馬宏瑞,章 欣,王曉蓉,耿金菊,顧雪元 (.陜西科技大學資源與環(huán)境學院,陜西 西安 700；.南京大學環(huán)境學院,江蘇 南京 0046)

芽孢桿菌Z5溶銅綠微囊藻特性研究

馬宏瑞1*,章 欣1,王曉蓉2,耿金菊2,顧雪元2(1.陜西科技大學資源與環(huán)境學院,陜西 西安 710021；2.南京大學環(huán)境學院,江蘇 南京 210046)

從利用銅綠微囊藻液人工馴化的活性污泥中分離出一株編號為Z5的溶藻細菌,通過生理生化實驗及16S rDNA序列分析,鑒定為芽孢桿菌.研究了Z5菌對銅綠微囊藻(Microcystis aeruginosa PCC 7806)的溶藻能力,考察了不同生長期的Z5菌無菌濾液及添加比例對銅綠微囊藻生長的影響.結果表明,作用6d后,Z5菌穩(wěn)定期的無菌濾液對處于穩(wěn)定期的銅綠微囊藻的去除效果達到91.36%.在4%～12%的投加范圍內,無菌濾液的投加量與對銅綠微囊藻生長的抑制作用和溶解作用呈正比.研究表明芽孢桿菌Z5是通過分泌具有部分熱穩(wěn)定性的溶藻活性物質進行溶藻.

銅綠微囊藻；溶藻；芽孢桿菌Z5

近年來,由于水體的富營養(yǎng)化而導致的藻類水華暴發(fā),對人類社會以及水生生態(tài)系統(tǒng)產(chǎn)生了各種危害[1].在對水華防治的研究中,有學者注意到,水華和赤潮的消亡可能與溶藻細菌的侵染有關[2-3].溶藻細菌的作用方式一般分為直接溶藻和間接溶藻.其中,間接溶藻是指細菌同藻競爭有限營養(yǎng)[4],或細菌分泌胞外物質溶藻[5].利用溶藻細菌作為水華治理的潛在手段已得到學界的廣泛關注,如史順玉[6]報道了一株能顯著抑制水華束絲藻的生長的溶藻細菌,Kim等[7]分離到一株新的溶藻細菌,5d內可以去除90%以上的微型原甲藻.這些溶藻細菌大多分離自發(fā)生水華或赤潮的自然水體.由于溶藻細菌在天然水體中分布較少,采用傳統(tǒng)方法直接從天然水體中分離比較困難,本試驗從利用銅綠微囊藻液人工馴化的活性污泥中分離出一株編號為 Z5溶藻細菌,對其溶藻特性進行了研究,同時利用16SrDNA序列分析對其進行鑒定,為實際水華的生態(tài)治理提供參考.

1 材料與方法

1.1 藻種及培養(yǎng)基

銅綠微囊藻(Microcystis aeruginosa PCC 7806)由中國科學院南京地理湖泊研究所提供.溶藻菌種從活性污泥中篩選獲得.

溶藻細菌的富集培養(yǎng)采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基[8],銅綠微囊藻培養(yǎng)采用 BG11培養(yǎng)基[9].藻種經(jīng)活化后,采用BG11培養(yǎng)基在26℃、光照強度為2000lx條件下培養(yǎng),光暗周期為12h:12h.采用血球計數(shù)板對銅綠微囊藻細胞濃度進行計數(shù).

1.2 實驗方法

1.2.1 溶解銅綠微囊藻菌株的分離 溶藻細菌的分離參見文獻[10],具體操作如下:用無菌槍頭吸取1mL活性污泥于9mL無菌水中,制成10-1稀釋液.以此類推分別制成10-2,10-3,10-4,10-5,10-6, 10-7,10-8稀釋液.做平板涂布,將獲得的單菌落劃線3次以獲得純種.將純化的各種細菌分別置于200mL液體培養(yǎng)基中,在37℃下180r/min振蕩培養(yǎng) 24h,將所有菌液稀釋至相同菌濃度,等體積接種入一定量銅綠微囊藻藻液中培養(yǎng),6d后尋找并確認藻液明顯黃化的樣品,將樣品所對應的接種菌株編號并保存.實驗用菌株編號為Z5.

