20的0.05 mol/L磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)，體積為900 mL，溫度為(37±0.5)℃，轉(zhuǎn)速為 50 r/min。分別在 5，10，15，20，30，45 min 時(shí)取樣，樣品溶液經(jīng)過0.45 μm微孔濾膜過濾，移取一定體積，采用高效液相色譜法測(cè)定藥物的濃度，計(jì)算出藥物的溶出度。采用美國食品和藥物管理局推薦的相似因子f2比較自研制劑和參比制劑溶出曲線的匹配程度。相似因子f2計(jì)算公式，f2=50×log｛[1+1/n×Σ(Rt-Tt)2]-1/2×100｝。其中Rt和Tt分別表示自研制劑與參比制劑在第n個(gè)取樣點(diǎn)時(shí)的平均累積溶出度，f2大于50，可認(rèn)為是溶出匹配，f2越大，匹配程度越好。

2．3 處方篩選

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)坎地沙坦酯本身不穩(wěn)定，在壓片和貯藏過程中會(huì)分解，造成雜質(zhì)易升高，添加一些低熔點(diǎn)的油性物質(zhì)有助于其穩(wěn)定，本試驗(yàn)選擇3種油性物質(zhì)組成不同處方，具體處方見表2。按表2稱取相應(yīng)的原輔料，將油性物質(zhì)先與坎地沙坦酯及部分乳糖混勻，過45目篩，再與除羧甲基纖維素鈣和硬脂酸鎂的其他輔料混勻，用干法制粒機(jī)制粒，過30目篩整粒，外加羧甲基纖維素鈣和硬脂酸鎂混合，壓片，將片劑分別用鋁袋包裝后放置在高溫高濕條件[60℃，RH(90 ±5)%]下，于 0，5，10 d 取樣，按 2.1 項(xiàng)下檢測(cè)含量及有關(guān)物質(zhì)，統(tǒng)計(jì)含量及總雜的變化，結(jié)果見表3。從表3可見，相對(duì)不加油性物質(zhì)的處方4，PEG6000、檸檬酸三乙酯和甘油的加入可提高坎地沙坦酯的穩(wěn)定性，其中含PEG6000的處方在高溫、高濕條件下有關(guān)物質(zhì)增幅最低，含量沒有明顯下降，與原研參比制劑穩(wěn)定性相似。因此，以下處方采用含PEG6000的處方。

表2 處方組成

表3 影響因素條件下含量及雜質(zhì)變化(%)

2．4 處方工藝優(yōu)化

在預(yù)試驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)羧甲基纖維素鈣單片用量、原料粒徑和片劑硬度對(duì)溶出影響比較大，原料粒徑系采用Malvern scirocco 2000型激光子粒度儀檢測(cè)所得。采用L9(34)正交設(shè)計(jì)法進(jìn)行試驗(yàn)，考察因素及水平設(shè)置見表4，片劑處方以2.3項(xiàng)下的處方1為基礎(chǔ)，因羧甲基纖維素鈣用量調(diào)整導(dǎo)致片重不足時(shí)以乳糖填充，采用2.3項(xiàng)下工藝，制成片劑后按2.2項(xiàng)下測(cè)定溶出曲線并計(jì)算f2值。結(jié)果見表5和表6。從表6可知，因素A與因素B對(duì)片劑的溶出特性有顯著的影響，主要原因是坎地沙坦酯在水及緩沖液中溶解度比較低，原料粒徑及崩解劑用量的變化對(duì)藥物崩解溶出影響比較敏感，考慮到原料粒徑是一范圍，根據(jù)補(bǔ)充試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)原料粒徑在1 μm≤D(V，0.9)≤15 μm之間對(duì)溶出曲線相似因子f2影響不明顯。綜合表5、表6得出最終確定最佳處方工藝參數(shù)，即原料粒徑在1 μm≤D(V，0.9)≤15 μm之間，羧甲基纖維素鈣單片用量為6 mg，片劑硬度為50 N。

2．5 驗(yàn)證試驗(yàn)

按2.4項(xiàng)下篩選出的最佳處方工藝制備3批坎地沙坦酯片(批號(hào)分別為111201，111202，111203)，測(cè)定3批樣品的溶出曲線，結(jié)果見表7，根據(jù)f2計(jì)算原則取小于30 min的5個(gè)點(diǎn)的累積溶出度計(jì)算f2值，與參比制劑比較，3批自研片的f2值分別為64，62，78，根據(jù)相似性判定，自研片和參比制劑的溶出行為一致。

表4 因素水平表

表5 正交試驗(yàn)方案及結(jié)果

表6 方差分析結(jié)果

表7 自研片和參比制劑的累積溶出率(%，n=6)

3 討論

目前，口服固體制劑研發(fā)要求仿制藥與參比制劑在多種介質(zhì)中溶出行為一致，本試驗(yàn)篩選出的處方工藝在標(biāo)準(zhǔn)介質(zhì)pH=6.8磷酸鹽緩沖液溶出曲線匹配好，但仍需進(jìn)一步研究在pH=4.5醋酸緩沖液和pH=1.0鹽酸中的匹配性。

本試驗(yàn)利用影響因素試驗(yàn)篩選合適的輔料時(shí)，沒有按照《化學(xué)藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》中對(duì)溫度、濕度、光線等的要求來做，而是選擇比較劇烈的高溫、高濕條件，主要考慮初步篩選處方時(shí)這樣既能節(jié)省一定的資源，又能放大原輔料之間的相互影響，在基本確定處方工藝后，再細(xì)致地按照相關(guān)規(guī)定進(jìn)行研究。

[1]楊 綱.坎地沙坦的臨床研究[J].國外醫(yī)藥，2000，20(1):39-41.

[2]Easthope SE，Jarvis B.Candesartan cilexetil:an update of its use in essential hypertension[J].Drugs，2002，62(8):1 253-1 287.

[3]EDQM.European Pharmacopeia 7.3[M].Liguge:Aubin，2012:3 906-3 908.

[4]夏錦輝，劉昌孝.固體藥物制劑的體外溶出度的統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)分析[J].中國藥學(xué)雜志，2000，35(2):130-131.