王 萍，孔飛飛，譚興起，郭良君，鄭 巍

解放軍第九八醫(yī)院，浙江湖州 313000

芐達賴氨酸眼用凝膠的制備及質量控制

王 萍，孔飛飛，譚興起*，郭良君，鄭 巍

解放軍第九八醫(yī)院，浙江湖州 313000

目的：探討芐達賴氨酸眼用凝膠的制備及其質量控制。方法：以透明質酸鈉（HA）或羥丙基甲基纖維素（HPMC）或兩者合用為凝膠基質，以氯化鈉調節(jié)滲透壓，硼酸-硼砂調節(jié)pH，柳硫汞作抑菌劑，用高效液相色譜法測定其含量，考察制劑的穩(wěn)定性。結果：芐達賴氨酸在0.06～0.43mg/ml范圍內線性關系良好，r=0.999 8，加樣回收率為99.5%，RSD為1.2%（n=9）。結論：本法制備眼用凝膠，工藝簡單易行，制劑質量穩(wěn)定。

芐達賴氨酸；眼用凝膠；高效液相色譜

芐達賴氨酸（bendazac lysine,BDZL）首先由Angelini制藥集團于1983年在意大利上市，隨后在20多個國家開展進一步研究。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)該藥作為醛糖還原酶 （aldehyde reductase，AR）抑制劑，無論口服還是局部滴眼均能進入眼組織和房水，并在晶狀體內濃集，不僅對糖性白內障有效，還對多種類型的早期老年性白內障有預防和治療作用。國內首先由華西醫(yī)科大學和江蘇省藥物研究所開展研究，后由浙江平湖制藥廠（現(xiàn)更名為浙江莎普愛思制藥有限公司）于1997年取得新藥證書和生產(chǎn)批文[1]。目前，芐達賴氨酸在國內外上市的劑型有滴眼液及片劑，尚無眼用凝膠劑。

與傳統(tǒng)滴眼液相比，眼用凝膠能較長時間與眼部緊密結合，不僅克服了傳統(tǒng)滴眼液會很快被淚液沖刷而無法達到有效藥物濃度的缺點，還減少了使用頻率，提高了生物利用度，增加了患者的順應性[2]；同時由于凝膠體系的三維網(wǎng)狀結構高度親水，可將藥物束縛于其中或其間隙中，從而使得藥物的釋放度得以控制。因此，在本制劑中筆者采用高分子親水性聚合物為基質作為藥物載體，制備成眼用凝膠制劑。

芐達賴氨酸眼用凝膠制劑，它含有有效劑量的芐達賴氨酸、適量的凝膠基質和其他藥物可接受的載體。本實驗對凝膠基質、離子緩沖對、抑菌劑及滲透壓調節(jié)劑等在制劑處方中的相互影響進行研究，經(jīng)處方篩選和工藝研究制備出性狀良好、性質穩(wěn)定的凝膠劑；同時，本實驗對篩選出的凝膠劑進行含量測定及方法學考察。

1 儀器和試藥

1.1 實驗儀器

島津LC-10AT高效液相色譜儀－泵 （日本島津）；島津SPD-6AV檢測器（日本島津）；N-2000色譜工作站（浙江大學）；VSC502超聲波清洗器 （上海波龍電子設備有限公司）；HH-BⅡ電熱恒溫培養(yǎng)箱（天津實驗儀器廠）；BS124S型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；WD-1藥物穩(wěn)定性試驗箱（天津藥典標準儀器廠）；DF-Ⅱ集熱式磁力加熱攪拌器（江蘇省金壇市醫(yī)療器械廠）；GNP-9160隔水式恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實驗設備廠）。

