吳 冬，王紅梅

（江蘇農林職業(yè)技術學院 風景園林系，江蘇 鎮(zhèn)江 212400）

景觀樹種紅葉石楠的組織培養(yǎng)

吳 冬，王紅梅

（江蘇農林職業(yè)技術學院 風景園林系，江蘇 鎮(zhèn)江 212400）

針對景觀樹種紅葉石楠的組織培養(yǎng)的各個環(huán)節(jié)進行試驗性研究.結果表明：紅葉石楠表面滅菌以二次滅菌4+3.5 min較好，成活率達85%，啟動培養(yǎng)基以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L較好，分化率達100%.適宜的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L，增殖系數(shù)為7.2，適宜生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.1 mg/L，生根率為7.5%.

紅葉石楠；組織培養(yǎng)；培養(yǎng)基

彩色樹種的選擇與應用已成為當今國際范圍內風景園林建設中的時尚潮流.在中國，近幾年從歐美各國引種栽培的彩色園林樹種就達數(shù)10種之多，彩色園林樹種的推廣應用也正在迅速興起，呈現(xiàn)出一片可持續(xù)發(fā)展的廣闊前景[1].

紅葉石楠（Photinia Fraseri）是薔薇科石楠屬常綠灌木或小喬木[2]，為近年從國外引進的彩葉綠化用樹種.其新梢和嫩葉鮮紅，色彩艷麗持久，成熟葉葉色濃綠，有光澤極具生機.因此成為全球綠化樹種中最為時尚的、紅葉的系列樹種，在歐美國家和日本已被廣泛應用，被譽為“紅葉綠籬之王”.我國園林綠化中常綠或半常綠的紅葉樹種極少，紅葉石楠可填補這一不足，目前在國內僅有少量紅葉石楠種苗供應市場，遠遠不能滿足苗圃和園林工程應用的需求.因此，該樹種市場前景廣闊，有很大的發(fā)展?jié)摿3].

本文針對景觀樹種紅葉石楠的組織培養(yǎng)的各個環(huán)節(jié)進行了試驗性研究，目的是為彩色園林樹種在我國的推廣應用提供參考.

1 紅葉石楠的組織培養(yǎng)

1.1 材料與方法

1.1.1 實驗材料

實驗材料紅葉石楠來源于江蘇農林職業(yè)技術學院北校區(qū)，截取當年生新梢作外植體.

1.1.2 試驗方法

1）材料處理

晴天中午，采集紅葉石楠當年生枝條的幼嫩莖尖和莖段，將莖尖和莖段剪成5 cm長，用洗衣粉浸泡5 min左右再用自來水沖洗20 min以備用.

2）啟動培養(yǎng)

將紅葉石楠外植體沖洗干凈，并剪成1～2 cm的莖尖或帶一個單芽的莖段，用75%的酒精浸泡30 s，再用0.1%HgCl2消毒，滅菌時間分別為：6，6.5，7，7.5，8，3+3，4+3，4+3.5，4+4 min.為了最大限度地減少HgCl2殘毒對外植體的影響，需用無菌水沖洗3～4次.在超凈工作臺上接種前先剝去頂芽最外層的一片幼葉，并部分地切去莖段的兩端，保留莖段長約1 cm左右，直立式接種，將外植體基部插入培養(yǎng)基.每個處理接種30個材料.20 d后分別統(tǒng)計污染率、褐變率、存活率.

啟動培養(yǎng)基采用MS基本培養(yǎng)基，并附加BA,KT，NAA，IBA等不同激素水平.

3）增殖培養(yǎng)

在無菌條件下待誘導出的不定芽長到3～4 cm時切剪下，接入增殖培養(yǎng)基（MS）中，附加不同種類、濃度的激素配比進行試驗，試驗因子為激素濃度，選擇了 6-BA（1.0 mg/L，2.0 mg/L，3.0 mg/L）、NAA（0.1 mg/L，0.3 mg/L，0.5 mg/L）兩種激素，分別選取3個水平，共9種處理，每瓶接種3棵，每處理接種9瓶，重復3次，25 d后統(tǒng)計分化數(shù)、苗高、苗生長狀況.

