王立華

（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬普愛(ài)醫(yī)院 口腔科，湖北 武漢430030）

當(dāng)前我國(guó)的艾滋病毒感染率較高，HIV感染首發(fā)癥狀是口咽部出現(xiàn)念珠菌。我國(guó)當(dāng)前針對(duì)HIV有關(guān)的空腔念珠菌病方面的研究少，本次研究的目的是探討HIV感染者口腔念珠菌負(fù)荷情況、生物分型及和臨床口腔念珠菌臨床表現(xiàn)間的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 研究對(duì)象

2007－2010年武漢市疾病預(yù)防控制中心確診的64例HIV感染者為實(shí)驗(yàn)組，男性53例，女性11例，年齡為22－64歲，均齡36.1歲。對(duì)照組42例沒(méi)有全身系統(tǒng)疾病，并且沒(méi)有空腔黏膜疾病，男性31例，女性12例，年齡為20－56歲，均齡41.2歲。全部研究對(duì)象需簽訂同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：長(zhǎng)期或者是2周內(nèi)使用廣譜抗生素、免疫抑制劑患者以及抗真菌類藥物；義齒佩戴人員；患者有原發(fā)性系統(tǒng)性疾??；妊娠與不配合實(shí)驗(yàn)標(biāo)本采集者。

1.2 試劑

米粉吐溫－80瓊脂培養(yǎng)基、沙保羅氏瓊脂培養(yǎng)基、CHROMagar顯色培養(yǎng)基，API 20CAUX酵母菌鑒定系統(tǒng)，質(zhì)控菌株白色念珠菌ATCC 10231。

1.3 方法

根據(jù)Samaranayake等［1］使用漱口法對(duì)實(shí)驗(yàn)標(biāo)本采集后，經(jīng)離心、沉淀重懸后，對(duì)其分別接種在CHROMagar顯色培養(yǎng)基、沙保羅氏培養(yǎng)基上，溫度控制在37℃，經(jīng)48h培養(yǎng)之后，對(duì)菌落進(jìn)行觀察并記錄其菌落數(shù)、形態(tài)以及顏色等等，并繼續(xù)開展厚壁孢子形成實(shí)驗(yàn)，采用API 20CAUX酶母菌鑒定系統(tǒng)對(duì)念珠菌生物型加以鑒定。所有的珠菌需要分2次來(lái)進(jìn)行鑒定，由2位實(shí)驗(yàn)員記分，并進(jìn)行核對(duì)。結(jié)果：按照全部記錄數(shù)據(jù)檢查bioMrieux數(shù)據(jù)庫(kù)確定念珠菌生物類型。API 20CAUX系統(tǒng)和CHROMagar結(jié)果不一致的情況下，使用API 20C AUX結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)菌種保存。白色念珠菌菌株ATCC 10231屬于質(zhì)控菌株，將滅菌PBS接種在培養(yǎng)基作為對(duì)照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果作統(tǒng)計(jì)學(xué)方面的處理。

2 結(jié)果

64例HIV感染者中，無(wú)任何主訴的患者為10例，有主觀癥狀的患者為54例。臨床表現(xiàn)：39例患者在經(jīng)過(guò)臨床診治后確定是口腔念珠菌?。ㄕ?0.9%），紅斑型9例，口角炎癥為11例。

64例HIV感染者內(nèi)，52例（占81.3%）能夠分離出念珠菌。42例對(duì)照組內(nèi)，7例（16.6%）念珠菌陽(yáng)性分離，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性分離差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)方面意義（P＜0.001）。結(jié)合口腔念珠菌負(fù)荷分析說(shuō)明，在感染組內(nèi)的32例念珠菌的負(fù)荷為大于5×105CFU／L，臨床確診是口腔念珠菌病，包括急性假膜型19例、口角炎型6例、紅斑型7例。健康對(duì)照組的所有口腔念珠菌陽(yáng)性分離唾液念珠菌負(fù)荷均小于5×105CFU／L，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)方面的意義（P＜0.001）。

52例HIV感染者的口腔念珠菌為陽(yáng)性，單一菌株共分離出36例，2個(gè)菌株分離出13例，大于或者等于3個(gè)菌株分離出3例，一共分離出念珠菌74例。經(jīng)過(guò)生物型鑒定之后，熱帶念珠菌為15株、光滑念珠菌為7株、白色念珠菌為39株、克柔式念珠菌為4株、法式念珠菌為2株、角膜假絲念珠菌1株、近平滑念珠菌1株、別的類型念珠菌為5株。13例患者口腔念珠菌出現(xiàn)但其并沒(méi)有口腔念珠菌病HIV感染者內(nèi)，口腔念珠菌為15株，分別是熱帶念珠菌2株、克柔氏念珠菌1株、白色念珠菌12株。7例對(duì)照組共檢測(cè)口腔念珠菌7株，包含近平滑念珠菌1株、白色念珠菌5株、其他類型念珠菌1株。

3 討論

經(jīng)過(guò)本次研究發(fā)現(xiàn)，除了在臨床上被診斷是口腔念珠菌病的HIV感染者以外，共有13例HIV感染者檢測(cè)出念珠菌，致使實(shí)驗(yàn)組的念珠菌陽(yáng)性分離率達(dá)81.3%，對(duì)照組念珠菌分離率增加比較明顯。此外，本次實(shí)驗(yàn)采用的含漱濃縮培養(yǎng)法研究唾液內(nèi)的念珠菌的符合情況，并且參照Silverman等［2］將5×105CFU／L作為臨界參考值，這說(shuō)明口腔念珠菌負(fù)荷大于5×105CFU／L時(shí)，患者都出現(xiàn)口腔念珠菌病表現(xiàn)，臨床一般是急性假膜性念珠菌病，但慢性萎縮型的念珠菌也占有特定的比例。念珠菌陽(yáng)性分離中的高負(fù)荷情況個(gè)體中，念珠菌型除了白色念珠菌、熱帶念珠菌之外，其他生物類型的也較為常見(jiàn)，說(shuō)明HIV感染者外，唾液念珠菌分離株生物型有多樣化的特點(diǎn)，與Sanchez－Vargar等［3］研究的結(jié)果相似，很可能與HIV感染后導(dǎo)致患者免疫力下降，其他的菌株導(dǎo)致疾病出現(xiàn)的風(fēng)險(xiǎn)加大有一定關(guān)系。本次研究表明，口腔念珠菌負(fù)荷增加和生物分型多樣化，是使得感染者口腔微生物特點(diǎn)改變的原因之一，另外，口腔念珠菌也是HIV感染者和廣大艾滋病患者早期癥狀。

［1］Samaranayake LP，MacFarlane TW，Lamey PJ，et al.Acomparison of oral rinse and imprint sampling techniques for the detection of yeast，coliform and Staphylococcus aureus carriage in the oral cavity［J］.J Oral Pathol，2001，15（7）：386.

［2］Silverman S Jr，Gallo JW，Mcknight ML.et al.Clinical characteristics and management responses in 85HIV－infected patients with oral candidiasis［J］.Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radjol Endod ，2005，83（4）：402.

［3］Sanchez－Vargas LO，Ortiz－Lopez NG，Villar M，et al.Point prevalence，micrvbiology and antifungal susceptibility pattems of oral Cundida isolutes colonizing or infecling Mexican HIV／AIDS patients and healthy persons［J］.Rev Lberoam Micol，2005，22（2）：83.