上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院（200020） 劉濤 袁建明 沈建康 郁驍珩 王天翔

CD27屬I型跨膜糖蛋白，表達(dá)于75%的T細(xì)胞（CD4+和CD8+均有）、15%～45%的胸腺細(xì)胞、部分B細(xì)胞以及NK細(xì)胞等，活化的T細(xì)胞CD27表達(dá)增加[1]。CD27配體（CD27L，CD70）是II型跨膜糖蛋白，屬TNF配體超家族。CD27L的表達(dá)具有局限性，只見于活化的T細(xì)胞和B細(xì)胞。CD27-CD27L可以作為第二信號促進(jìn)T細(xì)胞增殖及分化過程[2]，在T-B細(xì)胞相互作用中起著非常關(guān)鍵的作用[3]，對NK細(xì)胞的功能也有調(diào)節(jié)作用。已經(jīng)證明，在IL-2或IL-12存在的條件下，CD27-CD27L結(jié)合可以增強NK細(xì)胞與靶細(xì)胞的粘附，促進(jìn)NK細(xì)胞對靶細(xì)胞的殺傷。

本研究擬采用ELISA方法對42例胃癌患者血清中CD27和CD27L的表達(dá)進(jìn)行檢測，探討CD27和CD27L的表達(dá)與胃癌臨床及病理指標(biāo)的相關(guān)性，并對其臨床意義做一研究。

附表 血清CD27和CD27L的表達(dá)

1 對象與方法

1.1 研究對象 血清標(biāo)本取自2008年7月～2008年12月在上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院手術(shù)的胃癌患者。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行過放化療及抗腫瘤藥物等治療，均有完整的臨床及病理資料。納入的胃癌患者共42例，其中女性16人，男性26人，平均年齡60.02±12.77歲。病理組織學(xué)類型：低分化腺癌24例，中分化腺癌10例，高分化腺癌8例。病理分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期12例，Ⅲ期20例，Ⅳ期5例。浸潤深度（T）：T12例，T24例，T329例，T47例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者26例：其中N116例，N27例，N33例。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（N0）16例。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者（M1）1例。另外納入同期正常對照者血清標(biāo)本40例。病例組和對照組間年齡和性別構(gòu)成沒有顯著性差異，具有可比性。

1.2 研究方法 鼠抗人CD27和CD27L單克隆抗體為CST公司產(chǎn)品，ELISA試劑盒為ADL公司產(chǎn)品。采用ELISA方法，具體步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明執(zhí)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 使用SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。P＜0.05表示有統(tǒng)計學(xué)差異。一般計量資料數(shù)據(jù)描述采用x±s表示，滿足正態(tài)和方差齊性的計量資料兩組間比較采用t檢驗（tTest），多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），否則采用非參數(shù)統(tǒng)計中的秩和檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析方法；缺失值不納入統(tǒng)計。

2 結(jié)果

2.1 血清CD27和CD27L的表達(dá) 胃癌患者組血清CD27的平均表達(dá)濃度為5.12±1.23pg，CD27L的平均表達(dá)濃度為0.92±0.13ng。正常對照組血清CD27的平均表達(dá)濃度為8.66±6.67pg，CD27L的平均表達(dá)濃度為4.93±3.88ng。見附表。t檢驗結(jié)果表明，胃癌患者組血清CD27和CD27L的表達(dá)顯著低于正常對照者（P=0.000）。在胃癌患者中，對不同病理和臨床指標(biāo)間采用單因素方差分析，結(jié)果表明，在不同病理組織學(xué)類型中血清CD27和CD27L的表達(dá)無顯著性差異；在不同病理分期中血清CD27的表達(dá)無顯著性差異，血清CD27L的表達(dá)除Ⅲ期顯著高于Ⅱ期外（P=0.017），其余無顯著差異；在不同浸潤深度中血清CD27和CD27L的表達(dá)無顯著差異；在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中血清CD27的表達(dá)除N1顯著高于N2（P=0.022）外，其余無顯著差異，血清CD27L的表達(dá)無顯著差異；考慮到遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者只有1例，本研究中未進(jìn)行CD27和CD27L與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移之間的統(tǒng)計分析。

2.2 相關(guān)分析 Spearman相關(guān)分析表明，血清CD27和CD27L分別與病理類型、病理分期及TNM分期無顯著相關(guān)性。血清CD27和CD27L之間也無顯著相關(guān)性。見附圖。

3 討論

目前對CD27-CD27L的研究大多集中在免疫學(xué)方面，研究過程中發(fā)現(xiàn)此共刺激受體-配體分子對自身免疫性疾病、炎癥及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展起著促進(jìn)作用，選擇性干預(yù)這條共刺激通路能夠減緩這些疾病的發(fā)展，因此其可能成為特異性的治療靶標(biāo)[4]。目前國內(nèi)外對于CD27-CD27L和胃癌之間關(guān)系的研究還較少。本研究結(jié)果表明，胃癌患者的血清CD27和CD27L的表達(dá)顯著低于正常對照者。Lorenz MG等[5]的研究首次發(fā)現(xiàn)，一個表達(dá)CD27L的重組病毒疫苗模型具有顯著的抗腫瘤免疫特性，可能與其提高T細(xì)胞效應(yīng)、介導(dǎo)抗腫瘤免疫有關(guān)。Couderc B等[6]的研究也表明了腫瘤細(xì)胞上表達(dá)CD27L共刺激分子能夠提高抗腫瘤免疫，減緩腫瘤的生長。這或許可以解釋本研究中胃癌患者血清CD27和CD27L的表達(dá)顯著低于正常對照者。Carpenter EL等[7]研究表明，患者體內(nèi)B細(xì)胞穩(wěn)態(tài)遭到破壞與外周血CD27+B細(xì)胞減少有顯著的相關(guān)性，而B細(xì)胞穩(wěn)態(tài)發(fā)生紊亂導(dǎo)致的免疫系統(tǒng)功能受損在包括黑色素瘤在內(nèi)的腫瘤發(fā)生過程中起了潛在的重要作用。近來的一項研究[8]也顯示，CD27-CD27L共刺激途徑在白血病的免疫治療中維持了效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞毒性，在有效的免疫治療中起到十分關(guān)鍵的作用。

本研究結(jié)果顯示，血清CD27和CD27L在不同的病理類型中并無顯著性差異，提示血清CD27和CD27L的表達(dá)同病理類型無關(guān)。在不同病理分期中，血清CD27L的表達(dá)Ⅲ期顯著高于Ⅱ期，但Ⅳ期并無繼續(xù)升高的趨勢，結(jié)合Spearman相關(guān)分析，無法得出CD27L同病理分期之間有顯著相關(guān)性的結(jié)論。在TNM分期中，血清CD27的表達(dá)N1顯著高于N2，提示血清CD27的表達(dá)和不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度之間可能存在一定的關(guān)聯(lián)，但Spearman相關(guān)分析并未得出顯著性結(jié)論，仍需更大樣本的試驗來進(jìn)一步明確目前的結(jié)果。本研究中的相關(guān)分析尚未得出CD27和CD27L與病理類型、病理分期及TNM分期之間的顯著相關(guān)性。

本研究采用ELISA方法檢測血清中CD27和CD27L的表達(dá)，若進(jìn)一步結(jié)合免疫組化技術(shù)檢測胃癌組織中的CD27和CD27L，則可得出更加可信的結(jié)論。