4）生根培養(yǎng)

當苗長到5 cm左右時，剪成含3～4個小芽的小段，接種到不同生根培養(yǎng)基上誘導生根.生根階段，一般要求較低的無機鹽離子濃度.因此，本研究采用了（1 4MS、1 2MS、MS）的基本培養(yǎng)基，并附加蔗糖2.0%；瓊脂0.7%；根、莖、芽對生長素的敏感性不同，其中，根最敏感.因此，可通過增加培養(yǎng)基中生長素濃度來誘導生根.本研究對影響紅葉石楠生根的因素選??；兩因子：無機鹽含量（1/4MS，1/2MS，MS），NAA（0.1 mg/L，0.2 mg/L，0.4 mg/L）三水平的L9（34）正交試驗設計,每瓶接種2個外植體，每個處理接種10瓶，重復三次，30 d后統(tǒng)計生根棵數(shù)、平均生根數(shù)、平均根長、生根率、根長勢.

5）培養(yǎng)條件

啟動和增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基中附加蔗糖均為3%，瓊脂為0.7%.生根培養(yǎng)基加入2%的蔗糖，0.7%的瓊脂.pH值為5.8～6.0.培養(yǎng)室溫度白天為25～28℃，夜晚為15～20℃，光照強度1500～2000lx光照時間12 h d.

1.2 結果與分析

1.2.1 啟動培養(yǎng)

1.2.1 .1外值體的表面滅菌（莖尖和莖段都有）

表1結果表明：對外植體的表面滅菌總時間相同下，二次滅菌的死亡率和污染程度較一次滅菌明顯降低.無論一次滅菌還是二次滅菌，對于莖段培養(yǎng)只要超過7 min，死亡會明顯加重，這表明，HgCl2滅菌時間過長會把植物材料殺死，而滅菌時間過短，污染率又會上升，所以要權衡兩方面的因素，選擇適當?shù)臏缇鷷r間為4＋3.5 min較為適宜.

表1 紅葉石楠表面滅菌效果比較Tab.1 Comparison of the surface sterilization of Photinia

1.2.1 .2培養(yǎng)基種類對啟動培養(yǎng)的影響

紅葉石楠啟動過程中的培養(yǎng)基選擇是組織培養(yǎng)成敗的關鍵因素，培養(yǎng)基中植物激素的濃度對紅葉石楠腋芽的萌發(fā)極為重要.從表2中可以得出，6-BA和IBA對分化率的影響基本呈先增后減的趨勢.這是因為植物激素的濃度過低對不定芽生長分化不起作用，而高濃度又抑制了芽的生長.所以，紅葉石楠的適宜啟動培養(yǎng)基為MS＋6-BA1.0 mg/L＋NAA0.2 mg/L.

表2 不同培養(yǎng)基對啟動培養(yǎng)的影響Tab.2The impact of different medium on the initiation of culture

1.2.2 增殖培養(yǎng)

1.2.2.1 激素濃度對紅葉石楠增殖的影響

在增殖培養(yǎng)過程中，經過20 d，從接種材料的基部不斷有不定芽長出，但不同培養(yǎng)基配方的增殖效果不同.從表中可以看出培養(yǎng)基MS+NAA0.1 mg/L+6-BA2.0 mg/L進行增殖培養(yǎng)，其芽苗粗壯，增殖系數(shù)最高，增殖系數(shù)達7.2倍.試驗結果見表3.

表3 6-BA和NAA濃度對紅葉石楠增殖影響Tab.3Effect of the concentration of 6-BA and NAA on the Proliferation Photinia

1.2.2.2 不同取材部位對增殖的影響

分別將莖尖和莖段接入培養(yǎng)基中，結果發(fā)現(xiàn)莖尖和莖段相比有明顯的優(yōu)勢，不僅芽萌動較早，苗的生長狀態(tài)最佳，而且分化率和增殖系數(shù)較高.結果顯示不同取材部位影響紅葉石楠的增殖，其中莖段增殖效果較好.實驗統(tǒng)計結果見表4.

