范文成，葉曉紅，常美玲，粘立軍，張國(guó)良

(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北 石家莊 050035)

氫溴酸右美沙芬片為國(guó)家批準(zhǔn)生產(chǎn)的仿制藥，主藥為氫溴酸右美沙芬，輔料為乳糖、淀粉、羧甲淀粉鈉。該品種為鎮(zhèn)咳類藥品，用于上呼吸道感染、支氣管炎等引起的咳嗽，療效顯著，各企業(yè)生產(chǎn)量大，檢驗(yàn)方法多為紫外分光光度法。在檢驗(yàn)工作中，筆者發(fā)現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性差、波動(dòng)大，有些批次含量轉(zhuǎn)移率低。為此，筆者對(duì)可能影響含量測(cè)定結(jié)果的因素進(jìn)行了考察，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(美國(guó)Waters);紫外分光光度計(jì)(日本島津公司);AG285型電子天平(梅特勒－托利多儀器有限公司)。氫溴酸右美沙芬對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100201－200502，供含量測(cè)定用);乙腈為色譜純，其余為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 影響因素試驗(yàn)

2.1.1 樣品制備

按處方工藝分別制備空白樣品和正常樣品，樣品分制粒和不制粒兩種，用蔗糖代替乳糖，其他不變，制備同樣的樣品。共計(jì)8個(gè)樣品，即乳糖空白(不制粒)、乳糖空白(制粒)、蔗糖空白(不制粒)、蔗糖空白(制粒)、乳糖樣品(不制粒)、乳糖樣品(制粒)、蔗糖樣品(不制粒)、蔗糖樣品(制粒)。

2.1.2 空白輔料對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響

對(duì)不同輔料制備的空白樣品用紫外分光光度法[1]分別進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1?？梢?jiàn)，輔料對(duì)測(cè)定結(jié)果影響顯著，最高可達(dá)16%，制粒后的吸收比不制粒高。

表1 不同輔料對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響

2.1.3 不同檢驗(yàn)溶劑(水)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響

對(duì)不同的純化水溶解的樣品用紫外分光光度法進(jìn)行了含量測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2?？梢?jiàn)，高純水的含量最低，樂(lè)百氏純凈水的含量最高;不制粒的蔗糖樣品和乳糖樣品含量無(wú)區(qū)別，制粒后蔗糖比乳糖高約6%(樂(lè)百氏水);乳糖制粒后含量降低9%蔗糖制粒后含量降低3%(樂(lè)百氏水)。試驗(yàn)過(guò)程中還發(fā)現(xiàn)，用高純水和自制純凈水測(cè)定的2個(gè)平行樣結(jié)果差異大，而用樂(lè)百氏純凈水測(cè)定的結(jié)果平行性好(RSD≤2%)，故確定用樂(lè)百氏純凈水進(jìn)行含量測(cè)定。

表2 不同檢驗(yàn)用水對(duì)含量測(cè)定結(jié)果的影響(%)

2.1.4 改進(jìn)檢驗(yàn)用水后效果

對(duì)改進(jìn)檢驗(yàn)用水后生產(chǎn)的8批氫溴酸右美沙芬片進(jìn)行了含量測(cè)定。結(jié)果表明，所有批次含量轉(zhuǎn)移率均在95.0%以上，且測(cè)定結(jié)果平行、準(zhǔn)確性好。

2.2 含量測(cè)定(高效液相色譜法)

2.2.1 色譜條件[2]

色譜柱:C18柱(150mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:以含 0.007mol/L磺基丁二酸鈉二辛酯和0.007 mol/L硝酸銨的乙腈－水(70∶30)溶液(用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至3.4);檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm;進(jìn)樣量:20 μL。理論板數(shù)按氫溴酸右美沙芬計(jì)算應(yīng)不低于2 000，拖尾因子不得大于 2.5。

