徐玥 丁青龍 李瑩 周其

大孔樹脂法測(cè)定平肝降脂膠囊中絞股藍(lán)總皂苷的含量方法研究

徐玥 丁青龍 李瑩 周其

目的研究平肝降脂膠囊中絞股藍(lán)總皂苷的大孔樹脂吸附最佳提取工藝。方法大孔樹脂吸附法及紫外分光光度測(cè)定法。結(jié)果樣品水溶液上AB28大孔吸附樹脂，上樣量為20ml靜置30min，以3BV水洗脫后，再以2BV70%乙醇洗脫可以達(dá)到理想的結(jié)果。(樣品水溶液:取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，三批各取約12.5g，精密稱定，加蒸餾水適量使溶解，過濾，分別定容至500ml，按上述結(jié)果進(jìn)行柱分離，收集洗脫液，過濾，蒸干，用甲醇定容至10ml，即得三份供試液，備用。結(jié)論采取該方法可以很好測(cè)定平肝降脂膠囊中的絞股藍(lán)總皂苷的含量。

平肝降脂膠囊;大孔樹脂吸附法;UV法

平肝降脂膠囊為解放軍第102醫(yī)院與南京中醫(yī)藥大學(xué)海洋藥物研究所制劑研究生聯(lián)合研制的中藥復(fù)方制劑，主要由白芍、丹參、絞股藍(lán)、鱉甲等藥組成，具有清熱利膽，平肝養(yǎng)血，降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶;用于治療遷延性、慢性肝炎;我們對(duì)平肝降脂膠囊中絞股藍(lán)總皂苷進(jìn)行含量測(cè)定控制，實(shí)驗(yàn)及結(jié)果如下。

1 實(shí)驗(yàn)方法［1-3］

1.1 儀器、材料 752型紫外可見分光光度計(jì)(上海儀器廠);10萬分之一電子天平(上海儀器廠);恒溫烘箱(沈陽利港凈化設(shè)備廠)。平肝降脂膠囊(解放軍第102醫(yī)院制劑中心，批號(hào) 070622、070702、070703);對(duì)照品人參皂苷 Rb1(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110704-200217);大孔吸附樹脂AB28(天津南開大學(xué)化工廠);甲醇、乙醇、正丁醇、乙醚、高氯酸、香草醛等均為分析純。

1.2 對(duì)照品試液的配制 精密稱取人參皂苷Rb1對(duì)照品2.04mg，加甲醇制成每1ml含人參皂苷Rb11.02mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

1.3 測(cè)定波長(zhǎng)的確定 精密吸取供試液10μl，人參總皂苷對(duì)照品溶液50μl(1.02mg/m l)，分別置具塞試管中，在60℃水浴中蒸干，加5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，密塞，于60℃水浴中加熱15min，取出立即用冰水冷卻，加冰醋酸5ml，搖勻，于400～800nm波長(zhǎng)處掃描測(cè)定吸收度，結(jié)果均在550nm處有最大吸收波長(zhǎng)，故選擇550nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

1.4 空白干擾試驗(yàn) 精密吸取甲醇液60μl，置具塞試管中，在60℃水浴中蒸干，加5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，密塞，于60℃水浴中加熱15min，取出立即用冰水冷卻，加冰醋酸5m l，搖勻，用以上試劑為空白在550nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，結(jié)果顯示陰性無干擾，圖譜見附錄。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取人參皂苷Rb1對(duì)照品(1.02mg/ml)50、100、200、300、400、500μl置具塞試管中，操作方法同“三”步驟，于550nm處測(cè)定各A值，結(jié)果見表1。

表1 吸光度與對(duì)照品含量關(guān)系

以對(duì)照品含量為橫坐標(biāo)，A值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線如下:

圖1 人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)曲線

2 結(jié)果

人參皂苷Rb1對(duì)照品含量在51～510μg間與吸光度成線性關(guān)系，計(jì)算回歸方程為:A=0.0025C-0.0016;r=0.9998。

2.1 精密度試驗(yàn) 取同一份對(duì)照品5份，分別在550nm處測(cè)其吸光度，結(jié)果RSD為1.12%，儀器精密度良好，數(shù)據(jù)見表2。

