崔麗艷,胡曉舟,張文靜,張 捷

(北京大學(xué)第三醫(yī)院檢驗(yàn)科,北京100191)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種常見的慢性炎癥性疾病,病因不是很清楚,主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)受損。關(guān)節(jié)內(nèi)及關(guān)節(jié)外自身抗體的存在是RA的特征之一。自身抗體的檢測(cè)如類風(fēng)濕因子是最常用的診斷和預(yù)測(cè)指標(biāo)[1]。RA患者對(duì)自身抗體的反應(yīng)是不同的。大約70-80%的RA患者體內(nèi)存在RF,其他自身抗體比如抗C1q抗體[2]和抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體[3]則很少出現(xiàn)。然而,RF也在其他自身免疫性疾病、感染性疾病和3-5%的健康人(老年人時(shí)增加到10-30%)血清中存在[4],表明類風(fēng)濕因子對(duì)RA不是很特異。葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶(GPI)是一種廣泛表達(dá)并且具有多種功能的蛋白質(zhì),它是能量循環(huán)過程和糖分解過程中必不可少的胞漿酶,同時(shí)它又作為細(xì)胞外信號(hào)傳導(dǎo)分子。眾所周知,GPI是自分泌運(yùn)動(dòng)因子和神經(jīng)細(xì)胞因子,可能在腫瘤和自身免疫方面起著一定的作用[。5,6另]外,文獻(xiàn)[7]報(bào)道,GPI可以引起DBA/1小鼠關(guān)節(jié)炎,支持GPI在小鼠的自身免疫過程中發(fā)揮著一些直接作用。因此本研究通過分析RA患者血清中GPI、RF、CRP、ESR的獨(dú)立檢測(cè)的水平以及聯(lián)合檢測(cè)來探討其對(duì)于RA診斷的意義。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 RA組 選擇2007年12月至2008年9月北京大學(xué)第三醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診和住院患者39例,其中男性13例,女性26例,年齡20-83歲,平均年齡(61±16)歲,所有患者均符合美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ACR)1987年修訂的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.1.2 非RA組 同期在我院門診就診和住院的患者52例,其中男性18例,女性34例,年齡19-83平均年齡(54±17)歲,均符合國(guó)內(nèi)或國(guó)際相應(yīng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者23例,混合型結(jié)締組織病2例,強(qiáng)直性脊柱炎6例,干燥綜合征10例,未分化結(jié)締組織病3例,多發(fā)性肌炎/皮肌炎5例,脊柱關(guān)節(jié)病2例,腸病性關(guān)節(jié)炎1例。

1.1.3 健康對(duì)照組 我院體檢健康者32例,其中男性10例,女性22例,年齡26-81平均年齡(53±16)歲。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本的采集與保存 所有病例均空腹采集靜脈血3 ml,分離血清,-80℃冰箱備用。所有標(biāo)本一次凍融后測(cè)定。

1.2.2 試劑及測(cè)定方法 GPI試劑盒和抗原標(biāo)準(zhǔn)品均由上海北加生化試劑公司提供,采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中GPI;RF-IgM和CRP所有試劑均由貝克曼庫爾特公司提供,方法為速率散射比濁法,在IMMAGE雙光徑免疫濁度分析儀上完成測(cè)定;ESR為動(dòng)態(tài)血沉測(cè)定法,所用血沉儀由北京健峰公司提供。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以±s表示,不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)(25%-75%分位數(shù))表示。符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)的組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)的組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)。診斷的敏感性、特異性、準(zhǔn)確性通過計(jì)算得到,各項(xiàng)指標(biāo)的診斷價(jià)值的比較通過ROC曲線得到。用配對(duì)資料McNemar χ2檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)分析,評(píng)價(jià)診斷指標(biāo)之間的差異及相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 RA組與非RA組、對(duì)照組之間各項(xiàng)指標(biāo)的比較 RA組GPI、RF、CRP、ESR 水平均明顯高于非 RA組和正常對(duì)照組,差異具有顯著性(P＜0.05)。各指標(biāo)在非RA組和正常對(duì)照組之間比較沒有差異(P＞0.05),各組之間性別以及年齡進(jìn)行比較,統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒有顯著差異(P＞0.05),說明在病例的選擇上各組之間沒有差異。結(jié)果見表1。