從表4可以得出：在紅葉石楠的增殖培養(yǎng)中，莖段的增殖系數(shù)高于莖尖，莖尖為5.3，而莖段為5.6.而在轉接初期，莖段生長緩慢，莖尖生長旺盛.但是隨著培養(yǎng)時間的延長，二者的差距逐漸縮小.莖段增殖率高于莖尖可能是由于莖尖的頂芽抑制了側芽的萌發(fā).

表4 不同外植體對增殖的影響Tab.4 Effect of different explants on the proliferation

1.2.3 無機鹽含量和NAA濃度對紅葉石楠生根的影響

幼苗轉入不同生根培養(yǎng)基一周后，基部出現(xiàn)淡紅色突起，長出帶細密白色絨毛的根，根淡紅色，30d后絨毛逐漸消失，根變?yōu)楹稚㈤L出少量側根.本試驗比較了無機鹽含量和NAA濃度對紅葉石楠幼苗生根的影響，結果見表5.

由表5可以看出，NAA濃度是影響紅葉石楠生根的主要因素.其NAA0.1 mg/L時根的長勢最好，當NAA濃度為0.2 mg/L，0.4 mg/L時，1 4MS、1 2MS、MS培養(yǎng)基的生根率均較低，此外，培養(yǎng)基中的無機鹽濃度對紅葉石楠生根也有一定影響.綜合生根率和生根條數(shù)及苗的生長情況，認為采用1 2MS+NAA0.1mg/L培養(yǎng)基為宜.

2 討論

在紅葉石楠啟動培養(yǎng)時，外植體滅菌時要注意的是紅葉石楠材料的老嫩程度不同所采取的滅菌時間也不同，要因材而定.

在紅葉石楠增殖培養(yǎng)時，不同部位對增殖有一定的影響，莖尖誘導的側芽比較少，但它高生長比較明顯.而莖段誘導的側芽比較多，但它高生長明顯沒有莖尖好.在接入培養(yǎng)基后，一個完整的芽生長速度肯定比莖段快.雖然莖尖和莖段都是同一類型的材料，都含芽原基，但效果差異較大，可能因為從形態(tài)結構上莖尖比莖段更趨于完整，具有更強的感受態(tài)[4].無論是莖尖還是莖段的增殖對我們來說都是需要的.

表5 紅葉石楠在不同培養(yǎng)基上的生根情況Tab.5 The rooting situation of photinia in different medium

在紅葉石楠生根培養(yǎng)時，根據(jù)組織培養(yǎng)方面的資料得知，IBA、ABT的生根效果明顯不如NAA，而且NAA的價格比較便宜，對組織培養(yǎng)來說比較經濟實惠.

培養(yǎng)條件、光照的強度、pH值的大小、蔗糖濃度的多少對紅葉石楠的組織培養(yǎng)都有一定的影響.

[1]何小弟.彩色園林樹種禮贊[J].藍天園林,2006,31(6):18-20.

[2]陳俊愉,程緒珂.中國花經[M].上海:上海文化出版社,1990.

[3]王紅梅,王然,懂曉穎,等.紅葉石楠的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].萊陽農學院學報,2004,21（3）:238-240.

[4]鐘宇,張鍵,羅承德,等.西洋杜鵑組織培養(yǎng)技術體系研究（I）——基本培養(yǎng)基和外植體的選擇[J].四川農業(yè)大學學報,2001,19（1）:37-39.

Studies on the Tissue Culture of Landscape Tree Species Photinia

WU Dong，WANG Hongmei
（Department of Landscape Gardening，Jiangsu Vocational Technical College of Agriculture and Forestry，Zhenjiang212400，China）

The tissue culture of Photinia was studied.The results showed that after being sterilized for 4+3.5 min,the survival rate reached 85%.The MS basic medium supplemented with 1.0mg/Lof 6-BA and 0.2 mg/L of NAA was the best initiation medium.The MS basic medium supplemented with 2.0mg/L of 6-BA and 0.2mg/L of NAA was the best multiplication medium,in which the coefficient of germination was 7.2.The medium composed of 1/2MS and 0.1mg/L of NAA was the best rooting medium,in which the rate of rooting was 7.5%.

Photinia fraseri；tissue culture；culture medium

S 687；Q 943.1

A

1674-4942（2011）03-0314-03

2011-04-20

黃 瀾