張利斌，張曉慶，2，李玉平(.同濟(jì)大學(xué)附屬上海市肺科醫(yī)院藥劑科，上海 200433;2.上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院藥劑科，上海 200080)

抑郁癥是一種以顯著而持久的心境低落為主要特征的綜合癥，已經(jīng)成為危害現(xiàn)代人類健康的重要疾病之一，據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè)，到2020年抑郁癥將成為僅次于心臟病的第二大疾?。?］。目前抑郁癥的治療主要采用化學(xué)藥物，存在療效較低，毒副作用大的弊端。國(guó)內(nèi)外在抗抑郁藥物的研制與開發(fā)方面逐漸重視傳統(tǒng)藥物和天然藥物［2，3］。已有研究發(fā)現(xiàn)異槲皮苷具有一定的抗氧化，抗腫瘤和抗血小板凝集作用［4］。本實(shí)驗(yàn)利用經(jīng)典抗抑郁模型——小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)這兩個(gè)模型對(duì)異槲皮苷及10%含量的異槲皮苷、蘆丁混合物的抗抑郁活性作了初步的研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ICR雄性小鼠，(24±2)g，由第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，飼養(yǎng)在25℃條件下，實(shí)驗(yàn)前穩(wěn)定3 d，自由進(jìn)食水。

1.2 藥物 鹽酸氟西汀(fluoxetine hydrochloride，美國(guó)Lilly公司;純度＞98%)，異槲皮苷、10%異槲皮苷與蘆丁混合物(第二軍醫(yī)大學(xué)天然藥物化學(xué)教研室)，經(jīng)1H NMR，13C NMR確證結(jié)構(gòu)，經(jīng)高效液相檢測(cè)，前者純度大于95%，后者異槲皮苷含量為10%。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 藥液配制和給藥方法 所有藥物均用去離子水溶解，鹽酸氟西汀給藥劑量為20 mg/kg，異槲皮苷給藥劑量為 0.3、0.6、0.9、1.5 mg/kg 4 個(gè)劑量，10%異槲皮苷蘆丁混合物劑量分別為3、6、9、18、36 mg/kg 5個(gè)劑量。所有藥物均為灌胃給藥。

2.2 小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)［5］①實(shí)驗(yàn)裝置:直徑10 cm，高20 cm的大燒杯，內(nèi)裝高10 cm的水，水溫控制在(25±1)℃左右，每次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后換水。②分組方法:每組10只小鼠，5組，共50只小鼠。灌胃給藥，給藥量0.1 ml/10 g。③實(shí)驗(yàn)方法:實(shí)驗(yàn)開始前30 min給藥，然后將小鼠放入玻璃缸中游泳6 min，記錄后4 min的不動(dòng)時(shí)間。整個(gè)過程用數(shù)碼攝像記錄，結(jié)果評(píng)判由非本實(shí)驗(yàn)人員完成，以保證結(jié)果客觀。

2.3 小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)［5］①實(shí)驗(yàn)裝置:帶有橫杠的實(shí)驗(yàn)架，橫杠距平面25 cm，小鼠懸掛在橫杠下約10 cm處，距平面15 cm。②分組方法:每組10只小鼠，5組，共50只小鼠，灌胃給藥，給藥量0.1 ml/10 g。③實(shí)驗(yàn)方法:實(shí)驗(yàn)開始前30 min給藥，然后將小鼠懸掛在橫杠上6 min。用數(shù)碼攝像記錄實(shí)驗(yàn)過程，由非本實(shí)驗(yàn)人員計(jì)算絕對(duì)不動(dòng)時(shí)間，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，比較給藥組與空白組是否有顯著差異。

2.4 小鼠自主運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)［5］使用小鼠自由活動(dòng)計(jì)時(shí)器，儀器分為4個(gè)直徑15 cm的圓柱形暗室，小鼠給藥30 min后，每個(gè)暗室放一只，儀器自動(dòng)記錄5 min內(nèi)小鼠自主運(yùn)動(dòng)情況。動(dòng)物給藥方法與劑量均與活性實(shí)驗(yàn)一致。

3 結(jié)果

3.1 自主運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 如表1所示，各給藥組小鼠的自主運(yùn)動(dòng)情況與空白組之間無顯著差異，包括陽性對(duì)照藥鹽酸氟西汀，說明實(shí)驗(yàn)結(jié)果并非所試藥物的神經(jīng)興奮性所致。

表1 各組小鼠自主運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=10， )

表1 各組小鼠自主運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=10， )

3.2 小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果 異槲皮苷和10%異槲皮苷分別進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表2，表3。

表2 異槲皮苷對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10， )

表2 異槲皮苷對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10， )

1)P ＜0.05，2)P ＜0.001;與空白組相比較。

表3 10%異槲皮苷對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10， )

表3 10%異槲皮苷對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10， )

