周艷秋，田 穎，高紅軍，張 楠，周云芝，王洪武

煤炭總醫(yī)院呼吸內(nèi)科，北京 100028

支氣管哮喘是由T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞等多種細(xì)胞和細(xì)胞組分共同參與的氣道慢性炎癥性疾病。在兒童及青少年中全球發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。因此，支氣管哮喘的防治仍然是呼吸科領(lǐng)域重要的研究課題。在炎癥細(xì)胞從血液轉(zhuǎn)移到氣道的過(guò)程中，趨化因子發(fā)揮著重要作用。支氣管哮喘趨化因子是一類能趨化細(xì)胞定向移動(dòng)的小分子分泌蛋白，分子質(zhì)量7～12 ku，根據(jù)N端兩個(gè)半胱氨酸的排列方式，可將趨化因子分為4類，CXC（a類趨化因子）、CC（B類趨化因子）、CX3C及C類。與哮喘發(fā)病有關(guān)的趨化因子主要是CC和CXC類[1]。胸腺和活化調(diào)節(jié)趨化因子（thymus-and activation-regulated chemokine，TARC）以及巨噬細(xì)胞衍生趨化因子（macrophage-derived chemokine，MDC）是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的CC趨化因子，在白細(xì)胞介素-1（IL-1）、TNF、LPS刺激下由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及B細(xì)胞分泌產(chǎn)生[2-3]，具有聚集嗜酸粒細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞、Th2細(xì)胞從外周血至炎癥部位的作用，參與支氣管哮喘的炎癥變態(tài)反應(yīng)。

支氣管哮喘患者抗原暴露后的肺泡灌洗液中TARC濃度增高，哮喘發(fā)作時(shí)，局部或全身TARC的表達(dá)亦均增高，急、慢性哮喘患者血漿中MDC濃度表現(xiàn)增高[4-5]。在哮喘小鼠模型，應(yīng)用抗TARC抗體可以抑制氣道過(guò)敏性亢進(jìn)、嗜酸粒細(xì)胞聚集和局部Th2型細(xì)胞因子的表達(dá)；應(yīng)用抗MDC抗體也可降低氣道過(guò)敏性、減少支氣管黏膜的嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)[6]。由此可知，MDC、TARC在哮喘的氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和氣道高反應(yīng)性的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。本研究旨在探討MDC、TARC與支氣管哮喘病密切相關(guān)的IgE、IL-5、EOS等臨床參數(shù)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2008年4月～2010年12月，將我院112例支氣管哮喘患者列為研究對(duì)象，其中，男46例，女66例；年齡22～75歲，平均53.6歲。治療前嚴(yán)重程度的分級(jí)依據(jù)全球哮喘防治創(chuàng)意（GINA指南）進(jìn)行分級(jí)，其中，輕度持續(xù)患者50例，中度持續(xù)患者 42例，重度持續(xù)患者20例；患病1～48年，平均9.8年；糖皮質(zhì)激素吸入量平均 640.7 mg/ml（0～1600 mg/ml），茶堿使用量平均326.9 mg/d（0～600 mg/d）。所有患者既往無(wú)特應(yīng)性皮炎病史。支氣管哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)2008年中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組制訂的《支氣管哮喘防治指南》。健康人群58例 （性別、年齡與支氣管哮喘患者相匹配），其中，男21例，女37例；年齡18～58歲，平均46.8歲；既往無(wú)特應(yīng)性皮炎。

1.2 方法

應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（R&D公司）檢測(cè)每例支氣管哮喘患者非急性發(fā)作時(shí)血清內(nèi)MDC、TARC、IL-5、總IgE的濃度及健康人血清內(nèi)MDC、TARC濃度。采用counter JT細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)外周血EOS。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用 Spearman′s Rank Correlation coefficient test分別評(píng)價(jià)MDC、TARC與IL-5、總 IgE、EOS的關(guān)系，應(yīng)用 Mann-Whitney U test評(píng)價(jià)MDC、TARC在哮喘患者與健康人群之間濃度的差異性。所有統(tǒng)計(jì)分析采用的是StatView 5.0 Windows版（SAS Institute Inc；Cary，NC）統(tǒng)計(jì)軟件包。 以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 支氣管哮喘患者血清中MDC濃度與總IgE水平、嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)之間的關(guān)系

應(yīng)用 Spearman′s Rank Correlation coefficient test分別評(píng)價(jià)了哮喘患者血清中MDC濃度與總IgE水平、嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)間的關(guān)系。其結(jié)果是MDC與總IgE、MDC與EOS間均表現(xiàn)為有意義地關(guān)聯(lián)，并呈正相關(guān)性（圖1、2）。

