鄭州韓都藥業(yè)集團有限公司 袁銳利

輔仁藥業(yè)集團有限公司 丁紅強

HPLC法測定銀翹解毒丸中綠原酸的含量

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銀翹解毒丸是由金銀花和連翹制成的丸劑，具有清熱、解毒、消炎的功能。用于急慢性咽炎、上呼吸道感染。但該制劑現(xiàn)行質(zhì)量標準無含量測定項目，為了有效控制藥品質(zhì)量，確保該制劑的療效，本文，筆者以方中主藥金銀花的有效成分綠原酸為定量控制指標，采用HPLC法測定銀翹解毒丸中綠原酸的含量，方法簡便、準確。

一、儀器和試藥

日本島津SPD-20A高效液相色譜儀；德國BP-211D電子分析天平；KQ-250DB超聲波清洗器。

綠原酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供（批號110753-200413，供含量測定用）；流動相所用乙腈為北京四友化學試劑廠色譜純；水為純化水；其他試劑均為分析純。

銀翹解毒丸3批（寧夏啟元國藥有限公司，批號0910081；太極集團重慶桐君閣藥廠有限公司，批號090618；吉林市雙士藥業(yè)有限公司，批號20090115）。

二、方法與結(jié)果

1.色譜條件色譜柱為Kromasil C18（5μm，4.6mm×250 mm)，流動相為乙腈-0.4%磷酸（10∶90），檢測波長327nm，流速1.0m l·min-1，柱溫25℃，進樣量20μl。

2.溶液的制備與測定。

（1）對照品溶液的制備。取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含40μg的溶液，即得。

（2）供試品溶液的制備。取重量差異項下的本品，研細，取約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇50m l，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，再精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

（3）空白對照溶液的制備。以相同的處方比例，制得不含金銀花的空白樣品。按（2）項下方法制成空白對照溶液。

（4）測定。分別精密吸取上述3種溶液各20μl，按上述色譜條件分別測定。結(jié)果表明，供試品色譜圖中呈現(xiàn)與綠原酸對照品保留時間相應(yīng)的色譜峰，而空白對照無干擾。

3.線性關(guān)系考察。精密稱取綠原酸對照品3.98mg，置25m l棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液；精密吸取對照品儲備液2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取上述溶液5μl，10μl，15μl，20μl，25μl，30μl進樣測定，記錄峰面積。以濃度（C）對峰面積（A）進行線性回歸，得回歸方程為A＝-12.99（r=0.999，n=6）。結(jié)果表明，綠原酸在0.159～0.955μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

4.精密度實驗。精密吸取同一對照品溶液20μl，連續(xù)進樣5次，分別測得峰面積結(jié)果見表1，經(jīng)過計算得到峰面積平均值為2791，RSD=0.5%。

表1 精密度實驗結(jié)果

5.穩(wěn)定性實驗。精密吸取上述供試品溶液20μl，于2h、4h、6h、8h、10h后測定峰面積，結(jié)果峰面積幾乎不變，表明供試品溶液至少在10h內(nèi)穩(wěn)定。

6.重復(fù)性實驗。其結(jié)果見表2。精密量取同一樣品5份，照2（2）項下操作，測得含量平均值為9.84mg/g，RSD為0.6%（n=5）表明本法重復(fù)性好。

表2 重復(fù)性實驗結(jié)果

7.回收率實驗。精密稱取同一已知含量樣品約0.5g共5份，定量加入適量的綠原酸對照品，照2（2）項下操作，并按上述色譜條件測定。結(jié)果表明，均回收率為99.8%，RSD為0.7%（n=5）。

8.樣品測定。按上述測定方法對3個廠家樣品中綠原酸含量進行測定，結(jié)果表明，不同廠家的樣品中綠原酸的含量差異太大。表明綠原酸含量沒有統(tǒng)一的限度標準。

三、討論

1.取綠原酸對照品進行紫外掃描（200～400nm），結(jié)果在327.0nm波長處有最大吸收，實驗選擇327nm作為檢測波長。

2.參照銀黃口服液的色譜條件進行檢測，其流動相中乙腈的比例不得大于10%，否則樣品色譜圖的分離效果差。

3.由二、8項可見不同廠家的銀翹解毒丸中綠原酸的含量差異太大，而現(xiàn)在對其含量沒有統(tǒng)一的限度標準。建議今后在修改標準時應(yīng)考慮增加含量測定項，以確保藥品的質(zhì)量，保證臨床用藥安全有效。

4.方法學研究表明，本測定方法操作簡單，結(jié)果準確，重復(fù)性好，空白無干擾，可作為銀翹解毒丸質(zhì)量標準含量測定方法。