楊人澤，鐘美興，鐘星明（贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，贛州市341000）

蔓荊子為馬鞭草科植物單葉蔓荊Vitex trifoliaL.var.simplicifoliaCham.或三葉蔓荊Vitex trifoliaL.的干燥成熟果實(shí)，為辛涼解表藥，具有疏散風(fēng)熱、清利頭目之功效，常用于治療風(fēng)熱感冒、頭痛等證[1]。單葉蔓荊分布廣、產(chǎn)量大，其道地藥材產(chǎn)區(qū)為山東[2]，江西是其主產(chǎn)區(qū)之一[3]；三葉蔓荊主產(chǎn)于海南、廣西、云南等地。目前藥用的蔓荊子有野生和人工栽培之分，由于生長(zhǎng)環(huán)境的不同，其有效成分的含量差異很大。為了確保其藥理作用和臨床療效，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法[4]對(duì)江西5地10批次蔓荊子藥材中蔓荊子黃素進(jìn)行了含量測(cè)定[5～7]，以為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用蔓荊子[8，9]提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent1100 HPLC儀（美國(guó)惠普公司）；AEL204電子微量分析天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；KQ-500B超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，頻率：40 kHz，功率：500 W）；YLD-2000電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（黃石市恒豐醫(yī)療器械有限公司）。

甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純；蔓荊子黃素（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111554-200903，純度≥98%）；10批蔓荊子藥材（江西南昌1、江西南昌2、江西樟樹(shù)1、江西樟樹(shù)2、江西撫州1、江西撫州2、江西九江1、江西九江2、江西贛州1、江西贛州2）均于2009年8月采自江西各地，經(jīng)鑒定為單葉蔓荊V.trifoliaL.var.simplicifoliaCham.的干燥成熟果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Alltima HPC18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-50mmol·L-1磷酸二氫鉀溶液（磷酸調(diào)pH值為3.0）＝50∶50；流速：1.0m L·m in-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μL。色譜見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.蔓荊子黃素對(duì)照品；B.蔓荊子Fig 1 HPLC chromatogram s A.vitexicarpin control；B.V.trifolia

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取蔓荊子黃素對(duì)照品約10mg，精密稱定，置2m L量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1m L，置50m L量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1m L含0.1 mg的對(duì)照品溶液。0.45μm濾膜濾過(guò)，備用。

2.3 供試品溶液的制備

取蔓荊子藥材中粉約2 g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）適量，置水浴上提取3 h，棄去石油醚液，殘?jiān)鼡]干，再加甲醇適量，索氏提取6 h，甲醇提取液濃縮至約25 m L，用甲醇轉(zhuǎn)移至50m L量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，即得（相當(dāng)于每1m L甲醇中含有蔓荊子藥材40mg）。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取蔓荊子黃素對(duì)照品溶液2、5、7、10、12 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣分析。以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y＝3 743.7X－2 878.2（r＝0.999 4，n＝5）。結(jié)果表明，蔓荊子黃素進(jìn)樣量在0.2～1.2μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定蔓荊子黃素峰面積。結(jié)果，RSD＝1.28%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品適量，共6份，分別按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，RSD＝2.64%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

在室溫條件下，取適量供試品溶液于放置0、2、4、8、12 h時(shí)，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，RSD＝1.2%（n＝5），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

稱取9份已知含量的蔓荊子藥材中粉約1 g，分別按“2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液（蔓荊子黃素含量為0.582 5mg·g-1），經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，各取續(xù)濾液0.5m L，置于25m L量瓶中，分別加入低、中、高濃度的蔓荊子黃素對(duì)照品溶液各適量，以甲醇定容，按上述色譜條件測(cè)定蔓荊子黃素的含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Resultsof recovery tests（n＝9）

2.9 樣品含量測(cè)定

取10批樣品，分別按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，各取10μL按上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，由線性回歸方程計(jì)算樣品中蔓荊子黃素的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

從測(cè)定結(jié)果可以看出，江西不同產(chǎn)地的蔓荊子藥材中蔓荊子黃素的含量差異較大，最高的為0.063 7%，最低的為0.033 4%，含量相差2倍以上。其中含量較高的江西九江1、2號(hào)采自都昌縣的蔓荊子GAP種植基地。蔓荊子主要生長(zhǎng)在海邊沙灘荒洲、河岸沙灘荒洲、鹽堿地三大環(huán)境中。研究結(jié)果表明，生長(zhǎng)在鄱陽(yáng)湖邊的1、2號(hào)樣品及生長(zhǎng)在贛江流域周邊的3、4、5、6號(hào)樣品要比生長(zhǎng)在非河流、湖泊周邊的山區(qū)樣品的含量高。本試驗(yàn)結(jié)果可為蔓荊子的栽培、種植及采摘區(qū)域提供一定的科學(xué)依據(jù)，也表明藥用植物都具有一些特異的適應(yīng)性生境[10]，同時(shí)也驗(yàn)證了江西是蔓荊子的適應(yīng)產(chǎn)區(qū)。

表2 江西不同產(chǎn)地蔓荊子中蔓荊子黃素的含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Results of content determ ination of vitexicarpin in V.trifolia from different producing areas of Jiangxi province（n＝3）

目前在江西都昌縣已建成全國(guó)最大的蔓荊子種植基地，面積達(dá)3萬(wàn)余畝。已有實(shí)驗(yàn)證明，蔓荊子中含有C2－C3雙鍵的黃酮類化合物可以抑制某些癌癥細(xì)胞的增殖[11]，可以看出它在癌癥的防治方面具有很大潛力。綜上，本方法簡(jiǎn)便、快速、線性關(guān)系良好，可為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用蔓荊子提供一定的科學(xué)依據(jù)，但該藥材的開(kāi)發(fā)利用還應(yīng)在種質(zhì)、遺傳特性、生境、化學(xué)成分、藥理藥效方面做更深入的系統(tǒng)研究。

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