1.2.2 生長曲線測定 取100mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基于250mL三角瓶中,用無菌吸管吸取1mL培養(yǎng)18h的Z5菌培養(yǎng)液于三角瓶中,將其置于振蕩培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng).培養(yǎng)條件:37℃、180r/min.其生長曲線的測定參照文獻[10].

1.2.3 細菌培養(yǎng)物不同處理方式對銅綠微囊藻生長的影響[11]將Z5菌的純培養(yǎng)液、經(jīng)0.22μm濾膜抽濾2次的無菌濾液(在平板上劃線證明濾液無菌)及高溫滅菌液(120℃、0.1MPa 滅菌20min)各10mL,分別加入100mL銅綠微囊藻藻液中進行溶藻實驗,4d后測定藻密度.

1.2.4 細菌不同生長期濾液對銅綠微囊藻生長的影響 根據(jù)1.2.2部分實驗所得的生長曲線確定Z5菌株的不同生長期,將Z5菌株在1.1的培養(yǎng)條件下經(jīng)延遲期、對數(shù)期、穩(wěn)定期后培養(yǎng)至衰亡期,分別取各生長期的細菌菌液 10mL,經(jīng)0.22μm濾膜抽濾3次后,加入100mL處于穩(wěn)定期的藻液中,進行溶藻實驗.每個實驗設3個平行.

1.2.5 濾液與藻液的不同投加比例對銅綠微囊藻生長的影響 取0,2,4,6,8,10,12mL Z5菌穩(wěn)定期的無菌濾液,分別投加進100mL處于對數(shù)期的藻液中,各設3個平行實驗,每24h測1次藻密度.

1.2.6 生理生化鑒定 革蘭氏染色、淀粉水解、明膠液化、V-P實驗、檸檬酸鹽實驗等生理生化實驗參照文獻[10].

1.2.7 16S rDNA序列分析 Z5

菌株的16S rDNA的提取、擴增和序列檢測由南京金斯瑞生物科技有限公司進行測定.將所測得的基因序列經(jīng)BLAST程序與GenBank核酸數(shù)據(jù)庫進行比對分析(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast).相似的序列在ClustalX軟件中進行多重匹配排列分析,用MEGA4.0軟件中 Neighbor-Joining方法構建系統(tǒng)發(fā)育樹.

1.2.8 藻去除率的計算 藻的去除率R定義為:

式中:C0為對照組銅綠微囊藻濃度,106cells/mL; Ce為處理組銅綠微囊藻濃度,106cells/mL.

2 結果和討論

2.1 Z5菌的生長曲線

圖1 細菌Z5的生長曲線Fig.1 The growth curve of bacterium strain Z5

從圖1可知,Z5菌株的延遲期約為2h,對數(shù)生長期為2～10h,穩(wěn)定期為10～38h;38h后進入衰亡期.根據(jù)文獻[10]的代時計算公式得Z5的代時G=1.03h.史順玉等[12]報道,溶藻細菌的溶藻活性與細菌生長速度和細菌濃度呈正相關.菌株 Z5代時較短,因此增殖速度快,可以在較短時間內達到較高的生物量.

2.2 細菌培養(yǎng)物不同處理方式對銅綠微囊藻生長的影響

圖2 菌液不同處理方式的溶藻效果Fig.2 Lytic effects of Z5 bacteria liquids after different treatments

由圖2可見,菌液與經(jīng)0.22μm濾膜抽濾2次的無菌濾液均有溶藻作用,說明 Z5菌株的除藻作用并沒有因為去除了菌體而減弱,因此 Z5菌株對銅綠微囊藻的溶藻過程可能是通過分泌溶藻活性物質來實現(xiàn)的.T檢驗結果顯示(表1),原菌液與無菌濾液之間不存在顯著性差異,證實了Z5菌株間接除藻的機制.高溫滅菌后,溶藻能力顯著下降,但仍遠高于對照組,可能是高溫使 Z5菌株代謝釋放的部分溶藻活性物質的性質發(fā)生改變,但Z5菌株分泌的部分溶藻活性物質具有抗高溫性能.裴海燕等[13]對溶藻細菌P15所做的研究中發(fā)現(xiàn)該菌可釋放某種具有熱穩(wěn)定性的物質溶藻;Kim等[14]研究了 1株海洋溶藻細菌 Bacillus sp.AB-4,與本研究結果相類似,其釋放的溶藻活性物質的溶藻能力在高溫下(100℃)略有降低.目前已得到分離鑒定的溶藻活性物質種類包括蛋白質[2,15]、多肽[3]、氨基酸[16-17]、抗生素[18]、含氮化合物[19]、生物堿[20]、色素[21]等.Nobuyuki等[22]發(fā)現(xiàn),對微囊藻具有溶藻效應的溶藻細菌是通過分泌胞外親水性非蛋白質類物質殺藻.Z5菌是通過分泌胞外物質溶藻,且這種溶藻物質具有一定的熱穩(wěn)定性,可能為非蛋白質類物質.有關Z5菌株分泌的溶藻活性物質的結構與性質有待進一步研究.

