劉 璐，付 聰(總后豐臺(tái)綜合倉庫藥材供應(yīng)站，北京 0007;.解放軍307醫(yī)院藥劑科，北京 0007)

腸康顆粒是由黃連、烏梅、黨參、赤石脂等十一味藥材組成的復(fù)方制劑，具有健脾益腎，澀腸止瀉，溫中止痛之功效，臨床用于慢性結(jié)腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎等的治療。為控制制劑的質(zhì)量，采用薄層色譜法鑒別了腸康顆粒中的黃連和烏梅;采用高效液相色譜法對(duì)處方中的君藥黃連藥材中所含的鹽酸小檗堿進(jìn)行了含量測定，結(jié)果較滿意，為控制藥品質(zhì)量提供了依據(jù)。

1 儀器及藥品

Agilent-1200高效液相色譜儀;MWD檢測器(美國Agilent公司)。鹽酸小檗堿對(duì)照品、黃連對(duì)照藥材、熊果酸對(duì)照品均由中國藥品生物制品檢定所提供;硅膠G薄層板由青島海洋化工廠提供;液相用乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。腸康顆粒(規(guī)格∶10 g/袋;解放軍307醫(yī)院制劑室自配;批號(hào):20090525、20090526、20090527)。

2 薄層色譜鑒別

2.1 黃連薄層色譜鑒別［1，2］取本品內(nèi)容物3 g，加甲醇25 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃連對(duì)照藥材0.25 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇配成每1 ml含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方比例制成缺黃連的陰性對(duì)照樣品，同供試品溶液的制備方法，制得陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-無水乙醇-甲酸(7∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。見圖1。

圖1 黃連薄層色譜圖

2.2 烏梅薄層色譜鑒別［1，2］取本品10 g，加甲醇30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 ml使溶解，加乙醚振搖提取2次，每次20 ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)檬兔?30～60℃)浸泡2次，每次10 ml，傾去石油醚，殘?jiān)訜o水乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取熊果酸對(duì)照品，加無水乙醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方比例制成缺烏梅的陰性對(duì)照樣品，同供試品溶液的制備方法，制得陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯(20∶5∶8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。見圖2。

圖2 烏梅薄層色譜圖

3 含量測定［1～3］

3.1 色譜條件 色譜柱:Discovery?C18(5 μm，4.6 mm×250 mm)分析柱;流動(dòng)相:以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉(磷酸調(diào)節(jié)pH值至3)(30∶70)為流動(dòng)相;檢測波長為265 nm;柱溫40℃。

3.2 實(shí)驗(yàn)方法

3.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加鹽酸-甲醇(1∶100)制成每1 ml含23 μg的溶液，即得。

3.2.2 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的本品約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇(1∶100)25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用鹽酸-甲醇(1∶100)補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.2.3 陰性對(duì)照溶液 按處方比例制備缺黃連藥材的陰性對(duì)照樣品，按3.2.2項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

3.2.4 專屬性試驗(yàn) 按3.1色譜條件，分別吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各10 μl，進(jìn)樣，結(jié)果陰性對(duì)照在與鹽酸小檗堿對(duì)照品相同保留時(shí)間處，未顯示明顯色譜峰，認(rèn)為無干擾。供試品HPLC色譜圖中鹽酸小檗堿峰與雜質(zhì)峰的分離度均應(yīng)大于1.5，理論塔板數(shù)以鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。見圖3。

圖3 腸康顆粒HPLC色譜圖

3.2.5 線性范圍的考察 取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加鹽酸-甲醇(1∶100)溶解并制成每1 ml含0.223 6 mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液 0.25、0.5、1、2、4、8 ml置于10 ml量瓶中，加鹽酸-甲醇(1∶100)至刻度，搖勻。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，按正文所述色譜條件測定峰面積，以進(jìn)樣濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程?；貧w方程為 Y= －19.85+37.17 X，r=0.999 99(n=6)。結(jié)果表明:鹽酸小檗堿在5.59 ～178.88 μg/ml范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

3.2.6 樣品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取供試品(批號(hào)20090525)0.502 6 g，照上述方法制備供試品溶液，精密吸取 10 μl，分別于配制后 0、2、4、8、12、16 h依法測定，鹽酸小檗堿峰面積的 RSD為0.57%。結(jié)果表明，供試品溶液在16 h內(nèi)較穩(wěn)定。

3.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)腸康顆粒樣品(批號(hào)20090525)6份，按“供試品溶液”項(xiàng)下方法操作，結(jié)果鹽酸小檗堿的平均含量為12.61 mg/袋;RSD=0.52%(n=6);表明此法重復(fù)性良好。

3.2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的腸康顆粒樣品0.25 g(批號(hào)20090525，鹽酸小檗堿含量為1.261 mg/g)，按1∶1的比例分別加入對(duì)照品適量，按供試品溶液的制備方法制備供試液，平行試驗(yàn)6份，按上述色譜條件，測定其含量，結(jié)果其平均回收率為103.32%，RSD為1.26%?；厥章试囼?yàn)的測定結(jié)果見表1。

表1 腸康顆粒中黃連的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.2.9 樣品測定 取腸康顆粒各批次樣品，按上述方法測定，計(jì)算鹽酸小檗堿含量，結(jié)果見表2。

表2 腸康顆粒中鹽酸小檗堿含量測定結(jié)果(n=2)

由于測定樣品的批次有限，根據(jù)測定結(jié)果，暫定本品每袋含黃連以鹽酸小檗堿(C20H18ClNO4)計(jì)，不得少于 9.0 mg。

4 討論

4.1 提取溶劑與提取方法考察 在樣品的前提取處理中［1］，對(duì)稀乙醇、乙醇、甲醇、鹽酸-甲醇(1∶100)的考察結(jié)果表明，鹽酸-甲醇(1∶100)作為提取溶劑提取率最高。對(duì)冷浸法、熱回流提取法、超聲處理法的考察結(jié)果表明，超聲處理法效果較理想。此外，對(duì)超聲處理的時(shí)間進(jìn)行了考察，結(jié)果超聲處理30 min，即可以將有效成分基本提取完全。

4.2 色譜條件的選擇 選擇C18色譜柱，比較了不同商品類型的色譜柱Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)分析柱、SHIMADZU VP-ODS(250 mm ×4.6 mm;5 μm)分析柱、及 Agilent ZORBAX EXTEND-C18(250 mm × 4.6 mm;5 μm)分析柱，結(jié)果上述C18分析柱對(duì)鹽酸小檗堿的分離效果均較好［1～3］。以乙腈-0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3)(30∶70)為流動(dòng)相，可同時(shí)分離多種小檗堿型生物堿類化合物，達(dá)到了較滿意的分離效果。

4.3 檢測波長的選擇 在實(shí)驗(yàn)中，對(duì)鹽酸小檗堿對(duì)照品［2］溶液，在200～400 nm分別進(jìn)行光譜掃描，在265 nm處有最大吸收，測定靈敏度最高，故選擇其為測定波長。

［1］中國藥典2010 版.一部［S］.2005:54，213.

［2］王寶琴.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，1994:118.

［3］安登魁.現(xiàn)代藥物分析選論［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2000:781.