李文兵，胡昌江*，吳珊珊，高源，龍?zhí)m艷，鐘振東

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川成都611137;2.四川省人民醫(yī)院實驗動物研究所，四川成都610031)

益智仁為姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果實，本草文獻(xiàn)始見于唐·陳藏器《本草拾遺》。生品辛溫而燥，主要歸脾經(jīng)，以溫脾止瀉、收攝涎唾力勝;鹽炙后可緩和辛燥之性，以溫腎固精縮尿為主，如《修事指南》指出:“益智仁鹽炒，止小便頻數(shù)”。中醫(yī)臨床上益智仁常作為君藥與烏藥、山藥配伍組成縮泉丸，用于治療下元虛冷，小便頻數(shù)，小兒遺尿等癥。課題組前期采用小鼠水負(fù)荷多尿模型已證明益智仁鹽炙后縮尿作用增強(qiáng)，且其物質(zhì)基礎(chǔ)是“石油醚部位+鹽”。本實驗比較益智仁鹽炙前后有效部位對腺嘌呤致腎陽虛多尿模型溫腎縮尿影響，擬從尿量、臟器指數(shù)、病理改變?nèi)齻€方面進(jìn)行研究，初步探討其作用機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實驗動物SD大鼠，雄性，體質(zhì)量180～220 g，清潔級，由四川達(dá)碩動物實驗中心提供。實驗動物生產(chǎn)許可證號:SCXK(川)2008-24。

1.2 藥物與試劑益智仁藥材產(chǎn)地為海南瓊中，經(jīng)本校生藥教研室盧先明教授鑒定確認(rèn)為姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果實，鹽炙益智仁按篩選出的最佳工藝條件制得［1］。益智仁石油醚部位制備方法為8倍量95%乙醇提取3次，每次1 h，減壓回收乙醇，濃縮液用石油醚(60～90℃)萃取至上層無色，所得石油醚部位減壓回收后用吐溫80配成相應(yīng)給藥濃度?？s泉丸(廣東華天寶藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號:1005101)，腺嘌呤(成都貝斯特試劑有限公司，批號:C2000-1360)。

1.3 儀器切片機(jī)(徠卡—1015，德國);TSJ—Q型全自動封閉式組織脫水機(jī);BMJ—Ⅲ型包埋機(jī);PHY—Ⅲ型病理組織漂烘儀(常州市中威醫(yī)療儀器有限公司);顯微鏡Motic BA400等;圖像分析軟件Motic Images Advanced。

1.4 分組及給藥取SD大鼠50只，隨機(jī)分為正常組、模型組、縮泉丸組、生品組、鹽炙品組，每組10只動物。除正常組外，其余各組大鼠均按腺嘌呤200 mg/kg劑量灌胃1個月，從造模后2周即實驗第3周開始，連續(xù)灌胃給藥4周，縮泉丸組給藥劑量為1.5 g/kg，生品、鹽炙品組劑量為成人日服劑量60倍即9 g生藥/kg［2］。實驗6周后，測24 h尿量后，處死，分別取腎上腺、腎臟、脾臟、胸腺稱定質(zhì)量，計算臟器指數(shù)。并將右腎于10%福爾馬林中固定。

2 結(jié)果

2.1 對尿量的影響與模型組相比，縮泉丸組、生品組和鹽炙品組大鼠24 h尿量均降低，具有顯著性差異(P＜0.05)，表明益智仁石油醚部位對腺嘌呤致腎陽虛多尿大鼠有縮尿作用，結(jié)果見表1。

表1 對腎陽虛多尿模型大鼠尿量影響(±s，n=8)Tab.1 Effects of urine volume on the kidneys of rats with the polyuria model of yang-deficiency(±s，n=8)

表1 對腎陽虛多尿模型大鼠尿量影響(±s，n=8)Tab.1 Effects of urine volume on the kidneys of rats with the polyuria model of yang-deficiency(±s，n=8)

注:與正常組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，▲P＜0.05。

/mL正常組組別劑量/(g·kg－1)尿量20.81±4.10模型組－31.71±4.60＊＊縮泉丸1.523.95±3.96▲生品組924.61±4.43▲鹽炙組924.23±4.68－▲

2.2 對臟器指數(shù)的影響與模型組相比，各給藥組腎上腺指數(shù)均降低，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。縮泉丸組和鹽炙品組腎臟指數(shù)與模型組相比具有極顯著性差異(P＜0.01)，生品組具有顯著性差異(P＜0.05)。脾臟指數(shù)與模型組比較，縮泉丸組、生品和鹽炙品組均具極顯著性差異(P＜0.01)。胸腺指數(shù)與模型組相比，各組均具極顯著性差異(P＜0.01)。表明益智仁石油醚部位對腎陽虛多尿大鼠腎臟、脾臟、胸腺具有保護(hù)作用，且對腎臟保護(hù)作用以鹽炙品組最佳，結(jié)果見表2。