1.2 試劑與藥品

芐達賴氨酸對照品（100561-200401，中國藥品生物制品檢定所）；芐達賴氨酸原料（批號：4017205，寧夏康亞制藥有限公司）；卡波姆-940（批號：20070603，安徽山河藥用輔料有限公司）；卡波姆-934(批號：070307，安徽山河藥用輔料有限公司)；卡波姆-941（批號：070514，安徽山河藥用輔料有限公司）；HPMC（批號：070401，安徽山河藥用輔料有限公司）；HA（批號：0508111，山東正大福瑞達制藥有限公司）；泊洛沙姆-188（批號：070515，安徽山河藥用輔料有限公司）；硼酸－硼砂（廣州市漢普醫(yī)藥有限公司）；庚烷磺酸鈉（批號：070111，上海凌峰化學試劑有限公司）；甲醇（色譜純）（天津市四友精細化學品有限公司）；冰醋酸等試劑為分析純；純化水等。

2 方法與結果

2.1 處方篩選

2.1.1 研究中常用的幾種基質 羥丙基甲基纖維素（HMPC）、卡波姆（carbomer）、泊洛沙姆（ploxamer）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、透明質酸鈉（HA）是研究中較常用的基質。HPMC為非離子化合物，和一些氧化劑有配伍禁忌[4]，具有增稠能力、排鹽性、pH穩(wěn)定性、保水性、尺寸穩(wěn)定性、優(yōu)良的成膜性以及廣泛的耐酶性、分散性和粘結性等特點?？ú罚–arbomer）具有內在特有的交聯(lián)結構，其良好的黏滯性和親水凝膠性使其具有較好的控緩釋作用?？ú放c堿性藥物可形成內鹽，也有延緩釋藥的作用[3]?？ú酚龆椒幼兩?，且和苯酚、陽離子聚合物、強酸、強堿等均有配伍禁忌[4]。流洛沙姆具有很強的吸濕性，與苯酚和羥苯酯類有配伍禁忌[4]。單獨使用泊洛沙姆-188用量太大且性能不一定好，而單純的泊洛沙姆-407溶液膠凝溫度較低[2]。PVP具有很強的膨脹性能及與多類物質的絡合能力，可與磺胺噻唑、水楊酸鈉、苯巴比妥等化合物在溶液中形成分子加合物，而且PVP與抑菌劑硫柳汞會形成復合物，從而使硫柳汞的抑菌能力減弱。HA在眼科領域，可作為眼用制劑媒介加在眼溶液里，從而構成一層膜覆蓋于角膜內皮表面，這樣有利于眼組織對藥物持久而有效的吸收，使其生物利用度明顯增加[5]，它還可作為眼科黏彈性保護劑應用于臨床，開創(chuàng)了眼科手術“軟殼技術”的新時代。

可見，HPMC、卡波姆、HA均可單獨作為凝膠基質，泊洛沙姆用量太大，可以考慮和其他基質聯(lián)合使用，而PVP不太適宜作為凝膠基質，但可作為增溶劑等。

2.1.2 基質的篩選 本實驗通過考察基質與主藥及其他輔料配伍后的外觀性狀等指標對上述5種比較常用的眼用凝膠基質進行了篩選。取芐達賴氨酸0.05 g，精密稱定7份，分別置于7個燒杯中，加10 ml純化水，攪拌，使其充分溶解，再分別向其中加入以下7種基質，攪拌，使其充分溶解，觀察并記錄實驗結果。見表1。

表1 基質與芐達賴氨酸的配伍情況

通過表1可以得出以下結論：①PVP由于在用量增加的情況下稠度與黏度仍不能符合凝膠的要求，因此不考慮單獨使用PVP為凝膠基質，但是可以考慮把PVP作為增溶劑與其他凝膠基質配合使用；②泊洛沙姆-188雖然符合凝膠的要求，但是用量太大，操作起來也不方便，且在實際過程中會造成大量的損失，因此也不考慮單獨使用泊洛沙姆-188為凝膠基質；③HPMC和HA這兩種基質均具有良好的黏度與稠度，且與主藥有很好的兼容性，沒有配伍禁忌，所以可以以這兩種基質來制備良好的凝膠；④卡波姆-934、卡波姆-940、卡波姆-941與主藥配伍后均產(chǎn)生絮狀沉淀，不考慮單獨使用卡波姆作為芐達賴氨酸的凝膠基質。有文獻報道可以通過加入其他凝膠基質來消除卡波姆與芐達賴氨酸之間的配伍禁忌，得到性狀良好的凝膠基質，因此可以考慮卡波姆與其他一種或幾種凝膠基質聯(lián)合使用。