表1 不同處理組溶藻效果的T-檢驗分析結果Table 1 T-test between different bacteria liquids under different treatments

2.3 Z5菌不同生長期濾液對銅綠微囊藻生長的影響

細菌在不同生長期的代謝活動和代謝產(chǎn)物具有較大差異,進而影響了細菌的溶藻能力.本研究取不同生長期的菌液經(jīng)過濾處理后投入銅綠微囊藻液中.根據(jù)圖1細菌的生長曲線,本研究選取t=2,8,18,40h時的無菌濾液分別檢測Z5菌在生長延遲期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期的溶藻能力.結果如圖3所示.從圖3中可以看出,除衰亡期處理外,其他生長期無菌濾液均表現(xiàn)出顯著的除藻能力,衰亡期無菌濾液則在36h后顯示除藻能力,投加濾液84～108h時,各處理中藻細胞數(shù)快速下降,而后藻細胞數(shù)接近穩(wěn)定.經(jīng)計算,Z5延遲期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期無菌濾液的除藻率分別達到 73.80%、78.42%、91.36%和 59.57%,說明采用穩(wěn)定期的 Z5菌株溶藻能力最強,且溶藻持續(xù)時間可達140h,表現(xiàn)出良好的溶藻穩(wěn)定性.

Z5菌株從延遲期就開始產(chǎn)生溶藻物質,處于穩(wěn)定期的細菌濾液具有較好的溶藻效果,而處于衰亡期的細菌濾液溶藻效果最弱,只對銅綠微囊藻的生長具有一定的抑制作用,可能是易利用的營養(yǎng)物質被消耗殆盡,細菌轉而利用包括溶藻物質在內的胞外分泌物作為二次營養(yǎng)物質維持生命代謝.關英紅等[23]比較了細菌對不同時期藻的溶解效果,在延遲期的銅綠微囊藻液中加入細菌可以較為有效地控制藻細胞的增殖,而在對數(shù)期和穩(wěn)定期中加入菌液,其效果不如延遲期顯著.本實驗結果表明,穩(wěn)定期 Z5菌株的溶藻效果最強.所以在控制水華的實際應用中,應采用在藻類生長的延遲期投加用處于穩(wěn)定期Z5菌株制得的無菌濾液的控藻策略,以獲得更好的控藻效果.

圖3 不同生長期的Z5菌株制得的無菌濾液的溶藻效果Fig.3 The algicidal effect of the bacteria-free filtrates of strain Z5 in different growth periods

2.4 濾液與藻液的不同投加比例對銅綠微囊藻生長的影響

圖4 濾液與藻液不同投加體積對微銅綠微囊藻生長的影響Fig.4 The lytic effect of different addition volumes of bacteria-free filtrates of strain Z5 on Microcystis aeruginosa

如圖4所示,銅綠微囊藻的去除效果與濾液與藻液間的不同投加比例有很大關系.與不加入無菌濾液相比,2%加入量對銅綠微囊藻有明顯促進生長作用,說明濾液中溶藻活性物質濃度不足以對藻的生長產(chǎn)生影響,這可能與濾液中營養(yǎng)成分被銅綠微囊藻利用有關.當 4%加入量,銅綠微囊藻的生長在前5d沒有受到明顯的影響,在第6d,銅綠微囊藻的生長出現(xiàn)停滯,表現(xiàn)出了無菌濾液對銅綠微囊藻生長的抑制作用;當無菌濾液的投加量為6%、8%、10%、12%時,處理組的藻細胞濃度整體上一直低于對照,且隨著無菌濾液體積的投加量逐漸增大,其抑藻和溶藻效果愈加明顯,實驗進行到第 6d,相對于對照分別去除36.42%、69.32%、89.27%和90.51%的藻細胞(表2).即無菌濾液投加量越多,則溶藻現(xiàn)象越明顯,這與牛丹丹等[24]的研究結果相似.

