賈瑞波，張興哲，姜素云

(遼寧省大連市藥品檢驗所，遼寧 大連 116021)

氯化鈉作為電解質(zhì)補充藥，是氯化鈉注射液等大輸液的原料藥以及制藥工業(yè)的重要輔料，在2010年版《中國藥典(二部)》中，其仍無細菌內(nèi)毒素檢查項，而國外藥典對此均有詳細規(guī)定。筆者根據(jù)2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅪⅩM[1]的要求，參照國外藥典最新版本(EP6.0，BP2010，USP32)的標(biāo)準，對氯化鈉原料藥細菌內(nèi)毒素檢查方法進行了研究，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

DHG－9075A型電熱干燥箱(上海一恒科技有限公司);旋渦混合器(德國IKA公司);TAL－40D型試管恒溫儀(湛江安度斯生物有限公司)。氯化鈉原料藥(某廠家提供，批號分別為4100901，4100902，4100903);鱟試劑 1(TAL－1，批號為 1002080，規(guī)格為0.1 mL/支，靈敏度為 0.25 EU/mL，湛江博康海洋生物有限公司);鱟試劑 2(TAL －2，批號為 1005181，規(guī)格為 0.1 mL/支，靈敏度0.25 EU/mL，湛江安度斯生物有限公司);細菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準品(WSE，批號為150601－200862，規(guī)格為120 EU/支，中國藥品生物制品檢定所);細菌內(nèi)毒素檢查用水(BET用水，批號為1003210，規(guī)格為5 mL/支，湛江博康海洋生物有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 細菌內(nèi)毒素限值確定[2]

2010年版《中國藥典(二部)》收載的以氯化鈉為主藥的注射劑有氯化鈉注射液、濃氯化鈉注射液和復(fù)方氯化鈉注射液。根據(jù)《臨床用藥須知》及藥品說明書，其臨床用途廣泛，用法用量復(fù)雜多樣，難以準確計算出 M值(人每千克體重每小時的臨床最大用藥劑量)。對于體積在100 mL以上的復(fù)方靜脈輸液類品種，內(nèi)毒素限值一般按 0.50 EU/mL 計[2]。2010 年版《中國藥典(二部)》中氯化鈉注射液與復(fù)方氯化鈉注射液的細菌內(nèi)毒素檢查限值均為0.50 EU/mL，根據(jù)氯化鈉注射液的濃度0.9%(g/mL)計算得出，氯化鈉原料藥的細菌內(nèi)毒素限值應(yīng)小于55 EU/g。2010年版《中國藥典(二部)》中濃氯化鈉注射液的限值為25 EU/g。為保證安全用藥，對于大輸液的原料藥，限值可適當(dāng)嚴格至計算值的1/3～1/2[1]，在歐美通常以1/10～1/4作為質(zhì)量控制的監(jiān)測限值。參考歐洲藥典(EP6.0)和英國藥典(BP2010)的最新版本，均規(guī)定氯化鈉的限值為5 IU/g(1個內(nèi)毒素國際單位IU與1 EU相當(dāng))，故擬訂氯化鈉細菌內(nèi)毒素檢查的限值為5 EU/g。

2.2 鱟試劑靈敏度復(fù)核

按2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅪE的要求對鱟試劑進行了靈敏度復(fù)核，經(jīng)復(fù)核，所用鱟試劑的靈敏度測定值均在0.5 λ～2.0 λ 之間，符合規(guī)定，結(jié)果見表 1。

表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果

2.3 供試品稀釋濃度范圍計算

目前市售鱟試劑靈敏度范圍一般在0.5～0.03 EU/mL之間，則供試品溶液最大質(zhì)量濃度 Cmax=λ0.5/L=(0.5 EU/mL)/(5 EU/g)=0.1 g/mL，供試品溶液最小質(zhì)量濃度 Cmin= λ0.03/L=(0.03 EU/mL)/(5 EU/g)=0.006 g/mL。

2.4 預(yù)干擾試驗

將3批氯化鈉用細菌內(nèi)毒素檢查用水配制并稀釋成0.2，0.1，0.05，0.025，0.0125 g/mL 的系列質(zhì)量濃度，作為供試品溶液(NPC);同時每一質(zhì)量濃度下均制備含有2 λ細菌內(nèi)毒素的系列溶液;作為供試品陽性對照(PPC)，并設(shè)陽性對照和陰性對照。結(jié)果見表2。預(yù)試驗結(jié)果表明，氯化鈉溶液對鱟試劑與細菌內(nèi)毒素的反應(yīng)有抑制作用，但當(dāng)質(zhì)量濃度稀釋至0.05 g/mL以下時，其抑制作用有可能被排除。

表2 氯化鈉的預(yù)干擾試驗結(jié)果

2.5 干擾試驗

通過預(yù)試驗的結(jié)果，初步確定氯化鈉的最大不干擾質(zhì)量濃度為0.05 g/mL。將氯化鈉用細菌內(nèi)毒素檢查用水配制成0.05 g/mL的溶液作為供試品溶液，進行正式干擾試驗。使用較低靈敏度(0.25 EU/mL)的鱟試劑，盡量避免供試品所含的內(nèi)毒素對干擾試驗造成的陽性影響。用細菌內(nèi)毒素檢查用水和供試品溶液分別將細菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準品稀釋成 0.5，0.25，0.125，0.0625 EU/mL 的系列濃度，同時各系列分別以細菌內(nèi)毒素檢查用水和供試品溶液作陰性對照，依法檢查，結(jié)果見表 3。結(jié)果表明，ES均在 0.5 λ ～2.0 λ 范圍內(nèi)，且 E t均在0.5 ES～2.0 ES范圍內(nèi)。說明3個批號的氯化鈉在0.05 g/mL的質(zhì)量濃度時對鱟試劑與細菌內(nèi)毒素的反應(yīng)無干擾作用。

表3 氯化鈉的干擾試驗結(jié)果

2.6 細菌內(nèi)毒素檢查

根據(jù)干擾試驗結(jié)果和擬訂的細菌內(nèi)毒素限值5 EU/g，采用兩個廠家靈敏度為0.25 EU/mL的鱟試劑，對3個批號的氯化鈉進行細菌內(nèi)毒素檢查，依法操作[2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅪE]，結(jié)果均符合規(guī)定。結(jié)果見表4。

表4 氯化鈉的細菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果

3 討論

預(yù)干擾試驗以市售鱟試劑靈敏度計算，所得的供試液最大質(zhì)量濃度 Cmax為0.1 g/mL，但為探索氯化鈉的干擾程度，故往上兩個質(zhì)量濃度級(0.2，0.4 g/mL)進行考察。0.4 g/mL 的溶液在室溫下為過飽和，故以0.2 g/mL作為起始質(zhì)量濃度進行預(yù)干擾試驗。試驗證明，氯化鈉的最大不干擾質(zhì)量濃度為0.05 g/mL，可采用凝膠法對氯化鈉進行細菌內(nèi)毒素檢查。為提高氯化鈉注射制劑臨床使用的安全性和質(zhì)量可控性，建議在對新版《中國藥典》進行修訂時，考慮增加氯化鈉原料藥的細菌內(nèi)毒素檢查項。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄212.

[2]中國藥品生物制品檢定所.中國藥品檢驗標(biāo)準操作規(guī)范[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:310－325.