參考《輔料手冊》[4]中卡波姆不同型號的性能介紹，用泊洛沙姆-188和PVP來試著消除卡波姆與芐達賴氨酸的配伍禁忌。實驗情況見表2。

表2 基質篩選（g）

通過表2了解到，處方1、2、3均具有良好的外觀性狀，但是毫滲壓摩爾比均不符合規(guī)定，又通過實驗了解到泊洛沙姆-188單獨溶于水能產(chǎn)生一定的滲透壓，而當降低泊洛沙姆-188的加入量時，各處方毫滲壓摩爾比降低的同時，均有白色沉淀析出，證明不能通過降低泊洛沙姆-188的加入量來調整毫滲壓摩爾比；處方4、5、6外觀性狀均為白色渾濁，即PVP與卡波姆聯(lián)合使用不能消除主藥與卡波姆的配伍禁忌。處方7、8、9均具有良好的外觀性狀，且各條件均符合要求。

因此，以芐達賴氨酸為主藥制備眼用凝膠時不宜采用卡波姆作為凝膠基質。最終決定以HPMC或HA或HPMC與HA聯(lián)合使用為凝膠基質。

2.1.3 pH值的選擇 pH值的不當易對眼睛造成刺激，增加淚液的分泌，導致藥物迅速流失，甚至角膜損傷；同時，pH的調節(jié)還應兼顧藥物的溶解度和穩(wěn)定性的要求。正常眼可耐受的pH值為5.0～9.0，參考《中國藥典》二部（2005年版）芐達賴氨酸滴眼液標準[6]及莎普愛思滴眼液質量標準[7]中規(guī)定的pH值 （pH值應為6.8～7.8），最終確定該凝膠劑的pH值范圍仍為6.8～7.8。本研究針對pH值的篩選，結果見表3。

2.1.4 緩沖對的篩選及處方評價 滴眼劑中常用的緩沖鹽一般為磷酸鹽與硼酸鹽。磷酸鹽較適合用于酸性溶液，硼酸鹽較適合用于堿性溶液。見表4。

從表4可知：根據(jù)芐達賴氨酸的pH值范圍（5.5～7.5）及芐達賴氨酸滴眼液的pH值范圍（6.8～7.8），選擇硼酸鹽緩沖對作為該滴眼液的緩沖離子對。通過實驗證明該緩沖對適合芐達賴氨酸及其相關輔料（表5），故選擇該緩沖對作為芐達賴氨酸眼用凝膠的緩沖對。

表3 處方評價結果

表4 緩沖對的篩選（g）

表5 處方評價

2.1.5 抑菌劑的篩選及處方評價 抑菌劑的選擇研究實驗結果，見表6。處方評價見表7。

表6 抑菌劑的選擇研究實驗（g）

表7 處方評價

從表7可知，以HPMC為基質、硼酸－硼砂為緩沖對的處方中，除以苯扎溴氨和苯扎氯銨為抑菌劑的處方產(chǎn)生白色沉淀、外觀性狀不符合規(guī)定外，其他處方性狀均良好。雖然以尼泊金酯類為抑菌劑的處方外觀性狀良好，但通過紫外掃描發(fā)現(xiàn)尼泊金酯類抑菌劑干擾芐達賴氨酸的最小吸收，因此，尼泊金類不能作為芐達賴氨酸眼用凝膠的抑菌劑。而以三氯叔丁醇為抑菌劑制備的樣品pH值不穩(wěn)定，制得處方當日測得的 pH值為 7.40，在室溫下放置 5、10、15 d，pH分別為7.32、7.26、7.11，pH值呈下降趨勢。因此，三氯叔丁醇也不宜作為芐達賴氨酸眼用凝膠的抑菌劑。

