王定貴

1 檢驗(yàn)環(huán)境產(chǎn)生的影響

微生物限度檢查必須在一個(gè)單獨(dú)的潔凈度非常高的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)才能進(jìn)行，并且實(shí)驗(yàn)室還必須配置單獨(dú)的空氣凈化系統(tǒng)。其潔凈度應(yīng)大于等于10 000級(jí)，要求局部潔凈度達(dá)到100級(jí)，下水道不能安裝在操作間內(nèi)。每次操作之前以及操作結(jié)束都必須用苯扎溴銨溶液(濃度為0.1%)或別的消毒液操作臺(tái)以及會(huì)受到污染的死角進(jìn)行擦拭，再開(kāi)啟層流凈化裝置。此外，在緩沖間必須配備洗手盆、無(wú)菌衣、口罩、帽以及鞋套等保護(hù)用品。同時(shí)在操作臺(tái)上配備藥物天平、火柴、乙醇燈以及橡皮乳頭等。確保潔凈實(shí)驗(yàn)室溫度維持在18℃～26℃之間，室內(nèi)的相對(duì)濕度應(yīng)保持在40% ～60%之間。必須注意的是，檢驗(yàn)所使用的陽(yáng)性菌操作必須在單獨(dú)的陽(yáng)性菌實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，嚴(yán)禁與供試品檢驗(yàn)共同使用一個(gè)潔凈實(shí)驗(yàn)室［1］。

2 檢驗(yàn)人員自身的影響

2.1 缺乏無(wú)菌方面的知識(shí)。大部分的藥品檢驗(yàn)員覺(jué)得，藥典所要求的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)通常較為寬松，所規(guī)定的菌落計(jì)數(shù)也不是很?chē)?yán)格，從而影響了對(duì)檢品的染菌控制。

2.2 操作水平較差，操作不夠規(guī)范。很多藥品檢驗(yàn)員對(duì)檢驗(yàn)程序、實(shí)驗(yàn)條件等并未進(jìn)行嚴(yán)格控制，同時(shí)也未嚴(yán)格遵守藥典的操作規(guī)范實(shí)施檢驗(yàn)，造成檢品檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)錯(cuò)誤。

3 檢品自身的影響

3.1 檢品自身的特性。檢品自身所具有的特性也會(huì)對(duì)微生物限度檢查的結(jié)果產(chǎn)生較大影響，主要包括兩點(diǎn):①生態(tài)、自然環(huán)境具有的不確定性:藥品很容易受到外部微生物的污染，這種類(lèi)型的污染具有多樣性、其污染程度也難以確定。②活體具有易變性的特點(diǎn):藥典中的檢驗(yàn)對(duì)象是活的微生物，這正是檢品的獨(dú)特之處。

3.2 檢品中的抑菌成分所產(chǎn)生的影響。很多中西都含有抑菌成分，盡管部分檢品所含的并非已知的抑菌成分，然而在菌落計(jì)數(shù)的時(shí)候發(fā)現(xiàn)這種成分對(duì)菌落有抑菌的功效，從而影響到對(duì)檢品的結(jié)果判斷。

3.3 檢品對(duì)培養(yǎng)溫度所產(chǎn)生的影響。之前的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，針對(duì)部分含菌量非常高的檢品，將其置于30℃的溫度進(jìn)行培養(yǎng)，菌落在七十二小時(shí)之內(nèi)生長(zhǎng)比較慢，因此需要在藥典規(guī)定的時(shí)間之內(nèi)增加培養(yǎng)的時(shí)間。

4 培養(yǎng)基產(chǎn)生的影響

4.1 培養(yǎng)基的儲(chǔ)存條件以及培養(yǎng)基自身的質(zhì)量，對(duì)于檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性有直接影響。目前大部分的培養(yǎng)基采取的都是脫水培養(yǎng)基，因此，必須嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中規(guī)定的條件進(jìn)行儲(chǔ)存，避免培養(yǎng)基吸潮結(jié)塊從而產(chǎn)生污染。

4.2 培養(yǎng)基的滅菌處理。根據(jù)規(guī)定要求培養(yǎng)基應(yīng)只允許實(shí)施一次蒸汽滅菌處理，已經(jīng)經(jīng)過(guò)高壓滅菌處理的培養(yǎng)基必須盡可能縮減重復(fù)加熱的時(shí)間，防止出現(xiàn)過(guò)度加熱，從而破壞了培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成份。

4.3 培養(yǎng)基的合理使用。將融化之后的培養(yǎng)基置于45℃ ～47℃的恒溫水浴鍋或者培養(yǎng)箱中進(jìn)行保溫，直到開(kāi)始使用。嚴(yán)格控制已配好的培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)滅菌處理之后的放置時(shí)間，其時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，防止器水分散失以及出現(xiàn)染菌［2］。

5 菌種以及菌落計(jì)數(shù)

微生物限度檢驗(yàn)過(guò)程中一種非常重要的生物資源就是菌種，并在使用中定期實(shí)施傳代，使用的標(biāo)準(zhǔn)菌種的傳代不能超出五代［3］。必須有專人負(fù)責(zé)，使用專用冰箱進(jìn)行保存。如果菌落生長(zhǎng)密集的話，計(jì)數(shù)容易出現(xiàn)誤差。因此，檢驗(yàn)人員必須在菌落計(jì)數(shù)的時(shí)候認(rèn)真觀察，仔細(xì)鑒別檢品的不溶輔料以及培養(yǎng)基所產(chǎn)生的氣泡等等，并利用適當(dāng)?shù)墓ぞ呦蓴_，增加培養(yǎng)時(shí)間以便細(xì)心觀察。如果菌落成片生長(zhǎng)或者重疊的話會(huì)對(duì)計(jì)數(shù)產(chǎn)生影響。按照藥典的規(guī)定，菌落如果出現(xiàn)蔓延生長(zhǎng)成片，此時(shí)就不能計(jì)數(shù)。

為確保藥品微生物限度的檢驗(yàn)結(jié)果能夠準(zhǔn)確，盡量減少實(shí)驗(yàn)誤差，必須做到如下幾點(diǎn):操作環(huán)境必須滿足藥典要求;檢驗(yàn)人員必須具備很強(qiáng)的責(zé)任心，嚴(yán)格遵守藥品檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)范中的要求進(jìn)行操作;嚴(yán)格遵守滅菌程序，避免出現(xiàn)二次污染;對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確做出判斷。

［1］馬緒榮，蘇德模.藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)手冊(cè).北京:科學(xué)出版社，2000:38.

［2］王睿，柴棟.細(xì)菌耐藥機(jī)制與臨床治療對(duì)策.國(guó)外醫(yī)藥:抗生素分冊(cè)，2003，24(3):97.

［3］楊靜.藥品微生物限度檢查法的影響因素分析.中國(guó)藥事，2008，22(12):1095-1096.