表2 對腎陽虛多尿模型大鼠臟器指數(shù)影響±s，n=8)Tab.2 Effects of organ index on the kidneys of rats with the polyuria model of yang-deficiency±s，n=8)

表2 對腎陽虛多尿模型大鼠臟器指數(shù)影響±s，n=8)Tab.2 Effects of organ index on the kidneys of rats with the polyuria model of yang-deficiency±s，n=8)

注:與正常組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;▲P＜0.05，與模型組比較，▲▲P＜0.01。

組別腎上腺/‰腎臟/‰脾臟/‰胸腺/‰正常組0.111 5±0.022 85.07±0.262.29±0.211.02±0.19模型組0.232 7±0.051 6＊＊20.98±3.10＊＊1.66±0.26*0.42±0.10＊＊縮泉丸0.184 7±0.025 816.03±1.92▲▲2.66±0.33▲▲0.93±0.18▲▲生品組0.195 8±0.045 816.26±2.77▲2.50±0.55▲▲0.88±0.14▲▲鹽炙組0.167 5±0.037 515.67±1.97▲▲2.49±0.24▲▲0.83±0.21▲▲

2.3 對腎臟病理變化的影響

2.3.1 肉眼觀察正常組大鼠腎臟表面光滑、顏色鮮紅，質(zhì)地柔軟，大小適中;模型組大鼠腎臟表面凹凸不平，顏色灰白，質(zhì)地較硬，體積較正常組相比明顯增大;各給藥組腎臟體積較模型小、色澤、外觀明顯改善。

2.3.2 光鏡觀察正常組大鼠腎組織皮、髓質(zhì)分界清楚，腎小球、腎小管、腎間質(zhì)均無異常改變。模型組大鼠腎臟出現(xiàn)(1)腎小球病變:腎小球呈分葉狀，約2/3發(fā)生萎縮或代償性肥大，球囊壁毛細(xì)血管基底膜輕度增厚，系膜細(xì)胞增多。(2)腎小管病變:腎小管可見咖啡色腺嘌呤結(jié)晶，部分腎小管有萎縮變小或擴(kuò)張，擴(kuò)張的腎小管內(nèi)偶見蛋白管型或顆粒管型。多數(shù)腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生水腫，退變線粒體腫脹。水腫明顯的上皮細(xì)胞繼而發(fā)生壞死，或脫落掉入管腔內(nèi)形成細(xì)胞管壁。(3)腎間質(zhì)病變:腎間質(zhì)內(nèi)纖維組織明顯增生，伴淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞浸潤，甚至形成淋巴濾泡狀結(jié)構(gòu)。少數(shù)小動脈壁增厚，單核細(xì)胞內(nèi)亦可見咖啡色晶狀結(jié)晶。縮泉丸和益智仁鹽炙前后與模型組相比均有不同程度的改變，但對腎小管的病理改善作用以鹽炙品為佳，見圖1。

圖1 腎臟組織病理光鏡圖(HE，×200)Fig.1 Pictures of renal pathological(HE，×200)

3 討論

3.1 腺嘌呤致大鼠腎陽虛是比較公認(rèn)動物模型，模型表現(xiàn)符合中醫(yī)腎陽虛典型證候，且造模成功后具有明顯尿量增加，是研究益智仁溫腎縮尿作用的理想模型。但該模型是通過對腎臟的直接毒性作用，而出現(xiàn)類似腎陽虛的癥候表現(xiàn)［3］，且隨著病程的進(jìn)展，腎單位大量喪失，導(dǎo)致腎功能衰竭［4-6］。選用該模型研究時造模劑量和時間是關(guān)鍵，而目前對于該模型的文獻(xiàn)報道方法不盡相同［7-12］。因此，前期對造模劑量和時間進(jìn)行了預(yù)試，結(jié)果表明腺嘌呤劑量在200 mg/kg灌胃4周效果較為滿意。

3.2 實驗結(jié)果表明，益智仁對腎陽虛多尿模型大鼠腎臟、脾臟、胸腺指數(shù)均有顯著改善，但對腎臟作用鹽炙品較生品明顯增強(qiáng);對模型大鼠腎小球、腎小管和腎間質(zhì)病變與模型組相比，生品和鹽炙品均有明顯改善作用，但在電鏡下觀察，鹽炙品對腎小管壞死或萎縮、代償擴(kuò)張及上皮細(xì)胞水腫改善作用較生品強(qiáng)，這與益智仁鹽炙入腎，溫腎縮尿作用增強(qiáng)的傳統(tǒng)認(rèn)識一致，且進(jìn)一步驗證了益智仁溫腎縮尿物質(zhì)基礎(chǔ)是“石油醚部位+食鹽”的正確性。

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