綜合考慮，選擇硫柳汞作為芐達賴氨酸眼用凝膠的抑菌劑。

2.1.6 滲透壓調節(jié)劑的篩選 根據(jù)規(guī)定滲透壓調節(jié)劑為NaCl或葡萄糖，參考《中國藥典》二部（2005年版）芐達賴氨酸滴眼液標準[6]與莎普愛思說明書[7]中所選用的滲透壓調節(jié)劑為NaCl，因此，本研究也采用NaCl作為芐達賴氨酸眼用凝膠的滲透壓調節(jié)劑。

2.2 制備工藝

2.2.1 稱取處方量的基質，在快速攪拌下緩緩將基質加入到適量注射用水中使其分散均勻。得溶液A，備用。

2.2.2 稱取處方量的緩沖鹽、滲透壓調節(jié)劑、抑菌劑，加適量注射用水攪拌使其溶解（必要時可加熱溶解），稱取處方量的主藥，加入到上述溶液中攪拌溶解。得溶液B，備用。

2.2.3 將溶液A、B混合均勻，補充注射用水至全量，除菌過濾，灌裝，即得。

2.2.4 影響因素試驗及處方的確定過程如下：從上述眾多的處方中，選擇外觀性狀（無色澄明液體）、pH（6.8～7.8）和毫滲壓摩爾比（0.90～1.10）均符合要求的處方進行影響因素試驗?？梢?，符合要求的共有三個處方，分別是處方7、8和處方9。見表8。其中影響因素的試驗過程，見表9～14。

表8 良好處方

表9 處方7影響因素第5天

表10 處方7影響因素第10天

表11 處方8影響因素第5天

表12 處方8影響因素第10天

表13 處方9影響因素第5天

表14 處方9影響因素第10天

從上述三個處方的影響因素試驗可以得出一個結論，處方7、8、9制得的凝膠劑都相當穩(wěn)定，從經(jīng)濟角度出發(fā)，以HA為基質的凝膠劑成本遠遠高于以HPMC為基質的凝膠劑，但是從另一方面，HA有作為眼用制劑媒介加在眼溶液里，可以構成一層膜覆蓋于角膜內皮表面，有利于眼組織對藥物持久而有效的吸收，使其生物利用度明顯增加的特性，所以本凝膠基質采用HPMC和HA聯(lián)合使用，最終決定采用處方9進行后續(xù)的質量研究。

2.3 芐達賴氨酸眼用凝膠的質量控制

采用處方9制備三批樣品（批號分別為080501、080502、080503）進行質量研究。

2.3.1 pH值檢查 pH值應在6.8～7.8范圍內。實驗中制備的處方9的三批樣品的pH分別為7.33、7.32、7.33，符合要求。

2.3.2 滲透壓 眼球能適應的毫滲壓摩爾比的范圍為0.90～1.10。實驗中制備的處方9的三批樣品的毫滲壓摩爾比分別為 0.99、1.00、0.99，符合要求。

2.3.3 性狀 實驗中制備的處方9的三批樣品的外觀性狀均為無色澄明液體。

2.4 芐達賴氨酸眼用凝膠的含量測定與方法學考察

2.4.1 色譜條件 依利特 C18（5μm，4.6 mm×150 mm）色譜柱；流動相為甲醇∶水∶冰醋酸（64∶36∶0.5）內含 0.05 mmol/L 的庚烷磺酸鈉；流速：1.0ml/min；檢測波長：λ＝307 nm；柱溫：室溫[8]。

2.4.2 對照品及樣品溶液的制備 ①對照品溶液的制備：取芐達賴氨酸對照品（100561-200401，中國藥品生物制品檢定所）適量，精密稱定，加水制成每1 m l含5 mg芐達賴氨酸對照品的溶液，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，供HPLC分析用。②樣品溶液的制備：取處方9的三批樣品適量，分別加水稀釋制成0.2mg/m l的溶液，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，供HPLC分析用。③檢測波長的選擇：取芐達賴氨酸對照品適量，加水制成5mg/ml的溶液，在200～400 nm波長范圍內進行紫外掃描，在307 nm處有最大吸收。參照《中國藥典》二部（2005年版）依然選擇307 nm作為檢測波長。