表2 6d后不同體積Z5無菌濾液和細菌培養(yǎng)基對銅綠微囊藻生長的影響Table 2 The effect of different addition volumes of the bacteria-free filtrates of Z5 and bacteria culture medium on Microcystis aeruginosa in 6 days

當銅綠微囊藻初始藻密度為 3.6×106cells/mL時,向藻液中投加10%處于穩(wěn)定期的Z5菌株制得的無菌濾液,144h后,穩(wěn)定期的銅綠微囊藻的去除率為 91.36%(圖 3),而對數(shù)期的銅綠微囊藻去除率為89.27%(圖4),由此可知,Z5菌株對穩(wěn)定期銅綠微囊藻的溶藻效果與對對數(shù)期銅綠微囊藻的溶藻效果相當.

2.5 Z5菌的生理生化特征及分子生物學鑒定

Z5菌在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h,單菌落為圓形,乳白色,表面褶皺,干燥不透明,菌體桿狀,可運動,菌體大小(6～8)μm×(14～20)μm(圖5).革蘭氏染色陽性,可以利用淀粉、液化明膠,V-P實驗、檸檬酸鹽實驗陽性,吲哚、甲基紅實驗陰性,不能利用葡萄糖、蔗糖、乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣.PCR擴增產(chǎn)物的長度為1.512kb,圖6為Z5菌株的電泳圖譜.獲得的16S rDNA序列已在GenBank注冊,注冊號為lcl|12589,用Blast程序對Z5的16S rDNA序列和GenBank中已登錄的16S rDNA序列進行核苷酸序列同源性比較,結果發(fā)現(xiàn),與多株芽孢桿菌的同源性極高,達到 99.7%以上,再結合生理生化指標可以推斷出,Z5菌株屬于芽孢桿菌屬,Z5菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹見圖7.

圖5 Z5菌株掃描電鏡圖Fig.5 Strain Z5 observed by scanning electron microscope

目前,國內外已有一些關于芽孢桿菌溶藻的報道.裴海燕等[25]、晉利等[26]、Kim等[27]分別不同介質中分離獲得了能夠殺死不同類型藻的芽孢桿菌.本研究顯微觀察發(fā)現(xiàn),在 Z5菌株對銅綠微囊藻的溶藻過程中,藻體顏色漸漸由濃綠轉為淡綠直至變黃,變黃時藻細胞已死亡,溶藻過程表現(xiàn)為藻體葉綠素含量逐步減少.同時還發(fā)現(xiàn),溶藻時少數(shù)藻細胞在體積上發(fā)生變化,與正常藻細胞相比變大或變小,林偉等[28]報道,某些細菌可能影響藻細胞的形態(tài),使藻細胞大小不一,促使藻細胞老化.汪輝[29]分離得到一株溶藻細菌 YZ,其在最優(yōu)溶藻條件下經(jīng)過 12d對銅綠微囊藻的去除率為85.44%,而Z5菌6d內對藻的去除率可達到90%以上,顯示其較強的溶藻能力.另外,Z5菌延滯期和代時皆較短,分別為2h和1.03h,能夠在較短的時間內增加濃度,達到溶藻的要求.

圖6 菌株Z5的16S rDNA PCR擴增產(chǎn)物電泳圖Fig.6 Electrophoresis pattern of PCR-amplified products of strain Z5 16S rDNA

圖7 菌株Z5的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.7 The phylogenetic tree of strain

3 結論

3.1 Z5菌株通過分泌胞外溶藻活性物質達到除藻效果,且這種溶藻活性物質具有一定的熱穩(wěn)定性.

3.2 在牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中,Z5菌生長代時 G=1.03h,延遲期約為 0～2h,對數(shù)生長期為2～10h,穩(wěn)定期為10～38h;38h后進入衰亡期.Z5菌株的最佳溶藻時期為穩(wěn)定期.向銅綠微囊藻液中加入穩(wěn)定期Z5菌的無菌濾液,作用6d后可使初始濃度為 3.6×106cells/mL左右的銅綠微囊藻液藻細胞濃度下降90%以上.

