北京四環(huán)科寶制藥有限公司（100070） 曹相林 陳婧 魏墨璽

二甲雙胍格列吡嗪片為治療糖尿病的復(fù)方制劑，包括格列吡嗪和鹽酸二甲雙胍兩種藥物成分，兩種藥物成分的抗糖尿病作用機(jī)制相互補(bǔ)充，提高了對血糖的控制。其有關(guān)物質(zhì)成分的測定方法在USP31[1]中有收載，本研究采用USP31中有關(guān)物質(zhì)的測定方法檢測二甲雙胍格列吡嗪片時，發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)峰的分離度達(dá)不到要求，不能對雜質(zhì)有效檢出。因此本研究通過大量試驗(yàn)建立了一種能夠有效檢測復(fù)方制劑二甲雙胍格列吡嗪片有關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜法，并申請了專利。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；CP225D型電子天平（德國賽多利斯公司）；4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰氨基)乙基)-苯磺酰胺對照品（批號：100282-200001）、雙氰胺對照品（批號：100206-200302）、鹽酸二甲雙胍對照品（批號：100664-200602）、格列吡嗪對照品（批號：100281-200602）均購自中國藥品生物制品鑒定所；乙腈為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 HPLC測定方法的建立與驗(yàn)證

2.1 色譜條件的建立 參考中國藥典2010年版[2]中關(guān)于鹽酸二甲雙胍和格列吡嗪的有關(guān)物質(zhì)色譜條件，初步確定采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，在同一色譜條件下檢查二甲雙胍格列吡嗪片的有關(guān)物質(zhì)。進(jìn)行了如下篩選：①磷酸二氫銨溶液（稱取1.15g磷酸二氫銨和4.32g辛烷磺酸鈉，加水至1000ml，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.0±0.05）-乙腈（80：20）為流動相。檢測波長225nm。柱溫：30℃。②將①項(xiàng)下流動相的比例調(diào)整為85：15。③以磷酸二氫銨溶液（0.575g磷酸二氫銨和4.32g辛烷磺酸鈉，加水1000ml，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.0±0.05）-乙腈（83：17）為流動相。檢測波長225nm。柱溫：30℃。④將③項(xiàng)下流動相的比例調(diào)整為84：16。結(jié)果發(fā)現(xiàn)④的色譜條件使各雜質(zhì)峰的分離度達(dá)到要求。

2.2 檢測波長的確定 分別取兩種主藥及其特殊雜質(zhì)適量，加流動相配制成適宜濃度的溶液。分別于200～400nm波長范圍內(nèi)掃描，四種物質(zhì)均在225nm附近有最大吸收，并且格列吡嗪和4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰氨基)乙基)-苯磺酰胺在275nm均有較強(qiáng)吸收。結(jié)合破壞試驗(yàn)的結(jié)果，為減小鹽酸二甲雙胍對格列吡嗪和4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰氨基)乙基)-苯磺酰胺測定的干擾，最終確定鹽酸二甲雙胍有關(guān)物質(zhì)測定的檢測波長為225nm，格列吡嗪有關(guān)物質(zhì)的檢測波長為275nm。

2.3 最小檢測限的確定 通過試驗(yàn)確立了雙氰胺和4-(2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰氨基)乙基)-苯磺酰胺的最小檢測限分別為0.1ng和0.5ng。靈敏度符合要求。

2.4 輔料干擾試驗(yàn) 經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證選用本研究中的HPLC測定方法，空白輔料不干擾樣品的雜質(zhì)檢測。

2.5 破壞試驗(yàn) 取格列吡嗪原料、二甲雙胍格列吡嗪片、鹽酸二甲雙胍與空白輔料、鹽酸二甲雙胍原料、格列吡嗪與空白輔料分別進(jìn)行酸、堿、氧化、高溫及光照等試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，在本研究建立的色譜條件下，主峰與有關(guān)雜質(zhì)及降解物的雜質(zhì)峰能夠完全分離，說明此色譜條件可以完全滿足樣品有關(guān)物質(zhì)的測定。

2.6 樣品測定 按本研究中建立的HPLC測定方法和USP31分別對同一批二甲雙胍格列吡嗪片進(jìn)行了檢測。對樣品中鹽酸二甲雙胍有關(guān)物質(zhì)中已知雜質(zhì)雙氰胺和未知雜質(zhì)的單雜和總雜的檢測結(jié)果表明，新建立的HPLC測定方法均比USP31的方法檢測靈敏度高。對樣品中格列吡嗪有關(guān)物質(zhì)的測定結(jié)果表明，新建立的HPLC測定方法能夠使已知雜質(zhì)苯磺酰胺有效檢出，分離度達(dá)到要求；而在USP31方法的色譜條件下，已知雜質(zhì)苯磺酰胺和格列吡嗪出峰時間非常接近，兩者基本重合為一個峰，不能使苯磺酰胺有效檢出。結(jié)果見附表。

附表 二甲雙胍格列吡嗪片有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

3 討論

本研究通過進(jìn)行流動相的篩選、檢測波長的確定、最小檢測限的確定、輔料干擾試驗(yàn)、破壞試驗(yàn)及與美國藥典方法的對比檢測實(shí)驗(yàn)等相關(guān)研究，重新建立了二甲雙胍格列吡嗪片的有關(guān)物質(zhì)測定方法，該方法快速準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于二甲雙胍格列吡嗪片的質(zhì)量控制。