1)P ＜0.05，2)P ＜0.001;與空白組相比較。

3.3 小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果 異槲皮苷和10%異槲皮苷分別進(jìn)行小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，異槲皮苷和10%異槲皮苷與空白相比能夠顯著降低小鼠的懸尾不動(dòng)時(shí)間，結(jié)果見表4，表5。

表4 異槲皮苷對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10， )

表4 異槲皮苷對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10， )

1)P ＜0.05，2)P ＜0.001;與空白組相比較。

表5 10%異槲皮苷對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10， )

表5 10%異槲皮苷對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10， )

1)P＜0.001;與空白組相比較。

4 討論

小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾模型，都提供了一個(gè)無可回避的壓迫環(huán)境，實(shí)驗(yàn)中小鼠所體現(xiàn)出來的不動(dòng)狀態(tài)，反映了一種被稱之為“行為絕望和扭曲(behavioral despair and variant)”或“對(duì)強(qiáng)壓環(huán)境適應(yīng)的失敗(failure to adapt to stress)”狀態(tài)［6］。這兩種行為絕望模型對(duì)絕大多數(shù)抗抑郁藥敏感，操作簡(jiǎn)單快捷，被廣泛用于該類藥物的初篩［7］。本實(shí)驗(yàn)使用這個(gè)經(jīng)典模型對(duì)異槲皮苷及10%異槲皮苷蘆丁混合物進(jìn)行了初步的抗抑郁活性篩選，發(fā)現(xiàn)了0.3、0.6 mg/kg異槲皮苷和3 mg/kg的10%異槲皮苷蘆丁混合物能夠顯著減少小鼠游泳和懸尾的不動(dòng)時(shí)間，表現(xiàn)出一定的抗抑郁作用，其活性強(qiáng)度與臨床上常使用的抗抑郁藥鹽酸氟西汀相當(dāng)。其中異槲皮苷的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致［8］，而10%異槲皮苷蘆丁混合物的抗抑郁作用則是本文首次發(fā)現(xiàn)。

大多數(shù)抑郁癥患者生物學(xué)改變是由于下丘腦-垂體-腎上腺軸激活，已證實(shí)是促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)和皮質(zhì)醇分泌過多所致。Butterweck等［9］的研究發(fā)現(xiàn)灌胃給予異槲皮苷0.6 mg/kg 2周后其循環(huán)血漿中ACTH和皮質(zhì)醇的水平下調(diào)40%～70%。有研究認(rèn)為異槲皮苷消除體內(nèi)自由基是中藥抗抑郁的部分作用機(jī)制［10］。通過以上研究結(jié)合國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，筆者推測(cè)異槲皮苷和10%異槲皮苷蘆丁混合物的抗抑郁作用機(jī)制可能如下:①抑制下丘腦-垂體-腎上腺軸多度激活，下調(diào)外周血中的ACTH和皮質(zhì)醇的水平，影響抑郁大鼠腦組織中前額葉5-羥色胺和多巴胺含量而發(fā)揮抗抑郁作用。②異槲皮苷具有一定的抗氧化、抗腫瘤和抗血小板凝集作用，從而具有一定大腦保護(hù)作用，這些作用可能與其抗抑郁作用機(jī)制有關(guān)。因此，異槲皮苷和10%異槲皮苷蘆丁混合物在抗抑郁方面具有良好的開發(fā)前景，其抗抑郁作用機(jī)制方面有待更深入的探討。

［1］Steimer W.Pharmacogenetics and Psychoactive Drug Therapy:Ready for the Patient［J］.Ther Drug Monit.2010，Aug;32(4):381.

［2］Xu C，Luo L，Tan RX.Antidepressant effect of three traditional Chinese medicines in the learned helplessness model［J］.Journal of Ethnopharmacology 2004，91:345.

［3］Zhang ZJ.Therapeutic effects of herbal extracts and constituents in animal models of psychiatric disorders［J］.Life Sciences 2004，75:1659.

［4］俞一心，戈升榮，王桂珍.槲皮素及其衍生物的藥理作用研究進(jìn)展［J］.中藥材，2003，26(12):902.

［5］徐書云，卞如濂，陳 修，等.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:226.

［6］Doe N，Takahashi T，Kiriyama M.Behavioral despair during a water maze learning task in mice［J］.Exp Anim，2010，59(2):191.

［7］Jang DP，Lee SH，Lee SY，et al.Neural responses of rats in the forced swimming test:［F-18］FDG micro PET study［J］.Behav Brain Res，2009，203(1):43.

［8］Butterweck V，Jürgenliemk G，Nahrstedt A，et al.Flavonoids from Hypericum perforatum show antidepressant activity in the forced swimming test［J］.Planta Medica 2000，66:3.

［9］Butterweck V，Hegger M，Winterhoff H.Flavonoids of St.John's Wort reduce HPA axis function in the rat［J］.Planta Med，2004，70(10):1008.

［10］黃黎明，石 鵬，孫成榮等.柴芪口服液抗抑郁作用實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)藥師，2009，12(1):44.