3.3 在一定的投加比例范圍內,無菌濾液相對于藻液的投加比例越高,對銅綠微囊藻的溶藻作用越明顯.

3.4 細菌Z5經(jīng)生理生化和16S rDNA鑒定,與多株芽孢桿菌的同源性較高,應屬于芽孢桿菌屬.

[1] 齊雨藻.赤潮 [M]. 廣州:廣東科技出版社, 1999.

[2] Lee S,Kato J, Takiguchi N, et a1. Involvement of an extracellular protease in algicidal activity of the marine Bacterium Pseudoalteromonas sp Strain A28 [J]. Appl. Environ. Microbiol., 2000,66(10):4334-4339.

[3] Imamura N, Motoike I, Shimada N, et al. An efficient screening approach for anti-Microcystis Compounds based on knowledge of aquatimicrobial ecosystem [J]. J. Antibiotics,2001,54(6):582-587.

[4] 趙以軍,劉永定.有害藻類及其微生物防治的基礎—藻菌關系的研究動態(tài) [J]. 水生生物學報, 1996,20(2):173-181.

[5] 于鳳娟,徐玲玲,程 凱,等.2株高效溶赤潮異灣藻放線菌的鑒定及溶藻特性 [J]. 中國環(huán)境科學, 2011,31(1):111-115

[6] Shi Shunyu, Tang Dongshan, Liu Yongding. Effects of an algicidal bacterium Pseudoalteromonas mendocina on the growth and Antioxidant system of Aphanizomenon flos-aquae [J]. Curr. Microbiol., 2009,59:107-112.

[7] Kim Jenong-Dong, Kim Ji-Yong. Selective control of the prorocentrum minimum harmful algae blooms by a novel algae-lytic bacterium Pseudomonas haloplanktis AFMB-008041 [J]. Mar. Biotechnol., 2009,11:463-472.

[8] 趙 斌,何紹江.微生物學實驗 [M]. 北京:科學出版社, 2002.

[9] Kazunori S, Hiroshi I, Fumiko N,et al. Purification of microcystins by DEAE and C18Cartridge chromatography [J].Toxicon., 2002, 40:97-101

[10] 沈 萍,范秀容,李廣武.微生物學實驗 [M]. 北京:高等教育出版社, 2002.

[11] Pei Haiyan, Hu Wenrong. Lytic characteristic and identification of two alga-lysing bacterial strains [J]. Journal of Ocean University of China, 2006,5(4):368-374.

[12] 史順玉,劉永定,沈銀武.細菌溶藻的初步研究 [J]. 水生生物學報, 2004,28(2):219-221.

[13] 裴海燕,胡文容.一株溶藻細菌的溶藻特性及其鑒定 [J]. 中國環(huán)境科學, 2005,25(3):283-287.

[14] Kim Yun Sook, Lee Dae-Sung, Jeong Seong-Yun, et al. Isolation and characterization of a marine algicidal bacterium against the harmful raphidophyceae Chattonella marina [J]. The Journal of Microbiology, 2009,47(1): 9-18

[15] Mitsutani A, Takesue K, Kirita M. Lysis of Skeletonema costatum by Cytophaga sp., isolated from the coastal water of the Ariake sea [J]. Nippon Suisan Gakkaishi, 1992,58(2):2158-2167.

[16] Yoshikawa K, Adachi K, Nishijima M, et a1. β–cyanoalanine produced by marine bacteria on cyanide-free medium and its specific inhibitory activity toward cyanobacteria [J]. Appl. Environ. Microbiol., 2006,66(2):718-722.

[17] 張涵之,潘偉斌,馬 超.溶藻細菌L7溶藻活性代謝產(chǎn)物的分離鑒定 [J]. 中國環(huán)境科學, 2010,30(Suppl.):19-23.

[18] Kawano Y, Nagawa Y,Nakanishi H. Production of thiotropocin by a marine bacterium, Caulobacter sp. and its antimicroalgal activities [J]. J. Mar. Biotechnol., 1997,34(5):225-229.

[19] Berger P S,Rho J,Gunner H B. Bacterial suppression of Chlorella by hydroxylamine production [J].Water Res., 1979,13(1):267-273.

