高 靚，杜元灝，李中正，田力欣，郭 義

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193）

腦血管病是目前人類疾病的三大死亡原因之一，腦水腫是腦血管病的嚴(yán)重并發(fā)癥。前期工作中，筆者發(fā)現(xiàn)，不同劑量的薏苡仁提取液灌胃對大鼠腦缺血損傷后的腦水腫有改善作用，且較高劑量組的腦水腫減輕作用較好。本研究旨在觀察薏苡仁注射用提取液大鼠尾靜脈注射后，對腦缺血損傷后大鼠存活率、存活時間及腦水腫的影響，探索薏苡仁對大鼠缺血性腦水腫的作用規(guī)律，為中藥在缺血性腦病的中早期介入提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與藥品 實驗選用成年健康的SD雄性大鼠，毛色光亮，體質(zhì)量 250～300 g，2～3月齡，由中國北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，許可證編號：SCXK（京）2007-0001。飼養(yǎng)于實驗室動物房籠具內(nèi)（紹豐SIM型、SIR型獨(dú)立換氣系統(tǒng)籠具），溫度（22±2）℃，濕度≥40%。動物的飼養(yǎng)和使用符合國際動物倫理法案的相關(guān)動物福利要求。自由進(jìn)食、飲水。注射用薏苡仁提取液100 mL（與生藥比例為1∶5），由天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥實驗室提供，批號：090418。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物模型的制備、分組及干預(yù) 選用雄性SD大鼠，將動物按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組和薏苡仁提取液靜脈注射組。實驗周期為48 h。

動物模型制備方法參照Longa法[1]，假手術(shù)組只暴露血管不進(jìn)行模型制作。根據(jù)人與動物體表面積折算的等效劑量比值計算方法[2]，參照成人薏苡仁用量[3]及提取注射液與生藥比例（為1∶5）確定薏苡仁注射液每日用量為8.1 mL/kg體質(zhì)量，大鼠尾靜脈注射給藥，每日治療3次。

1.2.2 觀察指標(biāo)及數(shù)據(jù)分析方法 存活率及存活時間的計算：統(tǒng)計各組大鼠48 h存活率并記錄各組未存活到48 h的死亡大鼠的存活時間。

腦組織含水量測定：大鼠處死取腦后，沿腦橋上界水平切斷，棄去小腦及雙側(cè)嗅球，將剩余腦組織沿中線切開，濾紙吸干表面水分，分別稱取左右兩側(cè)濕質(zhì)量，恒溫烤箱110℃烘干至恒質(zhì)量后稱取干質(zhì)量，腦組織含水量=（濕質(zhì)量-干質(zhì)量）/濕質(zhì)量×100%。

腦系數(shù)測定：腦系數(shù)=全腦濕質(zhì)量/動物體質(zhì)量×100%，右腦腦系數(shù)=右腦濕質(zhì)量/動物體質(zhì)量×100%，左腦腦系數(shù)=左腦濕質(zhì)量/動物體質(zhì)量×100%。

數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組內(nèi)左右兩側(cè)比較采用配對t檢驗，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實驗動物存活率及存活時間 至48 h時，模型組動物死亡率過半。薏苡仁提取液靜脈注射組存活率有升高的趨勢，提高了13.85%。見表1。

表1 各組實驗動物存活率Tab.1 The survival rate of rats in each group只

比較各組死亡大鼠存活時間：薏苡仁提取液靜脈注射組死亡大鼠存活時間長于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表2。

表2 不同干預(yù)措施對MCAO大鼠存活時間的影響（±s）Tab.2 The influence of different intervention on the survival time of rats with MCAO（±s）

表2 不同干預(yù)措施對MCAO大鼠存活時間的影響（±s）Tab.2 The influence of different intervention on the survival time of rats with MCAO（±s）

注：薏苡仁提取液靜脈注射組與模型組比較，*P<0.01。

組別 死亡數(shù)（只）存活時間（h）模型組（M）922.2333±3.5711薏苡仁提取液靜脈注射組（H－Y）629.4119±2.2696*

2.2 腦組織含水量測定 左右兩側(cè)腦含水量比較：正常組、假手術(shù)組左右兩側(cè)腦含水量大致相等，無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；模型組右側(cè)腦含水量明顯增高，左右兩側(cè)腦含水量相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），說明右側(cè)腦水腫嚴(yán)重，造模成功；經(jīng)治療后，薏苡仁提取液靜脈注射組左右兩側(cè)腦含水量相比較雖然差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但差異已明顯減小，提示右側(cè)腦水腫有所改善。各組間右腦腦含水量比較：模型組顯著高于正常組和假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），說明造模后右腦含水量明顯增高，水腫嚴(yán)重，造模成功；經(jīng)治療后，薏苡仁提取液靜脈注射組腦含水量低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且與正常組相比較差異已無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），提示右側(cè)腦水腫得到了明顯改善。見表3。