2.2 GPI與 RF、CRP、ESR的相關(guān)性分析 GPI與RF具有明顯的正相關(guān)(r=0.576 P＜0.05),GPI與ESR、CRP也具有明顯的正相關(guān)(r=0.411 P＜0.05;r=0.422 P＜0.05)。

表1 患者的一般資料

2.3 GPI、RF、CRP及 ESR的 ROC曲線 GPI、RF、CRP及ESR四項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的曲線下面積分別為0.821、0.783、0.687、0.709,GPI與 CRP、ESR 的曲線下面積比較均有顯著性差異,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。其余各檢測(cè)項(xiàng)目間比較均無顯著差異(P＞0.05)。見圖1及表2。

圖1 GPI、RF、CRP及ESR的ROC曲線

2.4 診斷的敏感性、特異性及準(zhǔn)確性分析 根據(jù)ROC曲線,以敏感性及特異性之和最大的點(diǎn)作為診斷界值,GPI、RF、CPR及ESR診斷 RA的敏感性、特異性及準(zhǔn)確性見表3。GPI與RF聯(lián)合檢測(cè)的敏感性、特異性及準(zhǔn)確性分別為89.7%[80.2%-99.3%] 、72.6%[58.6%-86.6%]和 78.1%[65.1%-91.0%]。四項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)的敏感性無顯著性差異(P＞0.05),特異性及準(zhǔn)確性GPI與RF明顯高于CRP與ESR,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),但是GPI與RF之間以及CRP與ESR之間均無顯著性差異(P＞0.05)。GPI與RF聯(lián)合檢測(cè)的敏感性明顯高于二者單獨(dú)檢測(cè)(P＜0.05),特異性沒有顯著差異(P＞0.05),準(zhǔn)確性明顯高于RF(P＜0.05)。

表2 各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的ROC曲線分析

表3 各項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)診斷RA的敏感性、特異性及準(zhǔn)確性

3 討論

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的發(fā)病是多因素作用的結(jié)果,包括遺傳因素可能的作用、環(huán)境因素、免疫機(jī)制和使炎癥發(fā)生的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的作用[8-11]。然而疾病發(fā)生發(fā)展的機(jī)制仍然不是很清楚。RA和特定的HLA-DR,CD4+T細(xì)胞的關(guān)系是在關(guān)節(jié)炎的啟動(dòng)和發(fā)展過程中起作用[12]。自身抗體在RA和其他各種炎癥性關(guān)節(jié)炎中的病理作用還不是很明確,但是使用T細(xì)胞受體轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠模型K/BxN進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶(GPI)可以作為B細(xì)胞和T細(xì)胞的自身抗原,將抗GPI抗體轉(zhuǎn)移到NA?VE小鼠體內(nèi)可以誘導(dǎo)與人類RA特征相似(不是完全相同)的關(guān)節(jié)炎的特征[13]。

研究結(jié)果顯示,RA患者GPI、RF、CRP及 ESR水平明顯高于對(duì)照組。有文獻(xiàn)報(bào)道,對(duì)GPI的自身免疫反應(yīng)可以自發(fā)的誘導(dǎo)K/BXN T細(xì)胞受體轉(zhuǎn)基因小鼠的關(guān)節(jié)炎[7]可以推測(cè)GPI在人類關(guān)節(jié)炎的發(fā)生過程中起了重要作用,同時(shí)也證明了GPI不是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的疾病特異性抗體,而是與廣泛的免疫相關(guān)的炎癥性關(guān)節(jié)炎相關(guān)的一種抗原。阻斷此種抗原的作用可能有助于改善疾病的預(yù)后。

GPI與RF、ESR及CRP具有明顯的正相關(guān),此結(jié)果提示我們?cè)陉P(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程中是多種因素聯(lián)合作用的結(jié)果,文獻(xiàn)[13-15]報(bào)道GPI可以誘導(dǎo)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生,CRP、ESR作為反映類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)炎癥程度的指標(biāo)。這些結(jié)果提示血清中GPI可能參與了關(guān)節(jié)炎癥的發(fā)生。