2.2.2 溶液制備

精密稱取氫溴酸右美沙芬對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含0.15 mg的溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取氫溴酸右美沙芬片20片，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于氫溴酸右美沙芬37.5 mg)，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲使溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):按處方制備空白樣品，照供試品溶液的處理方法制備陰性對(duì)照品溶液。取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各20 μL，注入液相色譜儀。結(jié)果見(jiàn)圖1，表明陰性對(duì)照品溶液在氫溴酸右美沙芬色譜峰位置處無(wú)相應(yīng)峰出現(xiàn)，表明輔料對(duì)樣品含量測(cè)定無(wú)影響。

圖1 高效液相色譜圖

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:取氫溴酸右美沙芬對(duì)照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相溶解并定量稀釋成每1 mL約含1 mg的溶液，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。分別精密量取該溶液 5.0，2.0，1.0，0.5 mL，置 25 mL 量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。取對(duì)照品貯備液及上述稀釋后溶液各20 μL，注入液相色譜儀。以質(zhì)量濃度 X(g/L)對(duì)峰面積 Y作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程 Y=6 644 184 X －4 745.92，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，氫溴酸右美沙芬質(zhì)量濃度在0.02058～1.029 g/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次20 μL，記錄氫溴酸右美沙芬峰面積。結(jié)果的 RSD為0.53%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，在 0，2，4，6，8，12 h 時(shí)分別進(jìn)樣 20 μL，記錄氫溴酸右美沙芬峰面積。結(jié)果的 RSD為1.42%(n=6)，表明供試品溶液在室溫放置12 h穩(wěn)定。

回收率試驗(yàn):取對(duì)照品溶液適量，按供試品制備方法制備供試品溶液，平行制備 6份，分別進(jìn)樣 20 μL。結(jié)果平均回收率為99.75% ，RSD 為 1.10%(n=6)。

重復(fù)性試驗(yàn):精密稱取同一批樣品5份，按擬訂的方法分別進(jìn)行處理，測(cè)定。結(jié)果平均含量為99.6%，RSD為1.20%(n=5)，表明方法的重復(fù)性很好。

2.2.4 樣品含量測(cè)定

取樣品10批，按擬訂的方法制備供試品溶液。取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法按峰面積計(jì)算樣品中氫溴酸右美沙芬的含量。結(jié)果含量平均值為100.5%，RSD為2.13%(n=10)，表明樣品批次間差異小。

3 討論

對(duì)2007年至2009年生產(chǎn)的4批氫溴酸右美沙芬片進(jìn)行了重復(fù)性試驗(yàn)(每個(gè)批號(hào)做8個(gè)樣品)，結(jié)果表明氫溴酸右美沙芬片同一批次含量的波動(dòng)明顯，差異超過(guò)5%，重復(fù)性差。對(duì)以往生產(chǎn)的19批氫溴酸右美沙芬片含量轉(zhuǎn)移率進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，結(jié)果19批成品中有9批含量轉(zhuǎn)移率低于95.0%。

用紫外分光光度法測(cè)定含量時(shí)，輔料空白均有吸收，按主藥100%投料制成片后，總體的含量轉(zhuǎn)移率并未超出100%，可能在生產(chǎn)過(guò)程中主藥與輔料發(fā)生作用，使整體的吸光度無(wú)太大變化，對(duì)不同廠家的輔料是否均有干擾有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

使用不同的檢驗(yàn)用水對(duì)測(cè)定結(jié)果有明顯影響，樂(lè)百氏純凈水穩(wěn)定性較好，結(jié)果較高。氫溴酸右美沙芬溶解度與水的pH或水的制備工藝可能有一定關(guān)系，在現(xiàn)有檢驗(yàn)方法下，用樂(lè)百氏純凈水進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果重現(xiàn)性好。

曾考察了用流動(dòng)相和水分別溶解樣品，結(jié)果表明流動(dòng)相超聲溶解樣品，比水提取完全，故選用流動(dòng)相作為溶劑。

本試驗(yàn)中，還建立了高效液相色譜法測(cè)定氫溴酸右美沙芬片的含量，方法可靠，結(jié)果客觀、準(zhǔn)確，不受輔料干擾，可用于該品種的質(zhì)量控制。

[1]YBH19152006，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:558.