2.3 腦系數(shù)測定 左右兩側(cè)腦系數(shù)比較：正常組、假手術(shù)組左右兩側(cè)腦系數(shù)大致相等，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；模型組右腦腦系數(shù)明顯增高，左右兩側(cè)腦系數(shù)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明右側(cè)腦水腫嚴(yán)重，造模成功；薏苡仁提取液靜脈注射組經(jīng)治療后，左右兩側(cè)腦系數(shù)相比較差異已無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），提示右側(cè)腦水腫得到明顯改善。各組間右腦腦系數(shù)比較：正常組、假手術(shù)組右腦腦系數(shù)均低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），表明造模后腦水腫嚴(yán)重，造模成功；經(jīng)治療后，薏苡仁提取液靜脈注射組右腦腦系數(shù)低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），但與正常組相比，差異仍存在統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明薏苡仁提取液靜脈注射對腦水腫有一定的改善作用。各組間腦系數(shù)值比較：正常組、假手術(shù)組腦系數(shù)值均低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），表明造模后腦水腫嚴(yán)重，造模成功；經(jīng)治療后，薏苡仁提取液靜脈注射組腦系數(shù)值低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），并且和正常組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明薏苡仁提取液靜脈注射對腦水腫有改善作用。見表4。

表3 不同干預(yù)措施對MCAO大鼠腦含水量的影響（±s）Tab.3 The influence of different intervention on the brain water content of rats with MCAO（±s）%

表3 不同干預(yù)措施對MCAO大鼠腦含水量的影響（±s）Tab.3 The influence of different intervention on the brain water content of rats with MCAO（±s）%

注：右腦與左腦含水量比較，*P<0.05，**P<0.01；同側(cè)各組與模型組相比較，△P<0.05，△△P<0.01；同側(cè)各組與正常組相比較，##P<0.01。

組別 n正常組（N）6假手術(shù)組（S）9模型組（M）6薏苡仁提取液靜脈注射組（H-Y）7右腦腦含水量 左腦腦含水量79.3964±0.1391△△ 79.2749±0.141679.3362±0.3073△△ 79.3171±0.360285.0850±0.3672##** 79.9518±0.2178##82.0249±1.6960△* 79.6492±0.6401

表4 不同干預(yù)措施對MCAO大鼠腦系數(shù)的影響（±s）Tab.4 The influence of different intervention on the brain coefficient of rats with MCAO（±s）%

表4 不同干預(yù)措施對MCAO大鼠腦系數(shù)的影響（±s）Tab.4 The influence of different intervention on the brain coefficient of rats with MCAO（±s）%

注：左腦與右腦腦系數(shù)比較，*P<0.05；同側(cè)各組與模型組比較，△△P<0.01；同側(cè)各組與正常組比較，#P<0.05，##P<0.01。

組別 n正常組（N）6假手術(shù)組（S）9模型組（M）6薏苡仁提取液靜脈注射組（H-Y）7右腦腦系數(shù)0.2673±0.0082△△0.2684±0.0070△△0.3145±0.0160*##△△0.2811±0.0112△△#左腦腦系數(shù)0.2685±0.00550.2698±0.00640.2894±0.00740.2713±0.0227腦系數(shù)0.5358±0.0126△△0.5430±0.0157△△0.6098±0.0294##0.5611±0.0355△△

3 討論

腦梗死是臨床常見病，具有發(fā)病率高、病死率高、致殘率高和復(fù)發(fā)率高的“四高”特點[4]。腦水腫是腦梗死嚴(yán)重并發(fā)癥，水腫所致腦疝是該病重要死亡原因，減輕腦水腫對該病的治療及預(yù)后有重要意義。缺血性腦水腫從中醫(yī)角度講可由瘀血阻絡(luò)，腦脈瘀阻，致氣機(jī)失調(diào)，氣血不暢，氣不攝津，導(dǎo)致津液溢出脈外，水瘀互結(jié)形成水腫[5]。