2.4.3 流速考察 分別以0.8、1.0、1.2 ml/min的流速對樣品進行流速考察，均符合規(guī)定。因此仍選用1.0 ml/min作為該樣品含量測定的流速。

2.4.4 色譜柱考察 迪馬 C18（150 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱和依利特 C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）色譜柱，分別進樣，峰形均對稱，柱效高，但迪馬色譜柱的出峰時間為11min，依利特色譜柱的出峰時間為5.9min，因此選用依利特色譜柱。

2.4.5 系統(tǒng)適用性試驗 分別制備含芐達賴氨酸0.1mg/ml的對照品溶液及樣品溶液，進樣20μl，色譜圖見圖1、2。可見兩組溶液峰形均對稱，柱效高，保留時間分別為5.982、5.998min，理論塔板數(shù)以芐達賴氨酸峰計算分別為5 303、5 333。

2.4.6線性關系考察 精密稱定芐達賴氨酸對照品適量，加水制成3mg/m l的溶液，搖勻，作為儲備液。分別量取儲備液1、2、3、4、5、6、7m l置 50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，供HPLC分析用。分別進樣20μl，記錄色譜圖。以芐達賴氨酸的峰面積（A）對濃度（C）作線性回歸，計算回歸方程。結果表明，采用本法測定含量，芐達賴氨酸在0.06～0.43mg/ml的濃度范圍內，主峰的峰面積與濃度呈良好的線性關系，線性方程為 A＝1.77×107C+67 097，r＝0.999 8，n＝7。見圖3。

2.4.7 精密度試驗 精密量取樣品溶液（0.2mg/ml），進樣20μl，重復6次，測得芐達賴氨酸的峰面積RSD為0.32%。儀器精密度良好。

2.4.8 回收率試驗 取芐達賴氨酸原料約4、5、6mg，各3份，分別精密稱定，置25 ml容量瓶，加不含芐達賴氨酸的空白輔料，稀釋至刻度，搖勻。在307 nm的波長處分別測定峰面積，計算回收率。見表15。

表15 加樣回收率考察表

結果表明，采用本法測定芐達賴氨酸的含量準確度高，能夠符合含量測定的要求。

2.4.9 最低檢測限考察 取對照品溶液，反復稀釋，稀釋至濃度為 0.015μg/m l時，信噪比（S/N）=3，即最低檢出濃度為0.015 μg/ml，最小檢測量為 3.024×10-7g。 見圖 4。

2.4.10 樣品含量的測定 對處方9的三批樣品進行含量測定，測定結果如下：批號為080501的樣品含量為104.7%，批號為0080502的樣品含量為98.3%，批號為080503的樣品含量為96.5%，含量測定均符合要求，平均含量為99.8%。

通過對多種基質、緩沖對、抑菌劑等的篩選及制備工藝的確定，最終制備出了性狀良好，性質穩(wěn)定的凝膠劑。最終通過實驗得到最佳測定參數(shù)為：以依利特C18（5μm，4.6mm×150mm）色譜柱為固定相，以甲醇-水-冰醋酸（64∶36∶0.5），內含0.5mmol/L庚烷磺酸鈉為流動相，紫外檢測波長307 nm，流速為1.0m l/min，柱溫為室溫，外標法定量測定。方法學驗證表明芐達賴氨酸在0.06～0.43 mg/ml范圍內線性關系良好，r=0.999 8，加樣回收率為99.5%，RSD為1.2%（n=9）。 精密度、回收率高，最低檢出限度、重現(xiàn)性、線性關系良好。試驗結果表明該法適用于芐達賴氨酸的含量測定。