通過ROC曲線分析,四項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的曲線下面積按由高到低的順序排列分別為GPI(0.821)、RF(0.783)、ESR(0.709)、CRP(0.687),但 GPI與 RF 的曲線下面積比較無顯著性差異。四者單獨(dú)檢測(cè)的敏感性由高到低依次為GPI(0.744)、RF(0.718)CRP(0.718)、ESR(0.692),特異性由高到低的順序?yàn)镚PI(0.774)、RF(0.726)、CRP(0.619)、ESR(0.345),準(zhǔn)確性由高到低依次為 GPI(0.764)、RF(0.724)、CRP(0.650)、ESR(0.455)。而將GPI與 RF聯(lián)合檢測(cè)后診斷的敏感性(0.897)及準(zhǔn)確性(0.781)提高了,特異性(0.726)與單獨(dú)檢測(cè)GPI沒有顯著性差異。敏感性提高,特異性沒有顯著差異,與我們所選擇的聯(lián)合檢測(cè)的方式相關(guān)。單獨(dú)檢測(cè)GPI與以往的RF、CRP、ESR等指標(biāo)相比,沒有明顯的優(yōu)勢(shì),但是將GPI與RF聯(lián)合檢測(cè)提高了診斷的敏感性及準(zhǔn)確性,因此在臨床上我們可以二者聯(lián)合進(jìn)行檢測(cè),對(duì)患者的早期診斷具有重要的意義。但是我們需要收集更多的病例來驗(yàn)證該實(shí)驗(yàn)結(jié)果,并且對(duì)患者進(jìn)行隨訪,觀察該指標(biāo)對(duì)患者預(yù)后判斷的作用,這對(duì)于臨床工作將更有意義。

[1]Bl ? ss S,Engel JM,Bur mester GR.The immunologic homunculus in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum,1999,42(12):2499.

[2]Siegert CE,Daha MR,van derVoort EA,et al.IgG and IgA antibodies to the collagen-like region of C1q in rheumatoid vasculitis[J].Arthritis Rheum,1990,33(11):1646.

[3]Coremans IE,Hagen EC,Daha MR,et al.Antilactoferrin antibodies inpatientswith rheumatoid arthritis are associated with vasculitis[J].Arthritis,Rheum,1992,35(12):1466.

[4]Mageed RA.The RF antigen.In:van Venrooij WJ,Maini RN,editors.Manual of Biological Markers of Disease[M].Dordrecht:Kluwer Academic Publishing,1996.

[5]Sun YJ,Chou CC,Chen WS,et al.The crystal structure of a multifunctional protein:phosphoglucose isomerase/autocrine motility factor/neuroleukin[J].Proc Natl Acad Sci USA,1999,96(10):5412.

[6]Chou CC,Sun YJ,Meng M,et al.The crystal structure of phosphoglucose isomerase/autocrine motility factor/neuroleukin complexedwith its carbohydrate phosphate inhibitors suggests its substrate/receptor recognition[J].J Biol Chem,2000,275(30):23154.

[7]Schaller M,Burton DR,Ditzel HJ.Autoantibodise to GPI in rheumatoid arthritis:linkage between an animal model and human disease[J].Nat Immunol,2001,2(8):746.

[8]Arend WP.The innate immune system in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum,2001,44(10):2224.

[9]Corrigall VM,Panayi GS.Autoantigens and immune pathways in rheumatoid arthritis[J].Crit Rev Immunol,2002,22(4):281.

[10]Hirano T.Revival of the autoantibody model in rheumatoid arthritis[J].Nat Immunol,2002,3(4):342.

[11]Klareskog L,Lorentzen J,Padyukov L,et al.Genes and environment in arthritis:can RA be prevented?[J].Arthritis Res,2002,4(Suppl 3):S31.

[12]Panayi GS,Lanchbury JS,Kingsley GH.The importance of the T cell in initiating and maintaining the chronic synovitis of rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum,1992,35(7):729.

[13]Matsumoto I,Staub A,Benoist C,et al.Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme[J].Science,1999,286(5445):1732.

[14]SchallerM,Burton DR,Ditzel HJ.Autoantibodies to GPI in the rheumatoid arthritis:linkage between an animal model and human disease[J].Nat Immunol,2001,2(8):746.

[15]Maccioni M,Zeder-Lutz G,Huang H,et al.Arthritogenic monoclonal antibodies from K/BxN mice[J].J Exp Med,2002,195(8):1071.