2.2 支氣管哮喘患者血清中MDC濃度與IL-5之間的關(guān)系

應(yīng)用 Spearman′s Rank Correlation coefficient test評(píng)價(jià)了支氣管哮喘患者血清中MDC濃度與在哮喘發(fā)病中發(fā)揮重要作用的IL-5之間的關(guān)系，兩者間亦表現(xiàn)有意義地關(guān)聯(lián)，呈正相關(guān)性（圖 3）。

2.3 支氣管哮喘患者血清中TARC濃度與總IgE、IL-5、嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)之間的關(guān)系

應(yīng)用 Spearman′s Rank Correlation coefficient test評(píng)價(jià)了支氣管哮喘患者血清中TARC濃度與總IgE、IL-5、嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)之間的關(guān)系，TARC與EOS間表現(xiàn)為有意義地關(guān)系，并呈正相關(guān)性（圖4）。TARC與總IgE、IL-5沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué) 意 義 的 關(guān) 聯(lián) （IgE：r=0.175，P=0.060；IL-5：r=0.189，P=0.056）。

2.4 哮喘患者非發(fā)作時(shí)血清內(nèi)MDC、TARC濃度與健康人群的比較

應(yīng)用Mann-Whitney U test評(píng)價(jià)了哮喘患者非發(fā)作時(shí)血清內(nèi)MDC、TARC濃度與健康人群間的差異，兩者間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。

表1 支氣管哮喘患者非急性發(fā)作時(shí)血清內(nèi)MDC、TARC濃度與健康人群的比較（，ng/L）

表1 支氣管哮喘患者非急性發(fā)作時(shí)血清內(nèi)MDC、TARC濃度與健康人群的比較（，ng/L）

支氣管哮喘患者健康人群P值組別 MDC 613±288533±2100.061 TARC 570±330510±2300.078

3 討論

近年來(lái)MDC/CCL22、TARC/CCL17趨化因子在免疫反應(yīng)中的作用，特別是在哮喘的氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和氣道高反應(yīng)性的發(fā)生、發(fā)展中的作用已引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注[7-8]?；颊唧w內(nèi)IgE水平影響哮喘發(fā)病是目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者統(tǒng)一的認(rèn)識(shí)[9-11]。Watanabe等[12]在對(duì)TNP-IgE轉(zhuǎn)基因小鼠的研究中發(fā)現(xiàn)IgE轉(zhuǎn)基因小鼠血清MDC水平比野生型小鼠持續(xù)性增高。同時(shí)證明了在給野生鼠給予TNP-IgE后表現(xiàn)為MDC持續(xù)性增高，推測(cè)MDC的高水平可能是由IgE介導(dǎo)的。在本研究中，112例支氣管哮喘患者非急性發(fā)作時(shí)血清中MDC濃度和IgE水平呈正相關(guān)，推測(cè)MDC和IgE間相互作用的結(jié)果可能影響支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制。同時(shí)本研究亦發(fā)現(xiàn)MDC、TARC水平與外周血嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)。嗜酸粒細(xì)胞在支氣管哮喘氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和氣道高反應(yīng)的發(fā)生、發(fā)展中的作用已得到共識(shí)[13]。本研究推測(cè)MDC、TARC可能聚集嗜酸粒細(xì)胞在支氣管哮喘患者氣道內(nèi)引起一系列氣道炎癥反應(yīng)，但兩者與嗜酸粒細(xì)胞以及IgE與MDC相互作用的詳細(xì)機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。另外本研究中MDC與IL-5亦呈正相關(guān)，支氣管哮喘的嗜酸粒細(xì)胞與細(xì)胞因子及其他炎癥因子的環(huán)狀相互作用炎癥機(jī)制已得到國(guó)內(nèi)外專家的認(rèn)同，本研究結(jié)果亦推測(cè)趨化因子MDC在支氣管哮喘的細(xì)胞因子、炎癥因子的環(huán)狀炎癥機(jī)制中可能起著重要的作用。盡管在本研究中非發(fā)作時(shí)MDC、TARC血清內(nèi)水平和健康人群間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但目前的研究已證實(shí)在哮喘發(fā)作時(shí)的血清內(nèi)、誘發(fā)痰中MDC、TARC水平增加[4-6]。本研究推測(cè)趨化因子MDC、TARC和IgE、IL-5一樣可能是支氣管哮喘重要的生物學(xué)標(biāo)志物。本研究小組在基因?qū)W、分子生物學(xué)的角度上再進(jìn)一步探討MDC、TARC與哮喘的關(guān)系以及它們?cè)谙械淖饔谩ｎA(yù)測(cè)在未來(lái)的抗哮喘藥物研發(fā)中MDC、TARC或許會(huì)成為抗炎癥反應(yīng)的靶點(diǎn)之一。

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