3 討論

結果顯示，處方1、2、3的pH雖然可以通過NaOH來調整至適宜范圍內（6.8～7.8），但毫滲壓摩爾比在未加滲透壓調節(jié)劑的情況下就已經(jīng)遠遠超出了范圍（0.90～1.10）。且泊洛沙姆-188單獨溶于水后就能夠產(chǎn)生滲透壓，因此無法通過減少泊洛沙姆-188的量來降低毫滲壓摩爾比值。在今后的研究中，可以再通過研究其他基質來消除卡波姆與芐達賴氨酸的配伍禁忌。

凝膠的制備工藝大致相同，在制備凝膠基質時要注意使基質充分溶解后，再與主藥及其他輔料混合均勻。由于基質的性能易受溫度、pH等因素的影響，制備時更應考慮到這些影響產(chǎn)品質量的重要因素。而該類凝膠用于人眼，必須考慮到其安全、有效、可行的特點。應用與主藥相適合的凝膠基質將原來的滴眼液制備成眼用凝膠后，大大地提高了藥物的順應性和生物利用度，并起到降低刺激性的作用[9]，使患者在使用過程中感到更加舒適。但在基質的選擇與篩選過程中，仍需要通過大量的試驗來取舍。

本研究通過多次的試驗，篩選出了比較合理的處方及工藝，制備得到的眼用凝膠劑性狀良好，性質穩(wěn)定，pH及滲透壓均能符合要求，達到了預期的結果；且芐達賴氨酸有極好的抗白內障作用，將其設計成凝膠劑能夠很好地提高藥物有效利用率，延長藥物作用時間，使得其在晶狀體內濃集，發(fā)揮良好的抗白內障作用，這在臨床用于治療白內障現(xiàn)有的藥物中極為少見的，且有些藥物甚至不能到達晶狀體，因此制備出芐達賴氨酸眼用凝膠意義深遠。

[1]嚴漢英.抗白內障新藥芐達賴氨酸的研究進展[J].中國新藥與臨床雜志,1999,18(4):240-243.

[2]王艷,王柏.原位凝膠在滴眼劑中的應用[J].中國藥業(yè),2008,17(1):19-20.

[3]陸偉,蔣新國.卡波姆和聚卡波菲在藥劑學中應用的新進展[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2002,22(8):491-492.

[4]舍斯基,韋勒.藥用輔料手冊[M].北京:化學工業(yè)出版社,2005.

[5]凌沛學,員象敏,張?zhí)烀?玻璃酸鈉在眼用溶液中的作用[J].中南藥學,2004,2(4):229-231.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].2部.北京:化學工業(yè)出版社,2005.

[7]芐達賴氨酸滴眼液(商品名:莎普愛思)說明書.浙江莎普愛思制藥有限公司.國藥準字H19890101.

[8]徐宏祥,胡正國.離子對-反相高校液相色譜法測定芐達賴氨酸及其滴眼液的含量[J].藥物分析雜志,2002,20(4):243-244.

[9]魏剛,徐暉,鄭俊民.原位凝膠的形成機制及在藥物控制釋放領域的應用[J].中國藥學雜志,2003,38(8):564-568.

Preparation and quality study of bendazac lysine eye gel

WANG Ping,KONG Feifei,TAN Xingqi*,GUO Liangjun,ZHENGWeiThe 98th Hospital of PLA,Zhejiang Province,Huzhou 313000,China

Objective:To study the preparation method and quality control of bendazac lysine eye gel.MethodsHA or HPMC or both combined were used as gelmatrix,sodium chloride iorder was added to regulate the osmotic pressure,the boric acid-borax was used to adjust pH,and sodium mercurothiolate was used as bacterial inhibitor,HPLC was adopted to determine the content ofmain drugs and study the stability of the formulation.ResultsThe content of bendazac lysine showed good linear relationship over the range of 0.06-0.43mg/m l(r=0.999 8).The average recovery was 99.5%with RSD of 1.2%(n=9).ConclusionThe processof preparation is simple and reliable,and the quality of the ophthalmic gel is stable.

Bendazac lysine;Eye gel;HPLC

R988.1

A

1673-7210（2011）08（c）-060-06

王萍，藥師，主要從事藥品管理工作。

譚興起，副主任藥師，主要從事天然藥物化學工作。

2011-00-00）