表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論:儀器精密度良好。

3 工藝參數(shù)的考察和優(yōu)化［1，2］

3.1 大孔吸附樹脂的選擇及前處理 參考相關(guān)文獻(xiàn)［25］本實(shí)驗(yàn)選用AB28型大孔吸附樹脂，以乙醇濕法裝柱，繼而用95%乙醇洗脫，不時(shí)檢測(cè)流出的乙醇，當(dāng)流出的乙醇與水(1∶1)混合不呈白色混濁即可，然后用大量的蒸餾水洗至無醇味，稱取樹脂時(shí)以樹脂預(yù)處理后的質(zhì)量(g)為單位備用。

3.2 上柱液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物(批號(hào):070622)，研細(xì)，取約12.5g，精密稱定，加蒸餾水適量使溶解，過濾，定容至500ml。

3.3 洗脫溶酶的確定 考察不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇洗脫對(duì)絞股藍(lán)總皂苷提取效果的影響。將絞股藍(lán)總皂苷提取液通過樹脂柱(2cm×10cm)。洗脫時(shí)分別用4BV的20%、40%、60%、70%、80%、95%及無水乙醇洗脫皂苷類成分，將洗脫液分別蒸干，用甲醇溶解并定容，分別測(cè)定洗脫液中絞股藍(lán)總皂苷的含量。結(jié)果見圖2。

圖2 洗脫溶酶的考察結(jié)果

由以上結(jié)果可知，隨著乙醇含量的提高，皂苷的含量相應(yīng)的提高。但是，70%、80%、95%、無水乙醇的差別不是很大，再?gòu)慕?jīng)濟(jì)角度考慮，選擇70%醇作為洗脫溶劑。

3.4 70 %乙醇洗脫量的確定 將絞股藍(lán)提取液約15ml通過樹脂柱(2cm×10cm)。靜置30min后，先用3BV蒸餾水洗至流出液Molish反應(yīng)呈陰性，再用4BV70%乙醇依次洗脫，洗脫液流速1ml/min，以1BV為1份，共收集4份，按上述高氯酸-香草醛顯色方法測(cè)定絞股藍(lán)總皂苷的含量。結(jié)果見表3。

表3 不同用量70%乙醇洗脫后皂苷的含量

結(jié)果顯示，2BV洗脫溶媒絞股藍(lán)總皂苷的累計(jì)百分含量達(dá)96%?；鞠幢M，故確定洗脫溶媒為20ml。

3.5 最佳上柱量的確定 分別吸取絞股藍(lán)總皂苷提取液5、8、12、15、20、25、30m l上大孔吸附樹脂柱(2cm ×10cm)，過柱流出液重吸附3次，且靜置30min，依次用3BV蒸餾水、2BV70%乙醇溶液梯度洗脫，收集70%乙醇洗脫液，按上述高氯酸-香草醛顯色方法測(cè)定絞股藍(lán)總皂苷的含量。結(jié)果顯示，20ml上柱量為飽和上柱量，超過20ml即超過了樹脂的吸附容量，因此，20m l為最佳上柱量。

3.6 最佳吸附時(shí)間的確定 分別吸取絞股藍(lán)總皂苷提取液20ml上大孔吸附樹脂柱(2cm×10cm)，過柱流出液重吸附3次，分別靜置 5、15、30、60min，依次用 3BV 蒸餾水、2BV70%乙醇溶液梯度洗脫，收集70%乙醇洗脫液，按上述高氯酸-香草醛顯色方法測(cè)定絞股藍(lán)總皂苷的含量。結(jié)果顯示，靜置30min后洗脫最佳。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

樣品水溶液上AB28大孔吸附樹脂，上樣量為20m l靜置30min，以3BV水洗脫后，再以2BV70%乙醇洗脫可以達(dá)到理想的結(jié)果。

按上述試驗(yàn)結(jié)論，取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，三批各取約12.5g，精密稱定，加蒸餾水適量使溶解，過濾，分別定容至500ml，按上述結(jié)果進(jìn)行柱分離，收集洗脫液，過濾，蒸干，用甲醇定容至10m l，即得三份供試液，備用。

［1］ 林霞，郭偉．大孔吸附樹脂在天然藥物皂苷成分研究中的應(yīng)用．衛(wèi)生職業(yè)教育，2006，19(3):79-80.

［2］ 田其學(xué)，唐正平．絞股藍(lán)口服液中絞股藍(lán)總皂苷的含量測(cè)定．湖南中醫(yī)雜志，17(3):52-53．

［3］ 宋小妹．超聲法提取絞股藍(lán)總皂苷的工藝研究．中成藥，1998，20(5):45．

215000 蘇州市中醫(yī)醫(yī)院(徐玥);南京中醫(yī)藥大學(xué)(丁青龍 李瑩 周其)