本課題組在前期工作中發(fā)現(xiàn)，與模型組和其他治療組相比，薏苡仁提取液灌胃治療組能降低大鼠的死亡率，延長大鼠的存活時間，對缺血性腦水腫有一定的改善作用,且對腦缺血損傷后的神經(jīng)細(xì)胞有一定的保護(hù)作用。

薏苡仁性涼，味甘、淡。歸脾、胃、肺經(jīng)。有健脾滲濕，除痹止瀉，補(bǔ)氣益陽，清新養(yǎng)神，清熱排膿之功效[6-8]，現(xiàn)代藥理研究顯示，其提取物有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、降血糖、解熱鎮(zhèn)痛抗炎、抑制胰蛋白酶作用[8-9]，臨床可治療多種惡性腫瘤、肥胖癥、急性咽喉炎、婦女排卵異常、扁平疣、帶狀皰疹、尿路結(jié)石、糖尿病等[10]。但對于腦血管病及缺血性腦水腫的作用尚未見報道。

本實驗選擇薏苡仁提取液靜脈注射進(jìn)行實驗研究，采用大鼠大腦中動脈栓塞所致缺血性腦水腫模型，薏苡仁提取液靜脈注射組大鼠的存活率、存活時間均明顯高于模型組，腦含水量、腦系數(shù)均明顯低于模型組，說明薏苡仁提取液靜脈注射有提高腦缺血后大鼠48 h存活率的趨勢，對腦缺血后48 h內(nèi)死亡大鼠的存活時間有一定的延長作用，對缺血性腦水腫有一定的改善作用?！侗静菥V目》稱薏苡仁“土能勝水除濕，故泄瀉、水腫用之”。《名醫(yī)別錄》、《本草新編》也言其“善消水腫”“最善利水，又不損耗真陰之氣”，可見在中醫(yī)學(xué)中薏苡仁可廣泛用于水濕之證，根據(jù)中醫(yī)對腦水腫的認(rèn)識，其病機(jī)可能為體內(nèi)水濕津液失布、失衡，瘀積停滯于腦所致。本實驗結(jié)果顯示薏苡仁對大鼠缺血損傷后的腦水腫有一定的積極影響，一定程度上印證了中醫(yī)藥傳統(tǒng)理論中對薏苡仁消水腫，善利水且為利水不走氣之上品的認(rèn)識。薏苡仁有鎮(zhèn)痛抗炎抗血栓作用[8]，其醇提物可對抗二甲苯引起的小鼠耳腫和角叉菜膠引起的小鼠足跖腫脹，輕度抑制乙酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高，能延長電刺激動脈血栓形成時間和凝血時間。本實驗薏苡仁對模型大鼠存活率、存活時間及腦水腫的影響可能與以上機(jī)制有關(guān)。

本實驗在一定程度上證實了中藥薏苡仁對缺血性腦水腫可有一定療效。中醫(yī)藥治療缺血性腦血管病可能有西醫(yī)藥無法替代的綜合治療作用，為中醫(yī)藥在缺血性腦病的中早期介入提供了一定的實驗依據(jù)，值得進(jìn)一步深入研究。

[1]Longa EZ,Weinstein PR,Carlson S,et al.Reversible middle cerebral arter occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke,1989,20(1):84-91.

[2]徐叔云.藥理實驗方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2002：89－92.

[3]雷載權(quán).中藥學(xué)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1995：23.

[4]任 超，劉小芳，解豐帆.急性腦梗死治療進(jìn)展[J].中華醫(yī)學(xué)實踐雜志，2008，7（8）：680－682.

[5]張宏偉,魏耕樹.試論顱腦水瘀證治[J].陜西中醫(yī)，2001，22（5）：285－286.

[6]王曉光.常用中藥藥理研究與臨床新用[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2006：156.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（中藥）[S].化學(xué)工業(yè)出版社，2005：260－261.

[8]劉曉梅.薏苡仁的藥理研究與臨床新用[J].中國醫(yī)藥指南，2010，8（2）：36－37.

[9]苗明三.薏苡仁多糖對環(huán)磷酞胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影響[J].中醫(yī)藥學(xué)報，2002，49（5）：134.

[10]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：7412.