[20] Kodani S, Imoto A, Mitsutani A. Isolation and identification of the antialgal compound, harmane (1-methyl-β-carboline), produced by the algicidal bacterium, Pseudomonas sp. K44-1 [J]. J. Appl. Phycol., 2002,14(2):109-114.

[21] 劉伯雅,魏東芝,魯思然,等.靈菌紅素對有害藻類的除藻活性研究 [J]. 中國環(huán)境科學, 2010,30(4):477-482.

[22] Nobuyuki N, Kazunori N. A novel cyanobacteriolytic bacterium, Bacillus cereus isolated from a eutrophic lake [J]. Jounal of Bioscience and Bioengineering, 2003, 95(2):179-184.

[23] 關英紅,馬 軍,雷國元,等.一株溶藻菌株的分離鑒定及溶藻特性 [J]. 環(huán)境科學學報, 2008,28(7):1288-1293.

[24] 牛丹丹,鄭青松,劉兆普,等.溶藻細菌 YZ對銅綠微囊藻的溶藻特性研究 [J]. 中國環(huán)境科學, 2011,31(2):321-326

[25] 裴海燕,胡文榮,曲音波,等.一株溶藻細菌的分離鑒定及其溶藻特性 [J]. 環(huán)境科學學報, 2005,25(6):796-802.

[26] 晉 利,劉兆普,趙耕毛,等.一株溶藻細菌對銅綠微囊藻生長的影響極其鑒定 [J]. 中國環(huán)境科學, 2010,30(2):222-227.

[27] Kim Min-Ju, Jeong Seong-Yun, Lee Sang-Joon.Isolation, identification, and algicidal activity of marine bacteria against Cochlodinium polykrikoides [J]. J. Appl. Phycol., 2008,20:1069-1078.

[28] 林 偉,劉秀云.海洋微藻除菌及除菌與自然帶菌微藻生長特點比較 [J]. 海洋與湖沼, 2000,11(31):647-651.

[29] 汪 輝,劉兆普,魏 微,等.一株溶藻菌的分離鑒定及其溶藻物質的研究 [J]. 中國環(huán)境科學, 2008,28(5):461-465.

Characteristics study of lysis of Microcystis aeruginosa by Bacillus.

Z5. MA Hong-rui1*, ZHANG Xin1, WANG Xiao-rong2, GENG Jin-ju2, GU Xue-yuan2(1.College of Resource and Environment, Shaanxi University of Science and Technology, Xi'an 710021, China；2.Department of Environmental Science, Nanjing University, Nanjing 210046, China). China Environmental Science, 2011,31(5)：828～833

One algae-lysing bacterium strain named Z5 was isolated from an active sludge microorganism system that was artificially domesticated using Microcystis aeruginosa (PCC 7806). The bacterium strain was identified as Bacillus. by the physiological and biochemical experiment and the sequence analysis of 16S rDNA. The capability of bacterial lysis of Microcystis aeruginosa by Bacillus. Z5 was studied and the influences of the bacteria-free filtrates of Bacillus. Z5 in different growth periods and the different adding volumes of the bacteria-free filtrates of Bacillus. Z5 on the growth of Microcystis aeruginosa were investigated as well.91.36% of Microcystis aeruginosa in stationary growth period had been removed in 6 days after addition of the bacteria-free filtrate of the stationary phase bacterium(Bacillus. Z5). In certain range of addition volumes, from 4% to 12%, a positive correlation was found between algicidal activity and addition volumes of the bacteria-free filtrates of Bacillus. Z5. Microcystis aeruginosa was lysed by Bacillus. Z5 through most of the active algicidal substances which have thermal stability.

Microcystis aeruginosa；algae-lysing；Bacillus.Z5

X172

A

1000-6923(2011)05-0828-06

2010-09-27

水體污染控制與治理科技重大專項(2008ZX07316-004);歐盟科技合作項目(0911)

* 責任作者, 教授, mahr@sust.edu.cn

致謝：感謝中國水利水電科學研究院洪宇寧博士對本文實驗的大力指導.

馬宏瑞(1963-),男,陜西西安人,教授,博士,從事污染物環(huán)境安全與修復技術教學研究工作.發(fā)表論文68篇.